《Veterinary Sciences》：Exploratory Evaluation of Refractometric, Biochemical, and Body Weight Change Parameters for Diagnosing Failure of Passive Transfer in Puppies
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新生犬的被动免疫失败（failure of passive transfer, FPT）是影响其存活率的重要因素。目前，可作为血清免疫球蛋白G（immunoglobulin G, IgG）检测替代方案的实用间接指标尚未得到充分验证。本研究为一项探索性研究，共纳
新生犬的被动免疫失败（failure of passive transfer, FPT）是影响其存活率的重要因素。目前，可作为血清免疫球蛋白G（immunoglobulin G, IgG）检测替代方案的实用间接指标尚未得到充分验证。本研究为一项探索性研究，共纳入76只日龄为48 ± 4小时的土耳其坎高犬幼犬，这些幼犬出生于12只母犬（平均月龄40.2个月）。以酶联免疫吸附试验（ELISA）测定的血清IgG为参考方法，将IgG浓度低于2.3 g/L定义为FPT。研究人员将全血、新鲜血清及冻融血清的Brix值，与血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、γ-谷氨酰转移酶（gamma-glutamyl transferase, GGT）、犬细小病毒（canine parvovirus, CPV）抗体水平及从出生至采样时体重的百分比变化一同纳入受试者工作特征（receiver operating characteristic, ROC）曲线分析。研究共识别出6只（7.9%）FPT幼犬。总蛋白、球蛋白和体重百分比变化的曲线下面积（area under the curve, AUC）分别为0.986、0.981和0.948，其对应的截断值视为探索性结果，三者均能检出全部6例FPT病例，特异度为82.9%–94.3%。新鲜血清Brix值显示出中等区分能力（AUC：0.771），而全血Brix值结果不具结论性（AUC：0.432）。总蛋白、球蛋白及早期体重变化是检测FPT具有前景的筛查指标。然而，由于病例数量有限，这些截断值在临床应用前需在更大规模人群（包括其他品种）中加以验证。
一、研究背景与问题
犬的围产期是生理适应与死亡风险显著升高的关键阶段。死产和早期新生期死亡与品种、窝产仔数、母犬年龄及分娩条件等多种因素相关。低出生体重与出生后最初两天的死亡风险增加有关，而出生后48小时内体重增长不足则与断奶前的损失相关。由于犬经胎盘传递IgG的能力有限，新生幼犬主要通过出生后摄入初乳获得母源IgG。当初乳摄入过晚或不足、初乳免疫球蛋白含量不足，或肠道吸收功能在有限通透期内受损时，可能发生被动免疫失败。在犬中，约2日龄时血清IgG浓度低于2.3 g/L被定义为FPT的临床相关阈值。尽管IgG测定仍是主要的参考方法，但ELISA检测需要实验室基础设施、试剂和较长的分析时间，限制了其在分娩现场的快速个体决策应用。因此，有必要探索不直接测定IgG但随初乳摄入而变化的间接指标。本研究旨在比较全血、新鲜血清和冻融血清Brix值，以及血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、GGT浓度、CPV抗体水平和出生后48 ± 4小时体重百分比变化对FPT的诊断性能，并以ELISA测定的血清IgG浓度和2.3 g/L阈值作为参考标准。
二、研究设计与主要结论
研究于2026年4月至8月间开展，样本来自安卡拉及周边地区的私人饲养犬和持证繁殖机构。研究对象为48 ± 4日龄、自然分娩且无并发症的土耳其坎高犬幼犬，最终纳入76只来自12只母犬的幼犬，其中3只母犬为初产，9只为经产。所有母犬均常规接种包含CPV-2保护的年度多价犬用疫苗。每只幼犬在出生后、首次摄入初乳前使用校准电子秤称重，第二次称重与48 ± 4日龄采血同时进行。研究以ELISA测定的血清IgG浓度作为被动转移状态的参考指标，IgG < 2.3 g/L判定为FPT。主要待检指标为全血、新鲜血清和冻融血清的Brix值，同时将绝对和百分比体重变化、血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、GGT值及CPV抗体结果作为次要间接标志物进行评估。研究结果显示，76只幼犬中有6只（7.9%）被判定为FPT。FPT组血清IgG中位数为1.62 g/L，正常被动转移组为18.18 g/L。总蛋白和球蛋白在两组间差异最大：正常组总蛋白中位数为5.51 g/dL，FPT组为3.90 g/dL；球蛋白分别为3.22 g/dL和1.14 g/dL。早期体重变化在两组间差异显著，正常组中位体重增长81.0 g（14.84%），FPT组仅增长14.0 g（2.43%）。CPV抗体检测值在FPT组也较低（中位数271.9 vs. 1869.4）。