《Pharmaceuticals》：Niosomal Mexiletine Attenuates Rotenone-Induced Parkinsonism via Modulation of the circDLGAP4/miR-134-5p/p-CREB Axis and Restoration of Mitochondrial–Autophagic Homeostasis
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背景：帕金森病（PD）以进行性多巴胺能退变为特征，由氧化应激、神经炎症、线粒体功能障碍和自噬受损的共同作用驱动。美西律（Mexil）已显示抗氧化特性，但其减轻PD中线粒体功能障碍相关神经退行性变的潜力尚未被系统研究。研究人员采用计算与实验整合方法，首次表征Me
背景：帕金森病（PD）以进行性多巴胺能退变为特征，由氧化应激、神经炎症、线粒体功能障碍和自噬受损的共同作用驱动。美西律（Mexil）已显示抗氧化特性，但其减轻PD中线粒体功能障碍相关神经退行性变的潜力尚未被系统研究。研究人员采用计算与实验整合方法，首次表征Mexil针对Rotenone（Rot）诱导帕金森综合征的神经保护机制，并采用非离子囊泡（niosomes）作为纳米载体平台，以增强Mexil递送并提高其在PD模型中的神经保护潜力。方法：分子对接识别尼奥体Mexil神经保护潜力相关的候选分子靶点。将Sprague–Dawley雄性大鼠分配至对照、Rot及Rot加尼奥体Mexil（30和50 mg/kg）组。评估运动表现，并通过生化、组织病理学和免疫组织化学方法评估多巴胺能退变、氧化应激、神经炎症、线粒体功能障碍和自噬。结果：对接显示Mexil与磷酸化cAMP反应元件结合蛋白（p-CREB）及alpha-突触核蛋白（alpha-synuclein）均具有良好相互作用，结合分数分别为?5.2和?4.9 kcal/mol。尼奥体Mexil改善运动功能，恢复多巴胺和酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase, TH）水平，并减少alpha-synuclein蓄积。最显著的是，尼奥体Mexil作用于此前未探索的环状RNA DLGAP4（circDLGAP4）/微小RNA-134-5p（miR-134-5p）/p-CREB轴，通过磷酸化AMP活化蛋白激酶（p-AMPK）/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1-α（PGC-1α）/sirtuin-1（SIRT-1）通路促进线粒体生物发生，并重新平衡线粒体动力学。这些变化伴随自噬轴恢复以及氧化应激和炎症受抑。结论：尼奥体Mexil通过协调氧化、线粒体、自噬和炎症通路，对Rot诱导的帕金森综合征发挥神经保护作用，使其成为机制新颖的疾病修饰候选药物，值得在PD中进一步开展临床前评价。
研究背景：帕金森病（PD）以黑质多巴胺能神经元选择性丢失和纹状体多巴胺耗竭为特征，临床表现为静止性震颤、强直、运动迟缓和姿势不稳；病理上可见富含泛素和α-突触核蛋白（α-synuclein）的路易小体。其病因复杂，多数为散发性，涉及遗传易感与环境暴露交互作用；氧化应激、神经炎症和线粒体功能障碍是关键机制。现有治疗多为对症，不能有效改变或阻止疾病进展。非编码RNA（ncRNA）中，环状RNA（circRNA）可通过miRNA海绵等机制参与PD；circDLGAP4在PD模型中下调，其缺失促进线粒体功能障碍、自噬受损和凋亡，而过表达具神经保护作用；circDLGAP4可海绵吸附miR-134-5p，解除其对cAMP反应元件结合蛋白（CREB）的抑制，激活Bcl-2、PGC-1α和BDNF等下游靶点。美西律（Mexil）为IB类抗心律失常药，具抗氧化和神经保护活性，但中枢递送受限；非离子囊泡（niosomes）由非离子表面活性剂和胆固醇组成，可包载亲水/疏水药物并改善脑内递送。因此，研究人员在Rotenone（Rot）诱导的大鼠帕金森样模型中考证尼奥体Mexil的神经保护作用及其circDLGAP4/miR-134-5p/CREB与AMPK/SIRT1/PGC-1α相关机制。
