《Research and Practice in Thrombosis and Haemostasis》：Alternative Lys277 cleavage modulates tissue plasminogen activator processing and fibrinolysis
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摘要背景组织型纤溶酶原激活物（tPA）以单链酶的形式分泌，通过Arg275处的裂解转化为其经典的二链形式。相邻的Lys277残基是否参与tPA的激活及纤溶功能目前尚不清楚。目的确定Lys277是否能作为替代的tPA裂解位点，以及Lys277依赖的加工是否与纤溶活性的改变有关。
摘要
背景
组织型纤溶酶原激活物（tPA）以单链酶的形式分泌，通过Arg275处的裂解转化为其经典的二链形式。相邻的Lys277残基是否参与tPA的激活及纤溶功能目前尚不清楚。
目的
确定Lys277是否能作为替代的tPA裂解位点，以及Lys277依赖的加工是否与纤溶活性的改变有关。
方法
我们将645种有颌类物种的PLAT序列系统发育分析、针对Arg275和/或Lys277的重组人源tPA突变体工程改造、纤溶酶及血浆裂解测定、Edman测序、氨肽解及纤维蛋白-纤溶酶原酶谱分析、血浆血栓溶解测定以及旋转血栓弹力测量相结合。
结果
Arg275在物种间高度保守，而携带Arg275替换的物种几乎均保留了Lys277；蛇类仅含有Lys277位点。纤溶酶在Arg275-Ile276处裂解野生型tPA，而Arg275突变型tPA则在Lys277-Gly278处被裂解；两个残基同时突变均阻止二链形式的形成。与单链野生型tPA相比，Arg275单突变体将富含纤维蛋白的血浆血凝块50%溶解时间缩短了1.9至2.4倍，并加速了血凝块的纤溶。人血浆可从野生型和Arg275突变型tPA中产生tPA重链片段，但不能从Arg275/Lys277双突变体中产生，表明在血浆条件下两个位点均发生裂解。富含Lys277裂解型tPA的制剂比Arg275裂解型tPA显示出更强的血凝块溶解作用，校正后的纤溶速度最高高出2.8倍。
Simon Lebatard|Laurent Lebouvier|Yannick Hommet|Anne Ciavatti Belpois|Sacha Ahuir|Viviane A. Bastos|Solenne Chardonnet|Donna Pinheiro|Robert L. Medcalf|Sara Martinez de Lizarrondo|Richard Macrez|Denis Vivien
