长链非编码RNA LINC00657通过miR-144-3p/ROCK1竞争内源性RNA轴加重心房颤动患者的心房纤维化

《Functional & Integrative Genomics》：Long non-coding RNA LINC00657 aggravates atrial fibrosis in atrial fibrillation via the miR-144-3p/ROCK1 competing endogenous RNA axis

摘要

长非编码RNA LINC00657在心房颤动（AF）中的临床意义和纤维化机制尚不清楚。本研究旨在阐明LINC00657是否通过调节微小RNA-144-3p（miR-144-3p）/Rho相关卷曲螺旋富含蛋白激酶1（ROCK1）轴成为房颤心房纤维生成的机制驱动因素。检测了150例房颤患者和150例匹配对照者外周血中LINC00657的表达水平。血管紧张素II（Ang II）刺激的原代大鼠心脏成纤维细胞和持续输注Ang II的C57BL/6小鼠分别作为体外和体内纤维化模型。进行功能测定（细胞计数试剂盒-8（CCK-8）、流式细胞术、酶联免疫吸附测定（ELISA）、蛋白质印迹法）和机制实验（亚细胞组分分离、RNA下拉实验、RNA免疫沉淀（RIP）、双荧光素酶报告基因实验）以解析LINC00657/miR-144-3p/ROCK1竞争性内源RNA（ceRNA）轴。临床研究显示，循环LINC00657升高可区分房颤患者与对照者，并独立预测房颤风险，与高敏肌钙蛋白I（hs-cTnI）和高敏C反应蛋白（hs-CRP）呈正相关。体外实验表明，Ang II诱导LINC00657上调；沉默LINC00657抑制心脏成纤维细胞增殖，减弱炎症细胞因子白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的释放，降低I/III型胶原和转化生长因子-β（TGF-β）等纤维化标志物的表达，并促进凋亡。体内实验显示，敲低LINC00657显著减轻小鼠Ang II介导的心房纤维化。心电图（ECG）监测和经食管心房起搏进一步显示，沉默LINC00657显著恢复心房有效不应期（AERP），并显著降低房颤的可诱导性和持续时间。机制上，LINC00657主要定位于细胞质，作为ceRNA吸附miR-144-3p发挥作用，ROCK1被鉴定为miR-144-3p的直接下游靶标。房颤患者和模型小鼠均表现出miR-144-3p降低和ROCK1升高，分别与LINC00657水平呈负相关和正相关。救援实验表明，miR-144-3p抑制剂部分逆转了LINC00657沉默的抗纤维化作用，而进一步敲低ROCK1则废除了这种逆转作用。机制上，对ROCK1下游信号的解析揭示，LINC00657/miR-144-3p/ROCK1轴特异性激活ROCK1/肌球蛋白轻链2磷酸化通路，增强肌动球蛋白收缩力和应力纤维形成，从而驱动纤维化级联反应。LINC00657/miR-144-3p/ROCK1调控轴促成了房颤中的心房纤维化。