塞拉利昂2025年MPXV阴性疑似Mpox病例中潜在替代病原体的多重分子筛查：VZV优势与共检出模式

《New Microbes and New Infections》：Molecular detection of potential alternative pathogens among MPXV-negative suspected mpox cases in Sierra Leone, 2025.

　　

在2025年塞拉利昂MPXV（猴痘病毒，Monkeypox virus）检测阴性的疑似mpox病例中，多重筛查显示Mpox样病原体具有较高检出率；VZV（水痘-带状疱疹病毒，Varicella-zoster virus）在检出病原体中占优势，并在多个地区被识别；频繁的病毒共检出突显潜在模仿病因的复杂性；在随后H. ducreyi（杜克雷嗜血杆菌，Haemophilus ducreyi）暴发前采集的样本中回顾性检出H. ducreyi；报告H. ducreyi与VZV之间一例罕见共检出事件；差异化诊断方法可改善暴发监测、避免诊断“死胡同”并优化患者管理。

过去数十年，全球新发传染病以空前速度出现，对公共卫生造成高影响；生态系统改变促进已知寄生虫、细菌和真菌病因再出现并形成协同流行；被忽视或未知病因持续出现；多数病原体缺乏有效预防或治疗干预，因此流行病学监测对暴发准备和响应至关重要。然而，监测常依赖综合征病例定义（syndromic case definitions，即按临床症状组合定义病例），许多传染病共享发热及随后重叠症状，确定病因困难。MPXV（猴痘病毒，Monkeypox virus）监测是典型：qPCR（实时荧光定量聚合酶链反应，quantitative real-time polymerase chain reaction）广泛用于实验室确认，但大量符合临床病例定义者MPXV阴性，提示其疾病可能由呈Mpox样皮肤表现的替代病因引起；这些未解决病例成为实验室和临床诊断“死胡同”，妨碍患者管理和公共卫生干预。2025年塞拉利昂Mpox疫情从1月10日至9月26日记录5328例确诊和56例Mpox相关死亡，16个区均受影响；诊断主要聚焦MPXV确认，许多阴性疑似病例未明确病因。因此，研究人员对MPXV qPCR阴性疑似样本进行回顾性筛查，以改善病因表征并了解替代发疹性病因谱。

2025年6月16日至8月27日，在塞拉利昂Mpox疫情国家应对框架下，于8个卫生区两个移动实验室开展回顾性实验室监测；407例疑似病例中144例MPXV阳性被排除，263例阴性纳入并接受两个靶向多重PCR panel检测。结论：58.2%至少检出一种潜在替代病原体，VZV（水痘-带状疱疹病毒，Varicella-zoster virus）最常见（43.3%），存在频繁病毒共检出，并回顾性检出H. ducreyi（杜克雷嗜血杆菌，Haemophilus ducreyi）。意义：多重PCR在资源有限暴发应对中可行，可减少诊断不确定性、优化患者管理、发现隐藏病原体循环并增强监测。

技术方法：样本队列来源为2025年6月16日至8月27日塞拉利昂Mpox疫情国家应对框架下8个卫生区（Port Loko、Kambia、Karene、Bombali、Tonkolili、Koinadugu、Falaba、Western Area Rural）两个移动实验室的407例疑似病例，其中263例MPXV qPCR阴性样本纳入（252份皮损拭子、7份阴道拭子、4份结痂样本）。研究人员先以MPXV qPCR初筛，再用两个靶向多重PCR（multiplex PCR，即同时检测多个核酸靶标的聚合酶链反应）panel检测7种疱疹病毒及H. ducreyi、T. pallidum（梅毒螺旋体，Treponema pallidum）、C. trachomatis（沙眼衣原体，Chlamydia trachomatis）和LGV（性病淋巴肉芽肿，Lymphogranuloma venereum）相关靶标；Ct（循环阈值，cycle threshold）< 35判阳性，弱信号复检；采用描述性统计、卡方或Fisher精确检验、R 4.4.0、地理分布图和UpSet图分析。

研究人群与样本选择（Study population and sample selection）：407例疑似中144例MPXV阳性排除，263例阴性纳入；年龄1-80岁，中位18岁（IQR，四分位距，interquartile range：8-29），≤15岁44.5%，>30岁22.4%；性别可得者男性58.7%、女性41.3%，男女比1.42。结论：形成MPXV阴性疑似病例分析队列。

