《Frontiers in Pediatrics》：Analysis of early haematological warning indicators for drug-resistant Mycoplasma pneumoniae infection
编辑推荐：
目的：本研究旨在调查携带2063/2064突变的肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae, MP）感染患儿的血液学变化，为早期识别耐药MP提供临床参考。
方法：对2024年在本院经核酸检测确诊为MP感染的161例患儿及27例健康对照进行回顾性研究
目的：本研究旨在调查携带2063/2064突变的肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae, MP）感染患儿的血液学变化，为早期识别耐药MP提供临床参考。
方法：对2024年在本院经核酸检测确诊为MP感染的161例患儿及27例健康对照进行回顾性研究。根据2063/2064突变状态，将MP组分为未检出突变组（n=27）和检出突变组（n=134）。比较诊断时的血液学参数和炎症指标。对64例具有完整配对数据的检出突变患者，分析了从初诊到诊断期间的动态变化。其他分析包括Bootstrap重抽样、事后（post-hoc）效能评估、探索性ROC分析、Logistic回归及住院分层敏感性分析。
结果：在检出突变组与未检出突变组之间，临床特征或诊断时的血液学及炎症指标均无显著差异（所有p>0.05）。在64例具有完整配对测量的检出突变患者中，单核细胞与淋巴细胞比值（monocyte-to-lymphocyte ratio, MLR）从初诊时的0.32（0.24, 0.48）下降至诊断时的0.27（0.19, 0.37）（p=0.004）。在按住院分层的分析中，这一下降在住院患者中显著，但在非住院患者中不显著。探索性ROC分析显示，MLR的变化方向（AUC=0.508, 95% CI 0.344–0.672）及其绝对幅度（AUC=0.523, 95% CI 0.349–0.699）的区分能力均有限。
结论：静态的血液学参数和炎症指标无法区分检出突变与未检出突变的MP感染。尽管在检出突变亚组中MLR随时间下降，但ROC分析和分层分析表明，单独使用该变化时区分性能有限，且可能受到住院相关的临床因素影响。因此，动态MLR变化应被视为一个需要前瞻性验证的探索性标志物。
研究背景与目的
肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae, MP）是学龄前及学龄期儿童社区获得性肺炎的重要病原体，约占儿童社区获得性肺炎病原体的10%–40%，每3–7年出现一次周期性流行。其致病机制涉及P1蛋白介导的黏附及膜表面脂质相关膜蛋白诱导宿主产生促炎细胞因子，进而导致体液和细胞免疫紊乱及多系统器官损伤。与大环内酯类耐药相关的难治性肺炎支原体肺炎患儿，发热持续时间更长，并发症更多。目前认为MP耐药的主要机制是其23S rRNA基因V区（2063/2064位点）的点突变，降低了抗生素亲和力。临床上亟需一种在门诊即可方便获得的早期识别耐药感染的方法。血常规分析是最易被接受且创伤最小的检查手段，因此本研究旨在探讨能否通过血液学和综合炎症指标早期识别耐药MP感染，重点分析单核细胞与淋巴细胞比值（monocyte-to-lymphocyte ratio, MLR）的动态演变趋势，为早期合理用药和减少重症并发症提供依据。
研究方法
研究人员采用回顾性病例分析方法。研究对象来源于2024年1月至12月期间某医院就诊的患儿，MP感染组纳入标准为呼吸道病原体核酸检测阳性且同时检测了2063/2064突变位点、年龄≤14岁且临床资料完整的患儿，共161例；正常对照组为同期体检或激发试验的健康儿童，共27例。排除标准包括合并其他呼吸道病原体感染或临床实验数据缺失者。根据突变检测结果，将MP感染组进一步分为未检出突变组（敏感组，n=27）和检出突变组（耐药组，n=134）。样本量估算基于前期预实验数据，设定α=0.05、1-β=0.8，效应量约为0.51（Cohen's d），计算得出每组至少需25例，本研究各组样本量均满足此要求。研究收集了初诊和确诊两个时间点的外周血或静脉血数据，观察指标包括白细胞计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、单核细胞计数、超敏C反应蛋白（high-sensitivity C-reactive protein, hs-CRP）、中性粒细胞与淋巴细胞比值（neutrophil-to-lymphocyte ratio, NLR）、MLR及全身免疫炎症指数（systemic immune-inflammation index, SIRI）。统计方法包括Mann-Whitney U检验、Wilcoxon符号秩检验、卡方检验、Bootstrap重抽样（20,000次迭代）、事后效能评估、探索性ROC分析、二元Logistic回归及住院分层敏感性分析。
