《Journal of Clinical Medicine》：Expression of SIRT1–7 mRNA in Patients with Middle Ear Cholesteatoma
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背景： 中耳胆脂瘤是一种局部破坏性病变，可导致严重并发症，且单纯依靠药物治疗难以有效控制。尽管去乙酰化酶（sirtuins）是细胞代谢、氧化应激和炎症反应的关键表观遗传调控因子，但其在中耳胆脂瘤中的具体作用尚未被探索。本研究旨在探究去乙酰化酶的表
摘要专业翻译
背景： 中耳胆脂瘤是一种局部破坏性病变，可导致严重并发症，且单纯依靠药物治疗难以有效控制。尽管去乙酰化酶（sirtuins）是细胞代谢、氧化应激和炎症反应的关键表观遗传调控因子，但其在中耳胆脂瘤中的具体作用尚未被探索。本研究旨在探究去乙酰化酶的表达谱及其与胆脂瘤发病机制和临床特征的相关性。方法： 采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR）技术，对60例接受胆脂瘤手术患者的胆脂瘤组织及匹配的耳后皮肤对照样本中七种去乙酰化酶亚型（SIRT1–7）的相对mRNA表达水平进行检测。根据组织类型、患者性别及手术频次（初次手术与翻修手术）分析表达差异。结果： 临床方面，58.3%的患者出现耳漏，细菌培养阳性率为16.7%。传导性听力损失（conductive hearing loss）为主要听力学表现类型。所有胆脂瘤组织中均可检测到SIRT1–7 mRNA表达，其中SIRT1相对表达水平最高，依次为SIRT4、SIRT3、SIRT6、SIRT7、SIRT5和SIRT2。值得注意的是，与耳后皮肤对照相比，仅SIRT7在胆脂瘤组织中的表达显著下调（p = 0.002）。SIRT1–7的表达在患者性别及翻修手术史方面均未观察到显著差异（p > 0.05）。结论： SIRT1–7的差异性表达谱提示其可能参与中耳胆脂瘤的发病机制。尽管胆脂瘤组织中SIRT7 mRNA表达低于耳后皮肤，但这一探索性发现仍需采用组织学适宜的对照及功能性研究加以验证。
论文解读
一、研究背景与目的
中耳胆脂瘤是一种以角化鳞状上皮异常过度增殖及角蛋白碎屑在中耳腔内进行性积聚为特征的慢性疾病。组织学上，胆脂瘤由三层结构构成：由角化复层鳞状上皮组成的基质层、富含亚上皮结缔组织的周围基质层，以及最内层积聚角蛋白的囊性内容物。周围基质层中有大量炎症细胞浸润，包括淋巴细胞、组织细胞、浆细胞和中性粒细胞，其厚度与局部炎症严重程度及后续骨溶解活性直接相关。临床上，这种持续的结构改变可引发局部反复感染和邻近骨结构的不可逆破坏，导致传导性或感音神经性听力损失，甚至可能引发迷路瘘管或颅内感染等致命并发症。
尽管胆脂瘤发生和进展的确切机制仍存在争议，但慢性炎症和氧化应激在其发病机制中发挥关键作用已被广泛接受。周围基质层中免疫细胞的持续浸润不仅分泌大量促炎细胞因子，还产生过量的活性氧（reactive oxygen species, ROS），破坏氧化还原稳态，加剧组织损伤，促进上皮基质异常过度增殖和分化，并主动刺激破骨细胞介导的骨吸收。因此，阐明调控这一炎症和氧化微环境的分子机制，对于揭示中耳胆脂瘤的病因至关重要。
去乙酰化酶是一类高度保守的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）依赖性酶家族，作为基础代谢传感器，直接将细胞能量状态与适应性应激反应联系起来。哺乳动物中已鉴定出七种去乙酰化酶亚型（SIRT1–7），每种亚型具有不同的亚细胞定位和特异性底物，是细胞稳态的关键调控因子。去乙酰化酶作为氧化还原稳态的核心调控因子，深度参与缓解氧化应激、调节炎症级联反应、调控线粒体功能以及控制细胞衰老和凋亡。鉴于去乙酰化酶在抗氧化防御和免疫调节中的重要作用，SIRT1–7表达的改变很可能与胆脂瘤中持续存在的炎症和氧化应激密切相关。然而，此前尚无研究对中耳胆脂瘤中全部七种去乙酰化酶亚型的表达谱进行综合分析。因此，本研究旨在评估胆脂瘤组织与耳后皮肤对照中SIRT1–7的mRNA表达水平，并探讨其在疾病发病机制中的潜在临床意义。
二、研究设计与方法
本研究为一项回顾性观察性研究，纳入60例就诊于某三级医疗中心耳鼻咽喉头颈外科门诊的患者。中耳胆脂瘤的诊断依据为持续超过三个月的典型症状（如听力损失、鼓膜穿孔、耳漏、耳鸣和耳痛），经颞骨计算机断层扫描（TBCT）证实中耳及乳突腔存在病变，并经术前或术中活检获得明确的胆脂瘤组织病理学诊断。排除急性中耳炎、分泌性中耳炎、非胆脂瘤性慢性中耳炎、结核性中耳炎、头颈部畸形、系统性疾病或先天性/获得性免疫缺陷的疑似患者。研究经庆熙大学医学中心机构审查委员会批准（IRB 2023-05-016）。
