《International Journal of Medical Microbiology》：Human papillomavirus oncogene mRNA testing for anal dysplasia and anal cancer screening in men living with HIV
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研究人员评估了将人乳头瘤病毒（HPV）癌基因mRNA检测纳入HIV感染男性肛门癌筛查的价值，共纳入865例HIV感染男性。HPV-mRNA检测对肛门异型增生的特异性高于HPV-DNA检测。在HPV-mRNA检测阴性后，>92%的受试者在长达3年内无肛门异型增生
研究人员评估了将人乳头瘤病毒（HPV）癌基因mRNA检测纳入HIV感染男性肛门癌筛查的价值，共纳入865例HIV感染男性。HPV-mRNA检测对肛门异型增生的特异性高于HPV-DNA检测。在HPV-mRNA检测阴性后，>92%的受试者在长达3年内无肛门异型增生。若HPV-mRNA检测阴性，筛查间隔可延长至>3年。肛门细胞学与HPV-mRNA联合检测可降低高分辨率肛门镜（HRA）转诊率。
Steffi Silling等开展的前瞻性研究聚焦HIV感染男男性行为者（MSMLWH）的肛门癌筛查。背景上，持续高危型（hr）HPV感染可导致肛门鳞状细胞癌；全球肛门癌发病率上升，尤其在HIV感染者（PLWH）中。MSMLWH肛门HPV感染率很高，肛门癌风险显著高于一般人群；肛门高级别鳞状上皮内病变（aHSIL）是前驱病变，在PLWH中患病率高且进展较快，治疗aHSIL可降低肛门癌风险。现有指南推荐对PLWH进行aHSIL筛查，HRA引导活检为金标准，但HRA资源有限；肛门细胞学特异度高而敏感度不足；hr-HPV-DNA在此类高HPV流行人群中特异性较低。宫颈癌筛查研究提示hr-HPV E6/E7 mRNA检测反映转录活跃感染，与HSIL/癌相关，且较hr-HPV-DNA可能具有稍高特异性。因此，研究人员评估肛门拭子hr-HPV-E6/E7-mRNA检测对aHSIL/肛门癌（aHSIL+）的诊断准确性，并与hr-HPV-DNA比较，同时纵向评估基线hr-HPV-mRNA结果分层下无aHSIL生存情况。研究结论为：hr-HPV-mRNA检测对ASCUS+、LSIL+和HSIL+的特异性高于hr-HPV-DNA，敏感度、阴性预测值（NPV）和阳性预测值（PPV）相近；基线hr-HPV-mRNA阴性者3年后>92%无aHSIL；该检测有助减少HRA转诊并可能安全延长随访间隔。
方法上，研究人员于2010年5月至2021年11月在德国波鸿WIR-Walk In Ruhr跨学科免疫门诊和Oberhausen Helios St. Elisabeth医院肛肠科前瞻性连续招募>18岁MSMLWH筛查参与者，最终865例纳入分析；每次访视行数字直肠检查、HRA和肛门拭子采集，HRA异常者行活检组织学评估。hr-HPV-E6/E7-mRNA采用Aptima HPV Assay（A-HPV-mRNA，基于转录介导扩增TMA检测14种hr-HPV的E6/E7 mRNA）；hr-HPV-DNA采用A6/A8-PCR及Luminex分型（13种hr-HPV加HPV66）。细胞学按Bethesda分类，组织学分级；随访至2023年，通常每6—12个月采样，最长96个月；采用Kaplan-Meier和Cox回归分析。
结果如下。基线特征和研究时间线：925例MSMLWH同意参与，60例因细胞学缺失/不可评估、基线拭子缺失或检测无效被排除，865例分析。基线中位年龄44岁，775例（89.6%）接受抗逆转录病毒治疗（ART），620例（71.7%）血浆HIV-1 RNA<40 copies/mL，232例（26.8%）为CDC C期，中位CD4
+ T细胞计数540 cells/μL。基线细胞学/组织学为NILM 268例、ASCUS 113例、LSIL 313例、HSIL 168例、肛门癌3例。共分析3204份拭子，686例有随访样本，中位随访43.0个月。该部分通过基线描述明确了研究队列特征和随访框架。
