抗 HER2-scFv-PE35KDEL 免疫毒素对卵巢癌细胞的结合、摄取、细胞毒性及促凋亡活性评估

《Scientific Reports》：Anti-HER2 immunotoxin scFv-PE35KDEL internalizes via receptor-mediated endocytosis and induces apoptosis in ovarian cancer cells

摘要

卵巢癌仍然是全球女性癌症相关死亡的主要原因之一，这突显了研发更有效的靶向疗法的必要性。免疫毒素已成为治疗复发性及转移性卵巢癌的有前景的治疗手段。在本研究中，我们评估了一种抗HER2免疫毒素——anti-HER2-scFv-PE35KDEL的结合能力、细胞摄取、细胞毒性和促凋亡活性。该免疫毒素由针对HER2的单链可变片段（scFv）与经过改造的35 kDa长的假单胞菌外毒素A片段融合而成，其中含有KDEL序列。我们使用流式细胞术、荧光分析和荧光显微镜技术在两种卵巢癌细胞系SK-OV-3和OVCAR-3中测定了anti-HER2-scFv-PE35KDEL的结合能力和细胞摄取情况。细胞毒性通过MTT实验进行评估，而凋亡诱导则通过Annexin V/PI染色及凋亡相关蛋白的Western blot分析来确定。结果显示，与HER2表达水平较低的OVCAR-3细胞相比，anti-HER2-scFv-PE35KDEL在HER2过度表达的SK-OV-3细胞中的结合能力和细胞摄取能力显著更强，这表明其可通过受体介导的内吞作用进入细胞。氯丙嗪处理可降低该免疫毒素的细胞摄取率，提示可能涉及网格蛋白介导的内吞过程。MTT实验显示，anti-HER2-scFv-PE35KDEL对SK-OV-3细胞的毒性呈浓度依赖性，IC50值为10.90 nM；而OVCAR-3细胞的敏感性明显较低，IC50值为76.79 nM。此外，抗HER2-scFv-PE35KDEL在SK-OV-3细胞中以浓度依赖的方式诱导凋亡，并提高了Bax/Bcl-2比值。这些结果表明，anti-HER2-scFv-PE35KDEL可能对HER2过度表达的卵巢癌细胞具有更强烈的细胞毒性和促凋亡作用，为其作为潜在靶向治疗药物的进一步临床前研究提供了依据。