研究采用的主要技术方法包括：对出现耳漏的患者进行微生物学评估和细菌培养鉴定；采用纯音测听（PTA）评估听力损失水平，按气骨导差和骨导阈值将听力损失分类为传导性、感音神经性或混合性；使用TRIzol试剂提取胆脂瘤组织和匹配耳后皮肤对照样本（60对）的总RNA，经NanoDrop分光光度计评估浓度和纯度后，以寡核苷酸（oligo(dT)18）引物合成cDNA；采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测SIRT1–7的mRNA表达水平，以β-actin为内参基因，采用2^-ΔCt方法计算相对表达量。统计分析采用配对t检验比较匹配组织间的表达差异，采用Student's t检验或Mann–Whitney U检验比较独立组间差异，并经Bonferroni校正将显著性阈值设定为p < 0.007。
三、研究结果
3.1 人口统计学与临床特征
共纳入60例胆脂瘤患者，平均年龄60.60 ± 13.07岁（范围21–80岁），其中男性27例（45.0%），女性33例（55.0%）。病变位于右耳者40例（66.7%），左耳者20例（33.3%）。临床表现为耳漏者35例（58.3%），细菌培养阳性者10例（16.7%），最常见菌株为铜绿假单胞菌，其次为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和木糖氧化无色杆菌。25例（41.7%）接受翻修手术，29例（48.3%）有既往乳突切除术史。听力学评估显示平均气导（AC）阈值64.10 ± 24.50 dB，骨导（BC）阈值38.58 ± 20.03 dB。传导性听力损失最为常见，见于38例（63.3%），其次为感音神经性听力损失21例（35.0%），听力正常者1例（1.7%）。
3.2 胆脂瘤组织中SIRT1–7 mRNA表达谱
所有60例胆脂瘤患者的炎症性中耳组织中均可检测到SIRT1–7 mRNA表达。定量分析显示，SIRT1 mRNA在去乙酰化酶家族中相对表达水平最高，各亚型相对表达量由高到低依次为SIRT1、SIRT4、SIRT3、SIRT6、SIRT7、SIRT5和SIRT2。
3.3 耳后皮肤与胆脂瘤组织SIRT1–7 mRNA表达比较
与耳后皮肤对照相比，胆脂瘤组织中SIRT1、SIRT4和SIRT6的表达呈上升趋势，而SIRT2、SIRT3、SIRT5和SIRT7呈下降趋势。值得注意的是，仅SIRT7的相对mRNA表达在胆脂瘤组织中显著下调（p = 0.002），其余亚型差异均无统计学意义（p > 0.05）。
3.4 SIRT1–7 mRNA表达与临床参数的关联
按患者性别和手术史（初次手术与翻修手术）分组分析，各SIRT亚型的表达谱均未观察到统计学显著差异（p > 0.05）。
四、讨论与结论
讨论部分指出，胆脂瘤中的骨吸收传统上归因于胆脂瘤团的机械压力，但后续研究证实骨溶解由酶促和炎症机制驱动。本研究首次对中耳胆脂瘤中SIRT1–7全部七种亚型的表达谱进行了综合分析。SIRT1作为研究最深入的亚型，在胆脂瘤组织中相对表达水平最高且呈上升趋势，提示其可能在胆脂瘤慢性炎症和骨吸收的发病中发挥调控作用，但因缺乏统计学显著性且对照组织为耳后皮肤而非正常中耳黏膜，其确切贡献尚不明确。最关键的发现是SIRT7 mRNA在胆脂瘤组织中显著下调。SIRT7主要定位于核仁，调控核糖体DNA转录、核糖体生物发生、细胞增殖、基因组稳定性和细胞应激反应。SIRT7敲除小鼠的研究显示，SIRT7缺乏可增加心肌细胞凋亡、降低细胞对氧化和基因毒性应激的抵抗能力，并诱发严重的炎症性心肌病。鉴于胆脂瘤组织以持续炎症、氧化应激和异常上皮增殖为特征的复杂微环境，SIRT7表达降低值得进一步关注，但当前数据尚不能确定其在胆脂瘤中的功能或因果作用，也无法判断SIRT7表达降低是胆脂瘤发生进展的原发驱动因素还是慢性炎症和组织损伤的继发结果。
研究结论部分翻译如下：这项探索性研究描述了中耳胆脂瘤组织相对于匹配耳后皮肤的SIRT1–7 mRNA表达特征。在七种亚型中，当前分析显示仅SIRT7 mRNA在胆脂瘤组织中的表达较低，而其他亚型未显示出统计学显著差异。由于对照组织并非正常中耳黏膜，且未评估蛋白表达和功能活性，这些发现尚不能确定SIRT7或去乙酰化酶家族在胆脂瘤发病机制中的因果作用。未来需采用组织学适宜的对照和功能性实验来确定这一观察结果的生物学及临床意义。
