《Journal of Neuromuscular Diseases》：RYR1-related diseases patient-led international research workshop: Novel perspectives, treatments and interventions
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RYR1相关疾病（RYR1-related diseases, RYR1-RDs）包含广泛的疾病表现谱，目前可用的疾病修饰疗法有限。RYR1-RD表型包括不同组织学类型的先天性肌病，常伴有早发性肌无力、喂养困难和程度不一的呼吸功能不全。RYR1-RD还包括一组
RYR1相关疾病（RYR1-related diseases, RYR1-RDs）包含广泛的疾病表现谱，目前可用的疾病修饰疗法有限。RYR1-RD表型包括不同组织学类型的先天性肌病，常伴有早发性肌无力、喂养困难和程度不一的呼吸功能不全。RYR1-RD还包括一组发作性疾病，如运动不耐受、劳力性横纹肌溶解、周期性麻痹和恶性高热易感性。RYR-1基金会主办了第二届患者主导的RYR1-RD国际研究研讨会，于2025年7月23日至24日在美国宾夕法尼亚州匹兹堡举行，参会者包括受影响的个体、临床医生和研究人员，旨在回顾当前研究现状，并评估未来研究的高优先级领域，以推动治疗方法的开发，患者直接参与了本次研讨会的设计和议题。确定的高优先级领域分为六个专题：1）RYR1-RD的诊断与遗传学；2）建立RYR1-RD的临床试验准备；3）RYR1病理生理学新见解；4）RYR1-RD的疾病模型与转化研究；5）治疗开发管线；以及6）RYR1-RD的物理治疗与运动。研讨会讨论了多种新型疾病模型和新型DNA及RNA定向疗法。为建立临床试验准备，正在开展前瞻性自然史研究，以优化结局指标和生物标志物，并探索影像学模式和可穿戴传感器。本文对报告内容进行了连贯性总结，涵盖从结构生物学和临床前模型的基础研究到临床试验，以及针对RYR1-RD的新型治疗开发策略，为神经肌肉和罕见病研究领域提供全面叙述。
### 论文解读：RYR1相关疾病的研究进展与治疗前景——基于第二届患者主导国际研讨会的综合报告
#### 一、研究背景与问题
RYR1相关疾病（RYR1-RDs）是一类由RYR1基因致病性变异引起的异质性遗传性肌肉疾病。RYR1基因编码骨骼肌肌浆网终池上的1型兰尼碱受体（ryanodine receptor type 1），该受体是兴奋-收缩耦联中关键的钙释放通道。RYR1-RD的临床表现谱极为广泛：一方面包括多种组织学类型的先天性肌病，如中央轴空病（CCD）、多微轴空病（MmD）、“尘状轴空”病、中心核肌病（CNM）和先天性肌纤维类型 disproportion（CFTD），常表现为早发性肌无力、喂养困难和呼吸功能不全；另一方面包括恶性高热易感性（MHS）、劳力性横纹肌溶解（ERM）、运动不耐受和周期性麻痹样发作等发作性疾病。尽管RYR1-RD相对常见，但目前尚无疾病修饰或治愈性疗法。为此，RYR-1基金会于2025年7月23日至24日在美国匹兹堡举办了第二届患者主导国际研究研讨会，汇聚研究人员、临床医生、相关健康专业人员及患者代表，旨在交流最新研究进展、识别疾病修饰疗法开发中的瓶颈、建立临床试验准备，并寻求疾病管理共识。患者代表从研讨会策划之初即参与，并主导了高优先级领域的筛选。
#### 二、主要技术方法概述
本次研讨会涉及的主要关键技术方法包括：低温电子显微镜（cryo-EM）结构解析用于确定RYR1变异的远程变构效应；诱导型肌肉特异性RYR1敲降小鼠模型（RYR1-Rec模型）用于研究隐性遗传型RYR1-RD的发病机制；基于人诱导多能干细胞（hiPSC）的三维骨骼肌模型用于疾病建模和治疗测试；以及多种DNA和RNA定向治疗技术，包括CRISPR介导的等位基因特异性缺失、split intein介导的蛋白质反式剪接基因治疗（SIMPLI-GT）、复制缺陷型单纯疱疹病毒（rdHSV）载体、RNA末端连接（REJ）策略和抗密码子编辑（ACE）-tRNA技术。此外，还讨论了自然史研究中的功能评估、患者报告结局、影像学（如肌肉MRI脂肪分数定量）和可穿戴传感器等方法的整合。
#### 三、研究结果
**1. 诊断与遗传学**
该部分更新了RYR1变异数据库项目进展，讨论了美国临床基因组资源（ClinGen）中变异审定专家小组（VCEP）对RYR1-RD的工作，以及流行病学研究中确定疾病患病率的进展与挑战。会议提出，由于RYR1基因庞大、人群变异频率较高，判断变异致病性需整合基因型、临床表型、组织学、影像学、结构生物学、功能检测等多学科数据。此外，会议采纳了ENMC国际研讨会提出的先天性肌病新命名框架，例如“常染色体隐性RYR1-先天性肌病伴轴空”，该命名依据个体可获得的临床、遗传和组织病理学信息而定。