研究人员开展的研究与结论：研究采用计算与实验整合策略，在Rot诱导帕金森样大鼠中评估尼奥体Mexil（30、50 mg/kg）对行为、多巴胺能标志、氧化应激、炎症、线粒体生物发生与动力学、自噬、凋亡及组织病理学的影响，并进行分子对接。结论认为尼奥体Mexil通过协调氧化、线粒体、自噬和炎症通路发挥神经保护作用，是机制新颖的疾病修饰候选药物，值得进一步临床前评价。
关键技术方法（≤250字）：研究人员采用薄膜水化法制备Mexil负载niosomes（N1–N6），以FTIR评价药物-辅料相容性，测定包封率（EE%）、粒径、ζ电位和多分散指数（PDI），用透射电镜（TEM）观察形态，透析法进行体外释放及零级、一级、Higuchi和Korsmeyer–Peppas模型拟合，并行6个月稳定性考察。动物为雄性Sprague–Dawley大鼠，设对照、Rot、Rot+尼奥体Mexil 30和50 mg/kg组；通过 cylinder 与 rotarod 评估运动，ELISA测定α-synuclein、多巴胺、氧化/炎症/线粒体/自噬指标，Western blot检测p-AMPK、MFN-1、Drp-1，RT–qPCR检测circDLGAP4、miR-34a-5p、miR-134-5p，H&E与TH免疫组化评估病理，AutoDock Vina对接CREBBP和α-synuclein。
研究结果：
2.1 Fourier Transform Infrared (FTIR)：FTIR显示Mexil HCl特征峰及负载niosomes中峰衰减/位移，提示氢键和疏水相互作用，无新峰和明显结构改变，支持Mexil成功载入且相容性良好。
2.2 Entrapment Efficiency (EE%)：EE%为58.0±1.8%至93.0±1.7%，高卵磷脂配方N4–N6显著较高；N4最高（93.0±1.7%），归因于卵磷脂、Span 60/胆固醇比例及刚性双层。
2.3 Particle Size, Zeta Potential, and Polydispersity Index (PDI)：粒径150.4±4.8至225.7±3.5 nm，ζ电位?34.5±5.29至?64.0±8.08 mV，PDI 0.393±0.02至0.956±0.10；N4粒径205.6±3.9 nm、ζ电位?60.3±8.8 mV、PDI最低，TEM示球形、粒径168–236 nm。
2.4 In Vitro Mexiletine Release from Niosomal Dispersions：释放呈初始突释后24 h持续释放，N3最高（94.5±1.2%），N4最低（87.6±2.8%），与其高EE%和刚性结构相关。
2.5 Release Kinetics and Mechanism：N1、N2、N4、N5符合Higuchi扩散控制，N3、N6符合一级动力学；N4的n=0.825，接近非Fickian松弛主导释放，支持持续基质扩散。
2.6 Storage Effect：N4在5±3°C和25±2°C存放6个月总体稳定；冷藏变化很小，室温仅粒径和PDI中度增加，仍保持高负电荷和高药物保留。
2.7 The Effect of Niosomal Mexiletine on Rotenone-Induced Motor Impairment：Rot使 rearing 降58.2%、rotarod跌落时间降85%；尼奥体Mexil 30/50 mg/kg使 rearing 增86%和1.15倍，跌落时间增3.8和5倍。
2.8 The Impact of Niosomal Mexiletine on α-Synuclein, Dopamine, and Tyrosine Hydroxylase：Rot使α-synuclein升4.8倍、多巴胺降70.3%、TH在SN和putamen降79%和79.5%；治疗使α-synuclein降33.4%/69.5%，多巴胺升1.13/2.4倍，TH升1.81/3.3倍和2.1/3.2倍。
2.9 The Attenuation Effect of Niosomal Mexiletine on Oxidative Stress Induced by Rotenone Administration：Rot使MDA升4.8倍、GSH降66.5%、SOD降69.8%；治疗使MDA降57.6%/66.7%，GSH升59.2%/1.6倍，SOD升1.12/2.11倍。
