褶纹冠蚌中一种新型FADD的功能表征揭示其在凋亡级联反应和抗菌免疫中的调控作用

《Marine Biotechnology》：Functional Characterization of a Novel FADD from Anodonta woodiana Reveals Its Regulatory Roles in Apoptotic Cascades and Antibacterial Immunity

摘要

Fas相关死亡域蛋白（FADD）是死亡受体诱导的凋亡信号通路中的核心保守接头蛋白，在脊椎动物的凋亡和固有免疫中发挥着至关重要的作用。然而，FADD在无脊椎动物尤其是双壳类软体动物中的功能仍不明确。本研究从双壳类软体动物河蚬（Anodonta woodiana）中鉴定并功能表征了一种新的软体动物FADD同源物（AwFADD）。AwFADD蛋白由232个氨基酸组成，含有两个保守功能域：N端死亡效应域（DED）和C端死亡域（DD）。组织表达谱分析显示，AwFADD在所有检测的组织中均有广泛表达，其中在肝胰腺和血细胞中表达最为丰富。经气单胞菌（Aeromonas hydrophila）或脂多糖（LPS）刺激后，河蚬血细胞中AwFADD mRNA表达上调，提示其可能参与宿主的抗菌反应。通过RNA干扰沉默AwFADD后，AwCaspase-8/-3的表达被抑制，而在气单胞菌感染条件下，血细胞中MyD88依赖性通路基因及下游免疫相关效应因子的转录水平则显著增强。亚细胞定位分析表明，AwFADD主要定位于HEK293T细胞的细胞质中。双荧光素酶报告基因检测进一步显示，在基础条件下，AwFADD过表达以剂量依赖的方式增强了NF-κB和AP-1的激活，但抑制了MyD88介导的NF-κB/AP-1信号通路的激活。这些发现表明，AwFADD可能是河蚬中一个重要的双功能调节因子，整合凋亡级联反应的激活与MyD88依赖性抗菌免疫反应。