雷公藤红素通过扰动NCOR2–HDAC3诱导EBV阳性结外NK/T细胞淋巴瘤的脂质相关应激和细胞凋亡

《Biochemical Pharmacology》：Celastrol induces lipid-associated stress and apoptosis in EBV-positive extranodal NK/T-cell lymphoma with NCOR2–HDAC3 perturbation

　　

摘要

EB病毒（EBV）阳性结外NK/T细胞淋巴瘤（ENKTL）在复发或难治性进展后仍难以治疗。我们在ENKTL细胞系模型中研究了雷公藤红素相关的染色质、脂质代谢及应激反应。雷公藤红素降低了SNK6和SNT8细胞的活力，增加了凋亡蛋白加工，抑制了短期SNK6异种移植生长，并增加了组织学凋亡标志物。化学蛋白质组学在雷公藤红素相关蛋白中鉴定了核受体辅阻遏物2（NCOR2）和核受体辅阻遏物1（NCOR1），免疫印迹拉下实验证实了NCOR2的回收。探针回收定位到NCOR2的含有去乙酰化酶激活结构域的区域。雷公藤红素改变了NCOR2的热稳定性，降低了其与组蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）的免疫共沉淀，并抑制了重组HDAC3/NCOR2的活性。2小时时的组蛋白H3赖氨酸27乙酰化（H3K27ac）图谱和24小时时的RNA测序揭示了染色质再分布以及相关的应激反应和脂质代谢转录变化。选择性凋亡、脂质代谢和应激反应蛋白变化在SNT8细胞中得到重现。在SNK6细胞中，HDAC3抑制剂RGFP966部分表型模拟了选择性雷公藤红素相关变化。NCOR2耗竭降低了脂质代谢酶的表达，并增强了雷公藤红素治疗期间凋亡标志物的积累，而与牛血清白蛋白偶联的油酸则部分减弱了应激和凋亡反应。全量RNA测序显示所检测的EBV裂解相关转录本没有协调诱导。这些发现将NCOR2–HDAC3相关扰动和脂质相关应激确定为EBV阳性ENKTL模型中雷公藤红素反应的组成部分。

引言

结外NK/T细胞淋巴瘤（ENKTL），鼻型，是一种侵袭性的EB病毒相关恶性肿瘤，在东亚和拉丁美洲具有地理分布优势。含放射治疗的策略和基于L-天冬酰胺酶的方案改善了预后，但复发或难治性疾病仍然难以控制[1], [2]。免疫检查点阻断在部分患者中产生疗效，但持久性存在差异[3], [4]。病毒潜伏、致癌信号传导和表观遗传失调共同参与了ENKTL的生物学过程[5], [6]。近期研究将表观遗传发育停滞和TET2相关DNA甲基化与ENKTL进展联系起来[7], [8]。代谢研究已确定SLC1A1介导的谷氨酰胺依赖性，以及循环脂质谱与临床结局之间的关联[9], [10]。这些发现促使我们研究宿主细胞对药理干预的染色质和代谢反应。

雷公藤红素是一种来源于雷公藤（Tripterygium wilfordii）的醌亚甲基三萜类化合物，具有广泛的临床前抗肿瘤活性，涉及蛋白质毒性和氧化应激、线粒体功能障碍、分子伴侣网络和炎症信号传导[11], [12], [13]。其亲电性支架支持与活性半胱氨酸的非共价识别和可逆共价反应[14], [15]。靶点鉴定研究已将过氧化物还原蛋白和肝星状细胞中的血红素加氧酶1、脓毒症中的丙酮酸激酶M2和高迁移率族蛋白1、肝细胞癌中的电压依赖性阴离子通道2以及耐药慢性粒细胞白血病中的YY1/HMCES列为雷公藤红素的作用靶点[16], [17], [18], [19]。关于肾毒性的化学蛋白质组学研究以及对雷公藤红素靶点的综述进一步说明了其情境依赖性和多靶点药理学特性[20], [21]。这些发现为在ENKTL中研究雷公藤红素相关蛋白和细胞反应提供了依据。

