TLR9-MyD88-TRAF6信号通路介导肝血管瘤射频消融后线粒体DNA诱导的全身性炎症反应，Merlin作为下游参与因子参与该过程

《International Immunopharmacology》：TLR9–MyD88–TRAF6 signaling mediates mitochondrial DNA–induced systemic inflammatory response after radiofrequency ablation of hepatic hemangioma, with Merlin as a downstream participant

　　• 射频消融术（RFA）引起的SIR发展过程中，线粒体DNA（mtDNA）的释放增强• mtDNA通过激活TLR9介导的炎症反应促进SIR的发展• TLR9沉默可减轻肝血管瘤RFA治疗后的SIR• TLR9-MyD88-TRAF6通路介导SIR的发展，其中Merlin作为下游参与者发挥作用引言肝血管瘤是最常见的肝脏良性肿瘤，发病率在0.4%至20%之间[1]。肝血管瘤在女性中更为常见，女性与男性之比约为5:1 [1]。大多数肝血管瘤患者无明显症状，通常通过体格检查或偶然发现[2]。有症状的肝血管瘤可表现为腹痛、腹胀和梗阻性黄疸，可能是由于肿瘤生长刺激肝包膜或压迫周围器官所致[3]。对于直径≥5 cm且呈进展性生长趋势者，或出现症状进展者，通常需要进行积极治疗[4]。射频消融（RFA）近年来已被广泛用作肝血管瘤的有效替代治疗手段[5]。RFA是治疗肝血管瘤的一种安全、可行且有效的方法[6]、[7]；然而，其并发症不容忽视。根据并发症的病因，其主要并发症被分为技术相关、溶血相关和全身炎症反应（SIR）综合征相关三类[8]。SIR综合征是肝血管瘤RFA治疗后常见的并发症，可导致心肌功能障碍和器官功能障碍等严重并发症[8]、[9]。在肝血管瘤RFA过程中，消融对肿瘤内皮细胞造成的持续损伤以及红细胞的破坏导致炎症细胞因子的释放，这些因子随消融产生的热量持续进入血液循环。这解释了术后SIR综合征发生发展的主要原因[10]、[11]。然而，很少有研究探讨肝血管瘤RFA后SIR的分子机制。新兴证据表明，SIR综合征可由线粒体损伤触发[12]。线粒体是具有多种功能的细胞器，负责协调各种重要的生命活动。当机体受到有害刺激时，线粒体损伤后释放的损伤相关分子模式（DAMPs）通过与Toll样受体（TLR）等模式识别受体结合，触发炎症反应[13]、[14]。存在于细胞质和胞外环境中的线粒体DNA（mtDNA）作为DAMP发挥功能，触发TLR9诱导的炎症反应[15]。在病理性细胞损伤和应激信号下，mtDNA与TLR9的结合似乎可启动炎症和自身免疫性疾病[16]。本研究探讨mtDNA/TLR9轴在肝血管瘤RFA治疗后SIR发展中的作用及其可能的调控机制。为此，我们建立了小鼠原位肝血管瘤模型并接受RFA治疗，结果显示mtDNA释放和TLR9表达均增加。mtDNA释放增加通过激活TLR9触发SIR，而TLR9沉默可显著减轻肝血管瘤RFA治疗后的SIR。既往研究已证明血红蛋白参与SIR的发展[11]。此外，在RFA过程中，部分由消融产生的热量进入血液循环，而热量进入血液循环后首个靶器官是肺毛细血管[17]。因此，我们进一步在血红蛋白刺激的人肺微血管内皮细胞（HLMVECs）中探讨mtDNA/TLR9轴在SIR发展中的分子机制。本研究有望为肝血管瘤RFA后SIR的机制与潜在靶点提供新的见解。章节摘要细胞培养与处理HLMVECs购自ProCell系统（#CP-H001，中国武汉，https://www.procell.com.cn/p/human-pulmonary-microvascular-endothelial-cells-cp-h001-70049）。C57BL/6小鼠心脏的转化内皮细胞系（H5V）[18]（RRID:CVCL_AZ87）由吴宇飞博士的博士后及郑雷民教授惠赠[19]。细胞在添加10% FBS、100 μg/mL链霉素和100 U/mL青霉素的DMEM高糖培养基中培养，于37 °C培养箱中肝血管瘤RFA治疗触发SIR及mtDNA释放为探讨RFA对SIR的可能影响，我们构建了原位肝血管瘤模型并接受RFA治疗。通过组织病理学染色及肝肿瘤包膜的CD31阳性染色证实小鼠肝血管瘤模型成功建立（图1A-B）。经RFA治疗模拟人血管瘤消融后，我们发现血清炎症细胞因子水平升高，包括IL-18、IL-1β、IL-6和讨论RFA是治疗肝血管瘤的一种创伤小、安全性良好的有效替代治疗[5]。RFA的原理是消融针直接穿刺血管瘤组织，通过射频电流产生足够的热量以破坏肿瘤内组织，造成广泛的血管损伤和血栓形成，导致肿瘤组织凝固性坏死和缩小，从而发挥治疗效果。血管内皮细胞是作者贡献声明Ruize Gao：撰写——初稿，数据整理。Shilun Wu：形式分析。Beibei Zeng：形式分析。Ning Li：形式分析。Jun Gao：形式分析。Shaohong Wang：撰写——审阅与编辑，获取研究经费，概念构思。患者同意发表声明不适用。伦理审批与参与同意本研究按照ARRIVE指南开展，并获首都医科大学附属北京朝阳医院实验动物伦理委员会批准（编号：2025-D-242），实验依据《英国动物（科学程序）法》（1986年）及相关指南以及欧盟2010/63/EU动物实验指令执行。资助来源本研究由北京自然科学基金（编号：7222069）资助。利益冲突声明作者声明不存在可能影响本文工作的已知竞争性经济利益或个人关系。致谢感谢首都医科大学附属北京朝阳医院提供实验场地和环境。Ruize Gao|Shilun Wu|Beibei Zeng|Ning Li|Jun Gao|Shaohong Wang