《Regenerative Therapy》：Protocol for a phase I/II, open-label, single-arm trial of autologous chemically induced liver progenitor (CLiP) cell transplantation in patients with decompensated cirrhosis
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失代偿期肝硬化预后不良，对于不适合肝移植的患者而言治疗选择有限。尽管多种基于细胞的再生疗法已被研究，但其临床获益有限。自体化学诱导肝祖细胞（CLiP）是利用小分子重编程技术由成熟肝细胞产生的可扩增祖细胞样细胞，已在多个临床前模型中显示出再生潜力。由于CLiP具
失代偿期肝硬化预后不良，对于不适合肝移植的患者而言治疗选择有限。尽管多种基于细胞的再生疗法已被研究，但其临床获益有限。自体化学诱导肝祖细胞（CLiP）是利用小分子重编程技术由成熟肝细胞产生的可扩增祖细胞样细胞，已在多个临床前模型中显示出再生潜力。由于CLiP具有双潜能性，可向肝细胞系和胆管上皮细胞系双向分化，其移植后的谱系命运可能受受体肝脏微环境影响，且移植的CLiP在人类失代偿期肝硬化肝脏中能否达到动物模型中观察到的肝细胞成熟程度仍属未知。研究人员描述了评估自体CLiP移植治疗失代偿期肝硬化的首项人体临床试验的理论依据与研究设计。该研究在日本的再生医学安全保障法框架下开展，并已获得认证的再生医学特别委员会批准。这是一项首次人体、单中心、开放标签、单臂I/II期研究，将纳入3名不适合肝移植的Child–Pugh B级失代偿期肝硬化成人患者。通过腹腔镜获取约30 g肝组织，用于为期12–16周的CLiP制备。在质量与安全性检测合格后，通过回结肠静脉外科插管将CLP-001经门静脉系统输注。主要终点为安全性，定义为从组织获取至移植后1个月的不良事件及产品相关缺陷。次要和探索性终点包括12个月内的安全性以及肝功能、纤维化相关生物标志物、肝脏硬度及肝硬化临床表现的描述性变化。据研究人员所知，这是自体CLiP移植治疗失代偿期肝硬化患者的首次临床评估。该试验旨在确立包括组织获取、细胞制备、质量保证和门静脉输注在内的整个治疗流程的安全性和操作可行性。疗效相关观察为探索性，且移植CLiP的谱系命运无法在本研究中直接确定。研究结果有望为自体CLiP移植的安全性和可行性提供首批临床证据，并为基于CLiP的晚期慢性肝病再生疗法未来发展提供支持。截至投稿时，患者入组已开始，但尚无受试者接受CLiP移植。
论文解读：自体化学诱导肝祖细胞（CLiP）移植治疗失代偿期肝硬化的首次人体临床试验方案
一、研究背景与问题
失代偿期肝硬化是慢性肝病的终末阶段，也是全球肝脏相关死亡的主要原因。一旦出现腹水、静脉曲张出血或肝性脑病等临床失代偿事件，患者预后显著恶化。肝移植目前是唯一确立的根治性治疗手段，但其应用受限于供体短缺、手术创伤大、需终身免疫抑制治疗以及严格的入选标准。因此，大量失代偿期肝硬化患者无法接受移植治疗。历史数据显示，Child–Pugh B级患者1年生存率约为80%，C级仅约45%，无移植情况下失代偿后中位生存期约2年。现有药物治疗以支持性治疗为主，主要针对并发症管理，难以逆转肝衰竭。基于细胞的再生疗法虽已开展多项研究，包括造血干细胞、间充质基质细胞（MSC）和原代肝细胞移植等，但疗效有限且短暂。原代肝细胞移植受限于供体稀缺及在病变肝脏中植入和长期增殖效率低；MSC虽具有免疫调节和抗纤维化作用，但临床研究仅显示肝功能适度改善，对总体生存或免移植生存的改善证据有限。这些细胞疗法的主要局限在于细胞在肝硬化肝脏的恶劣微环境中无法持续存活或发挥足够功能。因此，亟需新的策略实现不适合移植患者的真正肝脏再生。
二、研究内容与意义
化学诱导肝祖细胞（CLiP）是一种有前景的自体细胞来源。Katsuda等证明，利用特定小分子组合可将成熟肝细胞重编程为具有增殖能力的双潜能祖细胞样细胞，可向肝细胞和胆管上皮细胞谱系分化。临床前研究显示，CLiP移植后可在受体肝脏内植入并促进组织再生。然而，大鼠CLiP在长期传代（15–20代）后部分细胞系出现非整倍体和染色体易位，凸显了体外扩增过程中基因组安全性评估的重要性。由于CLiP具有双潜能性，其移植后分化命运可能受受体肝脏微环境影响，在人类失代偿期肝硬化肝脏中能否达到类似动物模型的肝细胞成熟程度尚不清楚。此外，CLiP移植从未在人体中评估过。因此，研究人员设计了这项首次人体I/II期试验，评估自体CLiP移植在Child–Pugh B级失代偿期肝硬化患者中的安全性和可行性。该研究在日本的再生医学安全保障法框架下开展，已获认证的再生医学特别委员会批准，并在日本临床试验注册中心注册（jRCTa070250146）。截至修订时（2026年8月），患者入组已开始，但尚无受试者接受移植。
三、关键技术方法
