《Molecular Therapy Oncology》：Targeting Hippo-MAPK crosstalk in schwannoma: Overcoming resistance with dual inhibition
编辑推荐：
患有NF2相关神经鞘瘤病（NF2-related schwannomatosis）的患者会生长出称为神经鞘瘤的标志性肿瘤，这些肿瘤可导致麻木、疼痛、听力丧失和平衡问题。目前尚无FDA批准的神经鞘瘤药物。放疗和手术切除（可能导致神经损伤）是主要的治疗方案。神经鞘
患有NF2相关神经鞘瘤病（NF2-related schwannomatosis）的患者会生长出称为神经鞘瘤的标志性肿瘤，这些肿瘤可导致麻木、疼痛、听力丧失和平衡问题。目前尚无FDA批准的神经鞘瘤药物。放疗和手术切除（可能导致神经损伤）是主要的治疗方案。神经鞘瘤起源于携带NF2基因突变的施万细胞。功能性NF2缺失会导致多条已知在神经鞘瘤发生中起作用的信号通路失调，包括Hippo和MAPK通路。研究人员此前报道，在遗传小鼠模型中，Hippo通路失调会导致多个重现人类肿瘤特征的神经鞘瘤的发生，并且通过在这些小鼠中删除Nf1进一步激活RAS/MAPK通路会增加肿瘤负荷并降低总生存率。在此，研究人员证明，分别使用泛TEAD抑制剂和MEK抑制剂联合抑制失调的Hippo信号和MAPK激酶信号，在减缓肿瘤生长方面比单独使用任何一种抑制剂都更有效。研究结果为泛TEAD抑制剂联合MEK抑制剂组合疗法治疗神经鞘瘤的临床测试提供了支持。
一、研究背景与科学问题
NF2相关神经鞘瘤病（NF2-related schwannomatosis, NF2-SWN）是一种常染色体显性遗传病，全球发病率约为1/25000，常在青少年或成年早期发病。其特征是在神经系统内生长多个缓慢生长的肿瘤——神经鞘瘤，源于施万细胞（Schwann cells）。这些肿瘤可引起麻木、无力、慢性疼痛，并可能压迫重要器官导致功能障碍。NF2-SWN的标志性表现是双侧前庭神经鞘瘤（vestibular schwannomas, VS）的发生，最终导致耳聋。目前，临床上已有多种药物尝试治疗神经鞘瘤但均告失败：依维莫司（everolimus）未能达到主要终点；EGFR抑制剂厄洛替尼（erlotinib）和拉帕替尼（lapatinib）结果不一；贝伐珠单抗（bevacizumab）虽显示一定疗效但伴随不良事件。因此，目前尚无FDA批准的药物用于治疗神经鞘瘤，手术切除和放疗仍是标准疗法，但这些治疗常导致神经损伤。
NF2-SWN相关的神经鞘瘤携带NF2基因失活突变。NF2编码肿瘤抑制因子Merlin，其功能丧失导致多条关键信号通路失调，包括mTORC1、WNT、MAPK和Hippo通路。研究人员先前发现，在Hoxb7-Cre驱动下删除Lats1/2（H7;Lats1/2mut3）导致Hippo通路失调，足以诱发小鼠产生多个具有人类神经鞘瘤所有组织学和分子特征的外周神经肿瘤。同时，引入Nf1缺失增强MAPK信号显著增加了肿瘤负荷并降低了总生存率，表明MAPK通路是神经鞘瘤发生的修饰因子。
由于YAP/TAZ不具备DNA结合域，它们通过与TEAD转录因子家族（transcriptional enhanced associated domain, TEAD）相互作用来调控基因转录。TEAD包含四个旁系同源转录因子（TEAD1-4），具有广泛且重叠的表达模式。研究人员此前发现，在H7;Lats1/2mut3小鼠中单独敲低YAP或TAZ不足以减小肿瘤大小，很可能是因为两者可以相互代偿。此外，有报道称YAP/TAZ失活可能导致NF2缺陷肿瘤中溶酶体介导的MAPK信号代偿性激活。与此一致，研究人员观察到，在使用JQ1（一种抑制YAP/TAZ转录活性关键辅因子BRD4的药物）处理H7;Lats1/2mut3神经鞘瘤细胞后，磷酸化ERK水平升高，提示MAPK通路的代偿性激活。
基于这一发现，研究人员推断，同时靶向失调的Hippo信号和MAPK通路信号的联合疗法可能比单独使YAP/TAZ失活更有效地治疗神经鞘瘤。本研究旨在验证这一假说。
二、研究方法概述