核受体辅阻遏物2（NCOR2），又称视黄酸和甲状腺激素受体沉默介导因子，与组蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）形成功能复合物。核受体辅阻遏物1（NCOR1）和NCOR2保守的去乙酰化酶激活结构域（DAD）对于有效激活HDAC3是必需的[22], [23], [24]。这些复合物参与染色质调节和脂质相关转录程序[25], [26]。在更广泛的淋巴瘤研究中，GNAS缺失已被证明通过病毒模拟相关的干扰素信号传导改变对HDAC3抑制的反应[27]。这一发现说明了HDAC3相关药物反应的情境依赖性；NCOR2–HDAC3扰动对ENKTL中雷公藤红素反应的贡献仍有待表征。

癌细胞需要脂质合成、去饱和和重塑以实现膜生物合成、细胞器功能和抵抗细胞应激[28], [29]。油酸等单不饱和脂肪酸可以在实验系统中减轻脂质相关损伤[30], [31]。因此，在ENKTL中，脂质代谢基因表达和应激信号传导的同步变化可能有助于识别改变药物反应的细胞过程。将这些变化与染色质调节结合研究，可能有助于解释雷公藤红素暴露的细胞后果。

在此，我们研究了雷公藤红素相关的NCOR2回收、NCOR2–HDAC3复合物功能、组蛋白H3赖氨酸27乙酰化（H3K27ac）、脂质代谢标志物、应激信号传导和凋亡。细胞实验和短期异种移植实验表征了抗肿瘤表型。NCOR2耗竭、药理学HDAC3抑制和油酸补充测试了这些干预措施是否改变了选择性细胞反应。通过标记目标下的切割和标记法（CUT&Tag）进行的H3K27ac图谱分析以及RNA测序（RNA-seq）提供了染色质和转录反应的互补观察

章节摘要

细胞培养与试剂

EBV阳性ENKTL细胞系SNK6和SNT8由复旦大学上海癌症中心的陶荣教授慷慨提供。SNK6和SNT8细胞在AIM-V培养基（Thermo Fisher Scientific，美国马萨诸塞州沃尔瑟姆；货号31035025）中培养，并补充20%胎牛血清（FBS；Cell-Box生物产品贸易有限公司，中国香港；货号AUS-01S-02）、重组人白介素-2（IL-2；诺普生物科学公司，中国江苏苏州；货号

雷公藤红素抑制EBV阳性ENKTL细胞活力并诱导凋亡性细胞死亡

我们首先评估了雷公藤红素在EBV阳性ENKTL细胞系SNK6和SNT8中的药理活性。经48小时处理后，雷公藤红素以浓度依赖的方式降低了两种细胞系的活力（图1A）。SNK6细胞表现出更大的敏感性，估计半数抑制浓度（IC₅₀）为490.5 nM，而SNT8细胞的估计IC₅₀为755.6 nM。

随后在SNK6细胞中对细胞反应进行了更详细的表征。相差显微镜显示进行性

讨论

本研究记录了雷公藤红素在EBV阳性ENKTL模型中的抗肿瘤效应，并确定了细胞中NCOR2相关辅阻遏物功能和脂质代谢应激反应的变化。雷公藤红素降低了SNK6和SNT8细胞的活力，增加了凋亡蛋白加工，并抑制了短期SNK6异种移植生长。在SNT8中重现的选择性蛋白反应将细胞学发现扩展到了SNK6之外。NCOR2耗竭、药理学HDAC3抑制和

CRediT作者贡献声明

黄曦：撰写—初稿、可视化、方法学、调查研究、形式分析、数据管理。陈文扬：撰写—初稿、方法学、调查研究、资助获取、形式分析、数据管理。傅雨敏：验证、方法学、调查研究、形式分析、数据管理。刘汀博：资源、调查研究、资助获取。刘健智：撰写—审阅与编辑、监督、项目管理。沈建真：撰写—审阅与编辑，

资助

本研究得到中国博士后科学基金（编号2025M772789）、福建省自然科学基金（编号2024J01323928和2025J01783）以及福建省科技联合基金（编号2023Y9140）的支持。

利益冲突声明

作者声明，他们之间没有已知的竞争性经济利益或个人关系，这些利益或关系可能影响本文所报告的工作。

致谢

感谢复旦大学上海癌症中心的陶荣教授慷慨提供SNK6和SNT8细胞系。BioRender插图由谢G.（2026年）创作，https://BioRender.com/asypli0。

黄曦|陈文扬|傅雨敏|刘汀博|刘健智|沈建真|谢国江