研究结果
1. MP感染组与正常对照组一般特征及血液学参数比较
两组性别分布无显著差异，但MP感染组中位年龄显著低于正常对照组（7岁 vs. 9岁，p=0.001）。与正常对照组相比，MP感染组的白细胞计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、单核细胞计数及hs-CRP水平均有显著差异（所有p<0.05），符合感染临床表现。从首次就诊到确诊的时间间隔在两组间无统计学差异。
2. MP感染组内检出突变组与未检出突变组一般资料比较
两组在性别、感染年龄、就诊次数、采血次数、确诊时发热天数、住院率及确诊时间方面均无显著差异（所有p>0.05）。
3. 检出突变组与未检出突变组确诊时血液学及炎症指标比较
确诊时，两组在白细胞计数、淋巴细胞计数、中性粒细胞计数、单核细胞计数、NLR、MLR、SIRI及hs-CRP方面均无显著差异（所有p>0.05）。
4. 检出突变组不同时间点指标的动态变化
在64例具有完整配对数据的检出突变患者中，MLR从初诊时的0.32（0.24, 0.48）显著下降至确诊时的0.27（0.19, 0.37）（p=0.004）。白细胞计数、淋巴细胞计数、中性粒细胞计数、单核细胞计数、NLR、SIRI及hs-CRP均未见显著配对变化。
5. 未检出突变组不同时间点指标的动态变化
未检出突变组的所有血液学及炎症指标在初诊与确诊间均无显著差异。
6. Bootstrap与事后效能分析
Bootstrap重抽样（20,000次迭代）得出的配对差异均值95%置信区间包含零，未能独立证实非零的均值配对差异。NLR、MLR、SIRI及hs-CRP的事后效能均远低于0.80，提示组间阴性结果可能受统计效能不足影响。
7. MLR变化的探索性ROC分析
MLR差值（MLR1，确诊值减初诊值）的AUC为0.508（95% CI 0.344–0.672），最佳截断值为≤-0.040，灵敏度57.8%，特异度58.8%。MLR差值的绝对值（MLR2）的AUC为0.523（95% CI 0.349–0.699），最佳截断值为≤0.220，灵敏度85.9%，特异度29.4%。两者AUC均接近0.5，表明单独使用时区分性能有限。
8. 年龄和MLR与突变检出状态的关联
二元Logistic回归模型中，年龄和确诊时MLR均与突变状态无独立关联。
9. 住院分层与探索性多变量分析
在64例具有完整配对MLR数据的检出突变患者中，住院亚组（n=49）的MLR从初诊的0.35（0.24–0.47）显著下降至确诊的0.30（0.19–0.34）（p=0.004），而非住院亚组（n=15）的MLR变化无统计学意义。探索性多变量分析中，性别、年龄、住院状态、ΔMLR、ΔCRP及确诊前发热天数均未达到统计学显著性。
讨论与结论
讨论部分指出，本研究的核心发现并非MLR可用于诊断耐药，而是在临床异质性较高的亚组中观察到其适度的时序变化。静态的血液学指标和炎症复合指标（NLR、MLR、SIRI）在确诊时无法区分突变检出与否，这可能是因为这些指标反映的是系统性炎症状态，而非直接体现导致大环内酯类药物敏感性降低的分子机制。纵向分析显示，在检出突变亚组中MLR随病程下降，但这种变化局限于有完整配对数据的子集，且未在未检出突变组中观察到相应差异。后续的Bootstrap、ROC、回归及住院分层分析均表明，该变化的幅度、区分性能和特异性有限，群体水平的统计学差异并未转化为有用的个体水平分类能力。住院分层结果显示MLR下降主要由住院患者驱动，提示疾病严重程度、治疗干预等因素可能共同影响了这一变化轨迹。因此，研究人员强调，MLR的动态变化不应作为独立的预警或诊断指标，而应被视为描述炎症病程的一部分，其解读需结合发热时长、影像学、住院状态及其他炎症标志物等临床变量。未来需要在更大规模的前瞻性队列中，结合平衡的突变分组、标准化的严重度和治疗数据，评估将MLR动态变化加入预设的多变量模型是否能改善区分能力。
研究结论部分翻译如下：在该队列中，静态的血液学参数和炎症指标无法区分检出突变与未检出突变的MP感染。在具有配对测量的检出突变患者中，MLR随时间下降，但ROC分析显示单独使用该变化时区分性能较差。该下降在住院患者中观察到，而在非住院患者中不显著，提示严重程度、治疗或其他临床因素可能有所贡献。连续的MLR测量可能描述了部分炎症过程，但目前证据不支持将其作为大环内酯类耐药的独立预警或诊断指标。需要进行前瞻性研究，包括平衡的突变分组、标准化的严重度和治疗数据以及两组的配对采样。在临床应用前，应评估将MLR动态变化与临床变量及其他炎症标志物相结合的模型。