总体病原体检出及人口学分布（Overall pathogen detection and demographic distribution）：对263份样本多重qPCR检测，至少一靶标阳性153份，总检出率58.2%。VZV最高43.3%（95% CI，置信区间，confidence interval：37.3-49.6）；HSV-2（单纯疱疹病毒2型，Herpes simplex virus type 2）7.2%，CMV（巨细胞病毒，Cytomegalovirus）6.85%，EBV（Epstein-Barr病毒，Epstein-Barr virus）6.1%，HHV-7（人疱疹病毒7型，Human herpesvirus 7）4.6%，HSV-1（单纯疱疹病毒1型，Herpes simplex virus type 1）1.9%，HHV-6（人疱疹病毒6型，Human herpesvirus 6）0.4%；H. ducreyi 1.1%；T. pallidum和C. trachomatis全部阴性；重叠靶标两panel一致率100%。EBV和HSV-2与年龄相关（p=0.016；p=0.02），老年组更高；CMV和EBV在女性中检出更频繁且性别差异有统计学意义；其他病原体未见显著年龄或性别关联。结论：多种临床重叠病毒和细菌参与MPXV阴性疑似病例池。

疑似病例和检出病原体的地理分布（Geographical distribution of suspected-cases and detected etiologies）：8区中Port Loko 52份、Tonkolili 51份最多，Western Area Rural 2份；至少一靶标阳性58.2%（95% CI：51.9-64.2），未检出41.8%（95% CI：35.8-48.0）；Port Loko、Tonkolili、Koinadugu、Bombali、Falaba五区检出临床模仿病原体数超过未诊断数。VZV在所有7个有阳性检出的区均出现，Koinadugu 27例、Falaba 22例、Port Loko 20例较高，Kambia最低；HSV-2和CMV以Port Loko和Tonkolili较多；EBV以Kambia、Port Loko、Tonkolili较多；HHV-7见于Kambia和Bombali；HHV-6仅Tonkolili 1例；H. ducreyi仅Tonkolili 2例和Falaba 1例。结论：替代病原体在多个地区广泛分布。

共检出模式分析（Investigation of co-detection patterns）：对检出病原体共检出分析，VZV相关共检出最多（n=19）；1份样本检出5种疱疹病毒（VZV、CMV、HSV-2、HHV-7、EBV），2份为三重病毒感染（VZV、CMV与EBV或HHV-7）；VZV与HSV-2共检出5次、与CMV 4次；H. ducreyi仅与VZV共检出2次；非VZV共检出中90%（9/10）含EBV，1例含HSV-1和CMV，其余含HHV-7和HSV-2各3例、CMV 2例；唯一非EBV非VZV共检出为HHV-7与HSV-1。结论：共检出模式复杂，其临床意义原文未明确。

讨论总结与结论翻译：讨论指出，暴发应对常聚焦主要病原体，可能掩盖其他临床相关病原体循环；多重PCR较宏基因组下一代测序（metagenomic next-generation sequencing，mNGS）更适于常规监测；高阳性率反映与暴发并行的地方性发疹性疾病（endemic eruptive diseases）负担；VZV高检出与非洲多国研究一致；年龄和性别分布与病毒传播、潜伏再激活及社会行为因素相关；共检出尤其疱疹病毒共检出的临床意义尚不清楚；H. ducreyi在2025年12月塞拉利昂首次官方宣布H. ducreyi相关皮肤溃疡暴发前数月样本中回顾性检出，但不能建立这三例患者与后续暴发的流行病学联系。局限性包括临床信息不完整、未对MPXV阳性样本做差异检测、未测序、未覆盖整个暴发期和所有地区、为时间截面。研究结论翻译：本研究记录了2025年塞拉利昂疫情期间MPXV检测阴性疑似病例中与皮疹相关的多种病毒和细菌病原体；VZV高频率检出，突出其作为Mpox样症状潜在替代病因的重要性；这些发现证明差异分子筛查在识别与主要病原体相似症状的其他微生物靶标方面具有可行性和价值；将此类方法与临床评估整合入未来暴发监测，有助于指导患者管理并加强传染病准备；与移动实验室部署结合可实质性增强实验室诊断能力，这在塞拉利昂等国家仍是重大挑战；2025年Mpox应对期间移动实验室部署显示在资源有限环境中实施先进分子诊断的操作可行性；此类综合方法对改善早期发现、指导及时干预及加强脆弱地区疫情准备和响应至关重要。