本研究采用以下主要技术方法：通过腹腔镜部分肝切除术获取约30 g肝组织；在认证的细胞处理中心采用YAC培养基（含Y-27632、A-83-01和CHIR99021）进行约12–16周的肝细胞培养扩增以制备CLP-001；产品质量与安全性检测包括组织病理学检查、无菌试验、支原体检测、内毒素检测、活细胞计数与活力、细胞表面标志物分析、拷贝数变异（CNV）分析及癌症相关基因panel检测；通过回结肠静脉外科插管进行门静脉输注。受试者为3名Child–Pugh B级、不适合肝移植的成人患者，在长崎大学医院入组。
四、研究结果
4.1 CLP-001的制备与表征：成熟肝细胞在含Y-27632、A-83-01和CHIR99021的YAC培养基中培养，可重编程为具有增殖能力的祖细胞样细胞，具备肝祖细胞标志物表达和肝向分化能力。在现有制备经验中，目标细胞数至少1×10?个可在第6代达到。
4.2 质量控制和安全性评估：产品放行前需通过预设的质量与安全性检测。由于起始材料来自肝硬化患者，增加了降低隐匿性肝细胞癌风险的措施，包括术前增强CT和钆塞酸二钠增强MRI（EOB-MRI）检查、所获肝组织的组织病理学检查。基因组安全性通过配对CNV分析和癌症相关基因panel检测进行评估，可与患者来源的起始材料进行比较。
4.3 支持临床转化的临床前证据：多项临床前研究支持临床转化。人CLiP可成功从慢性肝病患者的肝硬化肝组织标本中制备；来自老年肝细胞的人CLiP在培养中保持增殖活性并维持分化能力。在大鼠MASH模型中，CLiP移植后植入受体肝脏，减少肝纤维化并改善血清ALT水平。在免疫缺陷MASH小鼠模型中，移植的人CLiP分化为白蛋白阳性的成熟肝细胞样细胞，抑制血清AST和ALT水平，减少胶原沉积并下调纤维化相关基因。在老年小鼠部分肝切除模型中，移植的CLiP分化为成熟肝细胞，增强肝细胞增殖并显著改善肝再生。在猪MASLD模型中，从脂肪变性和纤维化肝脏分离的肝细胞可成功转化为CLiP。在大型动物MASLD模型中，自体门静脉移植可行且耐受良好，组织学分析显示肝脂肪变性、星状细胞活化和胶原沉积减少，随访期间未观察到治疗相关死亡、异位组织形成或肿瘤发生。
4.4 研究设计：这是一项首次人体、单中心、开放标签、单臂I/II期试验，纳入3名Child–Pugh B级失代偿期肝硬化患者。主要终点为安全性，定义为从腹腔镜部分肝切除术至CLP-001移植后1个月的不良事件和产品相关缺陷。次要终点包括移植后12个月的安全性。探索性疗效终点包括Child–Pugh评分变化、ALBI分级、MELD评分、纤维化相关生物标志物（P-III-P、透明质酸、IV型胶原7S、M2BPGi和Pro-C3）、肝脏硬度及FIB-4指数等。目标剂量为1×10?个细胞，最低可接受剂量为5×10?个细胞。剂量选择基于约0.1%的细胞-肝脏比例参考、门静脉给药安全性考虑及制备可行性，而非直接由动物实验换算。
4.5 随访安排：受试者在移植后住院观察7天，随后在1、3、6、12个月进行门诊随访，另加2年长期安全随访期。
4.6 统计学分析：鉴于探索性性质和仅3名受试者的小样本量，所有分析均为描述性，不进行推断性统计检验。
五、讨论与结论
该研究的独特之处在于使用从患者自身病变肝组织制备的自体肝细胞来源祖细胞，避免了供体器官依赖并可能减少同种异体免疫问题。与主要发挥间接免疫调节作用的MSC疗法不同，CLiP保留肝谱系特征并具有分化为成熟肝细胞样细胞的能力，为直接参与肝再生提供了机制基础。然而，由于CLiP的双潜能性，纤维化微环境中的信号（如TGF-β信号）可能促进胆管向分化，其在人类失代偿期肝硬化肝脏中肝细胞与胆管分化的相对贡献尚待确定。
研究设计主要评估安全性和操作可行性而非疗效，因为该治疗涉及组织获取、体外细胞制备、质量评估和门静脉输注等多步骤流程，每一步骤都带来此前未在人体中评估的临床和技术挑战。仅纳入3名受试者的设计符合首次人体再生医学研究的目标，即识别意外安全性信号和评估操作可行性。方案纳入了分阶段安全性审查流程，独立安全评估委员会在首例受试者移植后1个月进行审查后再继续后续入组。
安全性考量涉及三个独立干预环节：腹腔镜肝组织获取对肝硬化患者可能增加围手术期并发症风险，方案通过严格筛选Child–Pugh B级患者并排除严重门静脉高压、显著腹水等高危条件来降低风险；体外扩增自体肝细胞来源细胞存在基因组不稳定和致瘤转化风险，方案通过避免长期传代（目标细胞数在第6代即可达到）、配对CNV分析和癌症相关基因panel检测来评估基因组安全性；门静脉输注可能引起门静脉血栓、门静脉高压加重、出血等并发症，方案采用保守剂量选择、标准化输注流程和围手术期监测来管理风险。
研究局限性包括：单中心、开放标签、非随机且仅3名受试者，无法得出疗效结论；无对照组无法区分治疗效应与疾病自然波动；约12–16周的制备周期可能限制其在快速进展性疾病患者中的适用性；研究未包含能直接量化移植细胞谱系命运、长期植入或功能贡献的机制评估。
结论：截至修订时，监管批准已获得，研究已注册（jRCTa070250146），CLP-001的制备流程和质量控制检测已在长崎大学医院认证细胞处理中心成功建立。患者入组已开始，但尚无受试者接受CLiP移植。这项首次人体临床试验将评估自体CLiP移植在失代偿期肝硬化患者中的安全性和可行性，有望为基于CLiP的晚期慢性肝病再生疗法的未来临床开发提供基础性证据。