**2. 建立临床试验准备**
该部分回顾了既往大型回顾性研究和N-乙酰半胱氨酸试验前的六个月前瞻性导入期自然史研究（NCT02362425），并介绍了三项正在进行的前瞻性研究：NIH的“RYR1相关疾病自然史研究”（NCT06287762）、针对多种先天性肌病亚型的READYCOM研究（NCT06157268）以及荷兰RyCarma资助的观察性研究。目前尚缺乏专门的RYR1-RD注册登记库，遗传诊断的不确定性是主要瓶颈。肌肉MRI脂肪分数定量可作为定量和可重复的疾病严重程度及进展生物标志物，可穿戴传感器和数字健康技术（DHTs）有望补充传统临床评估的不足。此外，借鉴SMA领域12级EVOLVE-SMA功能分类系统，提出了改良的RYR1-RD功能能力量表，以增强患者分层和结局测量选择的准确性。
**3. RYR1病理生理学新见解**
cryo-EM研究揭示了RYR1致病性变异对远离通道孔的兴奋-收缩耦联的远程变构效应，为未来针对特定变异类别开发药物提供了结构基础。在细胞层面，新的骨骼肌特异性RYR1耗竭小鼠模型数据表明，RYR1蛋白水平降低可导致下游内质网（ER）应激，这与其他先天性肌病中继发性RYR1表达降低有关，提示增强RYR1表达或缓解ER应激的治疗策略可能具有广泛适用性。在代谢方面，源自MH易感个体的原代肌管研究表明，RYR1介导的钙漏导致肌浆钙持续升高，与年龄依赖性高血糖相关，纠正钙水平可能是一种潜在治疗策略。
**4. 疾病模型与转化研究**
在诱导型RYR1敲降小鼠模型（RYR1-Rec）中，小鼠出现进行性无力、肌肉收缩力丧失以及类似人类疾病的组织学和超微结构改变，且N-乙酰半胱氨酸治疗可改善肌力，为靶向氧化应激通路的人类研究提供了依据。会议还讨论了RYR1在卫星细胞生物学中的潜在作用——RYR1在部分卫星/生肌细胞中瞬时表达，可能影响其生肌能力，靶向卫星细胞有望增强基因和细胞治疗的长期疗效。此外，基于hiPSC的三维骨骼肌构建体可进行兴奋-收缩耦联测定，适用于建模RYR1-RD并开展概念验证性治疗测试。
**5. 治疗开发管线**
针对显性遗传型RYR1-RD，研究人员提出利用两次CRISPR介导的切割在疾病等位基因上造成移码缺失，从而特异性沉默突变等位基因，并在患者来源的成肌细胞中进行了概念验证。针对隐性遗传型RYR1-RD，多种策略旨在克服AAV载体容量限制（RYR1转录本约15.1 kb）：split intein介导的蛋白质反式剪接基因治疗（SIMPLI-GT）可用多AAV载体表达大蛋白；复制缺陷型单纯疱疹病毒（rdHSV）载体具有约35 kb的高装载容量，可容纳全长RYR1基因；RNA末端连接（REJ）策略将大转录本分成多个片段包装进AAV，利用内源剪接机制重建全长mRNA；抗密码子编辑（ACE）-tRNA技术则可促进无义变异的通读，正在开发非病毒、DNA基的ACE-tRNA纳米颗粒递送系统。
**6. 物理治疗与运动**
会议讨论了耐力运动和抗阻运动对肌肉的互补适应效应：耐力运动可增加线粒体含量、减轻氧化应激、提高毛细血管密度；合理设计的抗阻运动可增强肌力、肌肉质量和神经肌肉协调。虽然尚未在RYR1-RD患者中进行运动干预试验，但来自相关神经肌肉和线粒体疾病的证据表明，在监督下的个体化运动可能是安全有益的。患者通常应避免大强度抗阻训练和离心负荷，并监测极度疲劳的迹象。现有临床指南和专家共识支持将规律体育活动和物理治疗作为RYR1-RD支持性护理的一部分。
#### 四、讨论与结论总结
讨论部分指出，RYR1-RD是最常见的遗传性肌肉疾病之一，具有广泛表型严重度谱和不同的分子机制。精准的遗传诊断仍是核心问题；由于不同致病性变异对RYR1通道功能的影响不同，未来治疗可能需要针对各变异亚类进行定制。多种新型建模、研究和缓解RYR1功能异常下游后果的策略正在积极研究中，多种新型DNA和RNA定向疗法也在开发中，以规避RYR1生物学和功能带来的特定限制。为建立临床试验准备，前瞻性自然史研究对于优化结局指标和生物标志物至关重要，并强调需要基于里程碑的分层工具和长期随访以检测有临床意义的变化。影像学和可穿戴传感器等新兴结局测量将辅助标准神经肌肉临床评估和患者报告结局。未来临床研究应考虑将运动作为潜在治疗干预手段。
研究结论：RYR1-RD的诊疗正进入一个转折点，整合协调方案、长期随访和多维结局测量的自然史研究将细化对不同年龄和严重程度疾病轨迹的理解，直接为未来治疗性试验的设计和效能提供依据。患者组织（如RYR-1基金会）在患者招募和科学沟通中发挥不可替代的作用。尽管疾病修饰疗法尚未问世，但结构生物学、疾病模型、基因治疗和运动干预等多个方向的研究进展为RYR1-RD患者带来了切实希望。