2.10 Influence of Niosomal Mexil on Inflammatory Response Induced by Rotenone Administration：Rot使TNF-α、IL-1β、IL-6分别升4.5、7.5、4.4倍；治疗使TNF-α降31.6%/73.3%，IL-1β降71.6%/38.0%，IL-6降38.6%/69.0%。
2.11 The Impact of Niosomal Mexiletine on Expression of circDLGAP-4, miR-134-5p, and p-CREB in Rotenone-Treated Rats：Rot使circDLGAP4降78.5%、miR-134-5p升2.9倍、p-CREB降74%、Bcl-2降66%；治疗使circDLGAP4升1.1/3.9倍，miR-134-5p降50.0%/73.5%，p-CREB升88%/2.1倍，Bcl-2升88%/1.9倍。
2.12 Effect of Niosomal Mexiletine on Improvement Mitochondrial Function in Rotenone-Treated Rats：Rot抑制p-AMPK/SIRT-1/PGC-1α，p-AMPK降86.7%、SIRT-1降73%、PGC-1α降63.5%，MFN-1降79.8%、Drp-1升2.45倍、ATP降70.35%；治疗使p-AMPK升3/6.3倍、SIRT-1升1.06/2.4倍、PGC-1α升49.5%/1.62倍、MFN-1升2.12/4.2倍、Drp-1降45.6%/66.3%、ATP升71%/2.25倍。
2.13 Effect of Niosomal Mexiletine on Autophagy Induction in Rotenone-Treated Rats：Rot使miR-34a-5p升4.43倍、Beclin-1降65.8%、ATG-7降74.5%、LC3II降73%、p62升4.8倍；治疗使miR-34a-5p降58.5%/76.2%，Beclin-1升69.5%/1.8倍，ATG-7升1.1/2.2倍，LC3II升93.3%/2.4倍，p62降40.6%/72%。
2.14 Niosomal Mexiletine Restored Histopathological Alteration Induced by Rotenone Administration：H&E示Rot组SNpc和putamen严重退变、胶质增生和Lewy小体，退化神经元分别升16和15.1倍；治疗使SNpc和putamen退化神经元比例降59.5%/74.8%和57.2%/83.25%，并保留神经元和纹状体纤维。
2.15 In Silico Molecular Docking Evaluation of the Mexiletine：对接经redocking验证（RMSD 1.25和1.26 ?），Mexil与CREBBP和α-synuclein结合分数为?5.2和?4.9 kcal/mol，预测其占据配体相关口袋；原文强调该结果仅为理论假设，未进行直接结合实验。
讨论总结与结论翻译：讨论认为，尼奥体Mexil的行为学恢复伴随氧化和炎症抑制、circDLGAP4/miR-134-5p/CREB轴调节、p-AMPK/SIRT1/PGC-1α激活、线粒体动力学平衡、自噬清除增强和凋亡信号降低；其作用可能部分源于Mexil抗氧化特性及niosomes递送优势。与Zhang et al.等报道一致，Rot模型出现α-synuclein蓄积、TH阳性神经元丢失和多巴胺下降。局限包括：未通过基因敲低或药理抑制建立通路间直接因果；未评估线粒体超微结构；未直接测定细胞摄取和胞内定位；缺少游离Mexil和空白niosomes对照；缺少药代、生物分布和脑穿透数据；未对N4与其他配方进行体内比较；未采用细胞特异性方法。结论翻译：总体而言，研究结果提示尼奥体Mexil通过共同调节氧化应激、炎症、线粒体功能障碍、自噬和凋亡，对Rot诱导的帕金森样神经退行性变发挥强神经保护作用；其效应与circDLGAP4/miR-134-5p/p-CREB信号上调、p-AMPK、PGC-1α和SIRT-1表达增加及细胞ATP含量升高密切相关，并似可恢复线粒体动力学和自噬能力、抑制凋亡。结果支持尼奥体Mexil在该Rot诱导模型中的神经保护潜力，其作用与相互关联的氧化、炎症和线粒体通路协调调节有关，而非单一机制靶点；但其治疗相关性仍需在互补实验模型和更全面的转化研究中验证。
