通过抑制IL-17/STAT3信号通路和半胱天冬酶介导的细胞凋亡，NBDP改善代谢相关脂肪性肝炎

《Cellular Signalling》：NBDP ameliorates metabolic-associated steatohepatitis by suppressing IL-17/STAT3 signaling and caspase-mediated apoptosis

　　代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（MASH）由代谢失调驱动，从单纯脂肪变进展至肝细胞损伤、炎症和纤维化，使其成为全球日益严重的健康负担。近年来，MASH研究进展迅速，但有效的治疗选择仍然有限，急需具有强临床疗效的新药物。NEMO结合域肽（NBDP）已知可抑制NF-κB激活并在体内减轻纤维化。然而，NBDP在MASH中的作用尚未被研究。本研究采用饮食诱导的MASH小鼠模型和体外共培养系统，评估了NBDP的治疗疗效及其潜在机制。网络药理学鉴定出信号转导与转录激活因子3（STAT3）为NBDP的关键靶点。单细胞虚拟敲除分析进一步表明，STAT3过表达与MASH进展高度一致。组织学和Western blot分析显示，NBDP显著恢复了肝脏结构，表现为脂质蓄积、炎症浸润、细胞外基质沉积和肝细胞凋亡的明显减少。在机制上，利用STAT3过表达的MASH小鼠和STAT3敲低/IL-17刺激的体外共培养系统，我们发现NBDP抑制IL-17/STAT3信号轴。这种抑制作用减少了MASH进展过程中的纤维化生成和caspase依赖性凋亡。这些发现表明，NBDP通过靶向IL-17/STAT3通路改善MASH的主要病理特征。总体而言，本研究为NBDP作为抗MASH潜在治疗策略提供了机制见解和实验验证。代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（MASH）是一种由代谢失调驱动的进展性肝脏疾病，其特征为肝脏脂肪变、炎症、肝细胞损伤和纤维化。MASH是全球最常见的慢性肝病之一，也增加了终末期肝病和死亡的风险[1]、[2]。2024年，Resmetirom成为首个获FDA批准的MASH靶向治疗药物[3]。然而，对其安全性和成本的担忧限制了其广泛应用[4]、[5]。鉴于MASH复杂的发病机制，急需开发具有多靶点作用的新治疗策略[6]、[7]。因此，基于肽类药物的疗法已成为MASH药物开发的一个有前景的方向[8]。NEMO结合域肽（NBDP）是一种高度保守的α-螺旋肽，作为NEMO-IKK复合物的选择性抑制剂发挥作用[9]。研究表明，NBDP具有抗炎、抗纤维化和细胞保护作用。例如，NBDP通过抑制细胞焦亡促进脊髓损伤后的运动功能恢复[10]。它还减轻儿童颅脑化学放射治疗后的神经炎症和行为缺陷[11]。此外，在急性肺损伤和糖尿病模型中，它还能减少氧化应激和促纤维化基因表达[12]、[13]、[14]。重要的是，在这些研究中NBDP表现出良好的安全性特征。这些广泛的抗炎、抗纤维化和细胞保护作用与MASH复杂的病理学密切相关。因此我们假设NBDP可能减缓或逆转MASH的进展。然而，NBDP在MASH中的作用尚未被探索。因此，本研究旨在评估其治疗疗效、机制以及在MASH治疗中的潜力。白介素-17（IL-17）是一组促炎细胞因子，与IL-17RA/RC受体复合物结合。这种结合激活细胞内信号通路，调控炎症介质和组织重塑酶的表达[15]、[16]。新兴证据表明，IL-17是肝纤维化的关键调控因子，主要通过促进肝细胞凋亡和激活肝星状细胞（HSCs）发挥作用[17]、[18]。这一过程与信号转导与转录激活因子3（STAT3）密切相关，STAT3是一种关键的转录因子，在其中发挥核心作用，其失调的活性是肝脏炎症和纤维化重塑的核心驱动力[19]、[20]。IL-17/STAT3轴与多种肝脏疾病相关，在肝损伤模型中驱动I型胶原表达[21]、[22]，在自身免疫性肝炎中通过STAT3-IFI16轴加重肝细胞焦亡[23]，此外还促进肝细胞癌中肿瘤细胞的增殖和迁移[24]。然而，IL-17/STAT3通路在MASH中的具体作用尚不清楚。研究这一通路可能揭示疾病进展的新机制并鉴定出有前景的治疗靶点。通过将网络药理学与单细胞虚拟敲除分析相结合，本研究鉴定了NBDP治疗MASH的关键靶点。利用体内外模型，我们评估了NBDP的治疗疗效及其潜在机制。这些发现为开发NBDP作为MASH新型靶向治疗药物提供了实验依据。雄性C57BL/6 J小鼠，6-8周龄（20±5克），在无菌环境中饲养，温度控制为22±2°C，湿度为55±5%，12小时光暗循环。所有小鼠自由获取食物和水。为建立MASH小鼠模型，小鼠被喂食一种专门饮食，含40%脂肪、20%果糖和2%胆固醇，并补充高糖饮用溶液20周[25]。实验设计包含七个组（图1）：(1) 对照组：饲喂标准饲料的小鼠在饮食诱导的MASH小鼠模型中评估了NBDP的治疗疗效（图2A）。在动物模型建立后，分离PHPCs和PHSCs并整合到体外共培养系统中。通过CCK-8检测进行的细胞毒性分析确认NBDP在所有测试浓度下均保持良好的安全性特征。因此，确定8 μM为后续机制研究的最佳浓度，以确保适当的平衡由潜在代谢功能障碍驱动，MASH是一种进展性肝脏疾病，组织学特征为肝细胞脂肪变、小叶性炎症和肝细胞气球样变[41]、[42]。MASH的临床风险在于其隐匿性进展，可从单纯脂肪变发展至纤维化、肝硬化，最终导致肝细胞癌[43]、[44]。这一疾病轨迹使MASH成为肝脏研究的主要焦点[45]。新兴证据表明异常的STAT3NBDP通过直接抑制IL-17诱导的STAT3激活及下游caspase介导的凋亡来改善MASH，突显了其对脂肪变、炎症、凋亡和纤维化具有广谱疗效的潜在新型治疗药物价值。周宁宁：原稿撰写、调查、形式分析。齐泽军：调查、形式分析。周凯亮：审阅与编辑、监督。齐建军：审阅与编辑、监督、经费获取。动物实验按照中国美国国家卫生研究院实验室动物养护与使用指南进行，并获皖南医学院第一附属医院（中国安徽）批准（批准号：WNMC-AWE-2025128），同时努力减少动物不适。本研究按照中国美国国家卫生研究院实验室动物养护与使用指南中关于动物福利和/或报告的相关指南进行。本研究获皖南医学院第一附属医院（中国安徽）批准（批准号：WNMC-AWE-2025128）。作者声明不存在可能影响本文所报告工作的已知竞争经济利益或个人关系。本研究受安徽省教育厅自然科学基金项目（编号：2023AH040262，资助齐建军）、安徽省卫生健康委员会项目（编号：AHWJ2022b054，资助齐建军）、皖南医学院重点项目（编号：WK2022ZF20，资助齐建军）及皖南医学院第一附属支持医院人才研究基金项目（编号：YR20220215，资助齐建军）资助。周宁宁|齐泽军|周凯亮|齐建军皖南医学院第一附属医院（皖南医学院弋矶山医院）检验科，中国芜湖241001