HPV检测和诊断准确性：基线任何HPV-DNA阳性90.8%，hr-HPV-DNA阳性76.4%，hr-HPV-mRNA阳性68.0%；各HPV指标阳性率随细胞学/组织学级别升高而增加。NILM、ASCUS、LSIL中hr-HPV-DNA阳性率高于hr-HPV-mRNA；HSIL中hr-HPV-mRNA为92.3%，hr-HPV-DNA为88.7%；3例肛门癌两种检测均阳性。两种检测一致率84.2%，kappa值在NILM/ASCUS为显著一致、LSIL/HSIL为中等一致。mRNA与DNA对ASCUS+、LSIL+、HSIL+的敏感度、NPV、PPV相近，但mRNA特异性显著更高：HSIL+为38.0% vs 26.7%，LSIL+为45.7% vs 30.4%，ASCUS+为46.3% vs 31.7%。HPV16最常见（37.8%），其次HPV18（15.0%）和HPV58（14.3%），多型感染常见，DNA阳性基线拭子平均2.9型。13例hr-HPV-mRNA阴性aHSIL样本中，7例携带A-HPV-mRNA未覆盖型别，3例HPV-DNA亦阴性，3例携带HPV16、58、66且可能因病毒载量低而阴性。若仅ASCUS+转诊HRA为597例（69.0%），联合hr-HPV-DNA阳性为478例（55.3%），联合hr-HPV-mRNA阳性为444例（51.3%）。该部分通过横断面诊断准确性分析得出mRNA特异性更高且可能减少HRA转诊。
纵向随访：686例MSMLWH采集2339份随访拭子。按基线hr-HPV-mRNA分层，mRNA阳性者中位随访39.0个月，阴性者57.0个月。全体参与者中，基线hr-HPV-mRNA阴性者无HSIL生存更好（p<0.001；HR 3.26，95%CI 2.29—4.65）；12、24、36、48个月无aHSIL比例在mRNA阴性者为96.7%、93.6%、92.4%、89.2%，阳性者为90.0%、77.1%、68.0%、61.3%；60个月分别为86.2%和54.0%。分层分析显示，NILM者阴性mRNA与无HSIL生存显著相关（p<0.001；HR 3.62，95%CI 1.87—7.01），LSIL者亦显著（p=0.003；HR 2.24，95%CI 1.32—3.81）；ASCUS和HSIL中总体关联不显著，但ASCUS且mRNA阴性者48个月内无aHSIL，而阳性者28.9%发生aHSIL（p=0.004）。随访期间仅1例51岁患者在入组67个月后诊断肛门癌，基线为CDC B3期、组织学aHSIL（AIN2），hr-HPV-mRNA阳性，DNA分型为HPV16和31。与hr-HPV-DNA比较，全体无HSIL生存HR为2.02（95%CI 1.40—2.91），低于mRNA的3.26；LSIL中DNA的HR不显著。该部分通过纵向生存分析得出基线mRNA阴性可预测较长时期无aHSIL。
讨论部分总结：肛门癌与宫颈癌类似，可通过筛查和治疗癌前病变预防；筛查仅推荐高危人群，HRA容量有限，因此筛查试验需兼顾敏感度和特异度。肛门细胞学特异度高但敏感度欠佳；在MSMLWH中hr-HPV-DNA因高流行和多型感染而特异度有限。该研究支持A-HPV-mRNA检测在敏感度、NPV、PPV与hr-HPV-DNA相近的同时具有更高特异度；与既往MSMLWH研究及宫颈癌筛查证据方向一致。A-HPV-mRNA覆盖14种型别，较覆盖5种型别的NASBA-mRNA检测敏感度更高、特异度更低。与单独ASCUS+细胞学相比，细胞学联合hr-HPV-mRNA可能将HRA转诊率降低约25%。基线mRNA阴性者36个月>92%无aHSIL，NILM且阴性者12、24、36个月无aHSIL比例分别为99%、98%、96%，提示可延长筛查间隔。研究优势包括全部参与者接受HRA、前瞻性设计和长随访，且为目前MSMLWH中评估hr-HPV-mRNA肛门癌筛查的最大样本研究；局限为仅纳入MSMLWH，不能外推至无HIV感染者、女性和跨性别者，失访常见，参考hr-HPV-DNA检测非商用，且未分析A-HPV-mRNA的HPV16/18/45部分分型。
研究结论（翻译）：总之，采用A-HPV-mRNA检测肛门拭子中的hr-HPV-mRNA，对MSMLWH中ASCUS+、LSIL+和HSIL+的检测特异性高于hr-HPV-DNA，而两种检测的敏感度、NPV和PPV相近。纵向数据显示，基线hr-HPV-mRNA检测阴性的男性中92%在3年后无aHSIL， regardless of baseline cytology/histology results（无论基线细胞学/组织学结果如何）。在MSMLWH肛门癌筛查中，hr-HPV-mRNA检测有潜力降低HRA转诊率；此外，hr-HPV-mRNA阴性结果可能允许安全延长随访间隔。未来研究应探讨将hr-HPV-mRNA检测与aHSIL+的其他生物标志物（如细胞DNA甲基化水平）联合，是否可进一步提高MSMLWH及其他高危人群肛门癌筛查的诊断准确性。