研究人员利用H7;Lats1/2mut3基因工程小鼠模型产生的神经鞘瘤原代细胞进行体外实验，评估了新型泛TEAD抑制剂SW-682（TEADi）与MEK抑制剂米达美替尼/PD0325901（MEKi）单药及联合用药的效果。体内实验采用异种移植小鼠模型：将稳定表达萤火虫荧光素酶的神经鞘瘤细胞皮下接种于雌性裸鼠肩部，待肿瘤直径达5-10mm后将小鼠随机分为四组，分别给予溶剂对照、TEADi（30mg/kg，每日一次口服）、MEKi（2mg/kg，每日一次口服，每周五天）或联合用药，持续四周。通过生物发光成像、卡尺测量肿瘤体积和肿瘤重量评估疗效。采用免疫组化（IHC）检测磷酸化ERK（p-ERK）和Ki67表达，Western blot检测信号通路蛋白变化，RT-qPCR检测YAP/TAZ下游靶基因表达。
三、主要研究结果
1. 米达美替尼/PD0325901在体外使神经鞘瘤细胞对泛TEAD抑制敏感
研究发现，单独使用TEADi处理原代神经鞘瘤细胞的IC50为5.2μM。加入0.5μM、1μM或1.27μM的MEKi后，IC50分别降至4.3μM、827nM和314nM，呈剂量依赖性。在细胞增殖实验中，四种不同浓度的TEADi加MEKi组合均比任一单药更显著地减缓神经鞘瘤细胞增殖。值得注意的是，TEADi单药在培养第3天至第5天显示出显著的增殖抑制作用，但这种抑制在第6天被克服，可能是由于MAPK信号代偿性增加所致。
Western blot分析显示，TEADi处理增加了磷酸化ERK（p-ERK）表达，证实了Hippo通路抑制导致MAPK通路的代偿性上调。联合治疗24小时后，凋亡标志物cleaved PARP和cleaved caspase-3显著上调，而磷酸化组蛋白H3（p-H3）下调，表明联合治疗促进凋亡并阻滞细胞周期。RT-qPCR结果显示，TEADi显著抑制Ccn1/Cyr61 mRNA表达，而MEKi诱导其上调；联合治疗则将其恢复至接近基础水平。Ccn2/Ctgf的表达模式不同，TEADi对其影响较小，即使在联合治疗后仍显著升高，提示其部分受TEAD非依赖机制调控。
2. 米达美替尼/PD0325901在异种移植小鼠模型中使神经鞘瘤细胞对TEAD抑制敏感
体内实验显示，各组小鼠体重稳定维持，表明单药和联合治疗均无毒性。生物发光成像、大体成像和肿瘤体积测量均显示，治疗组肿瘤小于对照组。虽然联合治疗组的肿瘤体积在卡尺测量中未显著小于TEADi单药组，但在收获肿瘤后，无论是肉眼观察还是肿瘤重量测量，均清楚显示联合治疗（TEADi加MEKi）是最有效的抑制肿瘤生长方案。
3. 联合治疗减少异种移植小鼠神经鞘瘤细胞增殖
免疫组化分析显示，p-ERK在溶剂对照组和TEADi单药组呈现明显的局灶性簇状高表达模式，而MEKi单药或联合治疗有效消除了这些p-ERK信号簇。Ki67染色显示，联合治疗组的Ki67阳性率最低，表明同时抑制Hippo和MAPK通路时细胞增殖受到最强抑制。RT-qPCR分析显示，联合治疗组中YAP/TAZ靶基因Ccn1/Cyr61和Ccn2/Ctgf表达降低。此外，cleaved caspase-3免疫组化显示，MEKi单药组凋亡指数最高，而TEADi单药和联合治疗组的凋亡指数与对照组相当，提示TEADi为主的治疗方案主要通过强效的细胞抑制效应而非凋亡来实现最佳的肿瘤控制。
四、讨论与结论
本研究表明，Hippo与MAPK信号通路之间存在代偿性串扰。MEK抑制导致YAP/TAZ转录活性大幅上调，而TEAD抑制则导致MAPK通路活性增加。尽管联合治疗显著延缓了肿瘤生长，但在第21天左右观察到肿瘤大小开始缓慢增加，提示可能出现了获得性耐药。
研究局限性包括：（1）所使用的H7;Lats1/2mut3模型中Nf2缺失并非主要致癌驱动因素，导致肿瘤表型比典型的人类神经鞘瘤更具侵袭性；（2）仅使用了来源于小鼠模型的一种神经鞘瘤细胞系，需要在其他模型和人类组织样本中验证；（3）虽然MEK抑制剂已获FDA批准，但泛TEAD抑制剂尚未获批，不过其正在一项针对晚期实体瘤的多中心1a/1b期临床试验（NCT06251310）中进行测试。
结论翻译： 尽管靶向Hippo通路存在内在复杂性，包括YAP/TAZ和TEAD的功能冗余以及TEAD非依赖调控机制的存在，本研究的体外和体内实验支持联合治疗的潜力，显示其在减缓肿瘤生长方面优于单药治疗，这很可能是通过诱导凋亡和抑制增殖实现的。未来研究需深入探索这些复杂的调控网络，以开发更全面的治疗方法来克服代偿和冗余机制，最终为Hippo通路失调驱动的癌症提供更有效的治疗策略。