在各项指标中，总蛋白对FPT的区分能力最佳（AUC 0.986），球蛋白次之（AUC 0.981），体重百分比变化AUC为0.948。探索性截断值分别为总蛋白≤4.15 g/dL、球蛋白≤1.80 g/dL、体重变化≤8.27%、CPV抗体检测值≤761.0，四个截断值均提供100%灵敏度，特异度分别为92.9%、94.3%、82.9%和72.9%。新鲜血清Brix的AUC为0.771，冻融血清Brix为0.694，全血Brix为0.432，后者结果不具结论性。GGT的AUC为0.721，截断值≤31.5 U/L时提供66.7%灵敏度和92.9%特异度。三种折射测量之间的平均差异较小，但新鲜血清与冻融血清Brix的一致性限（?1.06至1.24）宽于FPT组与正常组新鲜血清Brix中位数之差（7.35% vs. 7.95%），提示冻融可能影响个体分类结果。
三、关键技术方法
本研究采用的主要技术方法包括：以商业ELISA试剂盒定量测定血清总IgG浓度作为参考方法；使用同一数字Brix折射仪分别对全血、新鲜血清和冻融血清进行折射测量；使用自动化生化分析仪测定血清总蛋白、白蛋白和GGT，球蛋白由总蛋白减白蛋白计算得出；采用ELISA试剂盒测定CPV-2抗体水平；使用校准电子秤在出生时和48 ± 4日龄进行两次称重并计算体重变化。样本来自安卡拉及周边地区私人饲养犬和持证繁殖机构的76只土耳其坎高犬幼犬。
四、研究结果
（一）FPT检出率与分组特征
以ELISA血清IgG < 2.3 g/L为参考定义，76只幼犬中有6只被判定为FPT（7.9%；95% CI，3.0–16.4%），70只（92.1%）为正常被动转移。6只FPT病例来自三窝：一窝3只、一窝2只、一窝1只。FPT组血清IgG中位数为1.62 g/L，正常组为18.18 g/L。FPT在雌性中占11.4%（4/35），雄性中占4.9%（2/41），未发现性别相关差异。CPV-2抗体达到保护水平的比例在FPT组（2/6，33.3%）低于正常组（58/70，82.9%）。
（二）早期体重变化
早期体重变化在两组间差异显著。正常被动转移组中位体重增长81.0 g（14.84%），FPT组仅增长14.0 g（2.43%）。血清IgG与体重百分比变化呈中等正相关（Spearman's ρ = 0.598，p < 0.001）。
（三）总蛋白与球蛋白
总蛋白和球蛋白在两组间差异最大。正常组总蛋白中位数为5.51 g/dL，FPT组为3.90 g/dL；球蛋白分别为3.22 g/dL和1.14 g/dL。总蛋白AUC为0.986，球蛋白AUC为0.981，两者均能检出全部6例FPT病例。
（四）CPV抗体水平
CPV抗体检测值在FPT组较低（中位数271.9 vs. 1869.4，p = 0.001），AUC为0.907。定量CPV抗体结果与总IgG呈正相关（ρ = 0.581）。但正常组中有12只（17.1%）幼犬抗体水平低于保护阈值，提示低CPV抗体值不一定意味着总IgG转移不足。
（五）折射测量
新鲜血清Brix在两组间存在差异（p = 0.029），但差异较小。新鲜血清Brix AUC为0.771，冻融血清Brix为0.694，全血Brix为0.432，后者结果不具结论性。Bland–Altman分析显示，新鲜血清与冻融血清Brix平均差异仅+0.09个百分点，但95%一致性限为?1.06至1.24，可能影响接近截断值个体的分类。
（六）GGT活性
GGT与IgG呈正相关（ρ = 0.566），但区分能力中等（AUC 0.721），截断值≤31.5 U/L时灵敏度66.7%、特异度92.9%。初乳摄入时间和量的差异，以及采样时血清GGT活性可能已从早期哺乳后峰值下降，可能影响其诊断性能。
五、讨论与结论
本研究表明，总蛋白、球蛋白和体重百分比变化是区分FPT最具前景的指标，这具有生物学合理性：球蛋白和总蛋白直接反映吸收的免疫球蛋白，早期体重增长反映初乳摄入量。然而，这些结果仅基于6例FPT病例，应视为产生假说的候选指标，而非可供临床使用的已验证诊断方案。折射测量结果提示，犊牛文献中的高诊断准确性不能直接外推至幼犬。全血Brix结果不支持其在本研究条件下的应用。冻融血清与新鲜血清Brix虽平均差异小，但个体间差异可能影响临床分类。体重百分比变化截断值（≤8.27%）与文献报道（?2.7%）差异显著，可能与本研究中幼犬出生体重较高及FPT比例有限有关。研究存在多项局限性：FPT组仅6例限制了灵敏度、特异度和截断值的精确性；ROC截断值在同一数据集中推导和评估，可能存在乐观偏差；未对同窝幼犬的聚类效应进行统计建模；仅纳入存活至采样时间的幼犬，可能导致严重FPT病例代表性不足。研究结论指出，血清总蛋白、计算球蛋白和早期体重百分比变化在检测幼犬FPT方面显示出最高的区分性能，但这些估计基于6例FPT病例，不够精确，应视为产生假说而非确证性结果。GGT活性和CPV抗体水平虽与血清IgG正相关，但个体诊断性能有限。血清Brix区分能力有限，全血Brix不具结论性，新鲜血清与冻融血清Brix值可能不能直接互换使用。这些发现确定了幼犬FPT筛查的候选指标，其截断值在临床应用前需在更大规模、独立人群中验证。
