SARS-CoV-2感染后嗅黏膜α-突触核蛋白（aSyn）种子活性与持续性嗅觉功能障碍的关联：一项初步观察研究

《Acta Neuropathologica》：Prevalence of alpha-synuclein seeding activity in the Olfactory Mucosa following SARS-CoV-2 infection: results from a pilot study

　　

嗅觉功能障碍（olfactory dysfunction，OD）是SARS-CoV-2感染的标志性表现，据认为由病毒经嗅黏膜（olfactory mucosa，OM）侵入所诱导的神经炎症引起。嗅觉减退也影响大多数帕金森病（Parkinson’s disease，PD）患者，其由嗅觉系统中的α-突触核蛋白（α-synuclein，aSyn）病理引起，并且可用aSyn种子扩增试验（aSyn-seeding-amplification-assay，aSyn-SAA）在OM中检测aSyn种子活性。本初步研究旨在用aSyn-SAA探讨SARS-CoV-2感染是否在OM样本中诱导局部aSyn错误折叠和聚集。研究人员开展了一项观察性研究，纳入PD患者（n = 51）、有症状性SARS-CoV-2感染确诊史者（post-COVID；n = 95）和健康对照（healthy controls，HC；n = 42）。post-COVID参与者依据持续性OD（COVID+OD；n = 42）或嗅觉正常（COVID–OD；n = 53）分层，使用Sniffin’-Sticks-Identification（SSI）和Sniffin’-Sticks-Discrimination（SSD）测试。OM样本由耳鼻喉科专家获取，并由维罗纳大学以aSyn-SAA分析。临床表型包括MDS-UPDRS、MoCA和Innsbruck-RBD-Inventory。OM-SAA阳性率在PD与post-COVID参与者及HC之间显著不同（80.4% vs 24.2% vs 11.9%；p < 0.001）。在post-COVID组内，COVID+OD的阳性率高于COVID–OD（35.7% vs 15.1%；p = 0.030），且COVID+OD与HC不同（p = 0.030），而COVID–OD与HC无差异（p = 0.65）。在post-COVID参与者中，aSyn-SAA阳性与较低SSI（p = 0.007）和SSD（p < 0.001）评分相关，但与MDS-UPDRS、MoCA或RBD指标无关。OM-SAA阳性在持续性post-COVID-OD个体中富集，并与嗅觉损害相关。这些发现支持以下假说：SARS-CoV-2感染后神经炎症可能促进局部aSyn聚集。OM-SAA阳性的生物学和预后相关性尚不清楚，需进一步前瞻性研究。

该论文发表于《Acta Neuropathologica》。论文关注SARS-CoV-2感染后持续性嗅觉功能障碍（olfactory dysfunction，OD）与嗅黏膜（olfactory mucosa，OM）中α-突触核蛋白（α-synuclein，aSyn）种子活性的关系。OD是SARS-CoV-2感染的标志性症状，通常认为与病毒经OM侵入诱导的神经炎症有关；而嗅觉减退也是帕金森病（Parkinson’s disease，PD）常见非运动特征，可由嗅觉系统aSyn病理引起，并可用aSyn种子扩增试验（aSyn-seeding-amplification-assay，aSyn-SAA）在OM中检测。实验资料提示SARS-CoV-2神经侵袭和炎症可能促进aSyn错误折叠，但SARS-CoV-2感染后OM中aSyn种子活性的流行率及其与持续性OD的关系尚不清楚，因此研究人员开展该项初步观察研究，比较post-COVID个体、PD阳性对照和健康对照（healthy controls，HC）的OM-SAA阳性率，并分析其与嗅觉、运动、认知及REM睡眠行为障碍（REM sleep behavior disorder，RBD）指标的关系。

研究人员采用的主要关键技术方法包括：从专科post-COVID门诊连续转诊、本中心既往观察性研究参与者及医院工作人员/亲属个人联系中招募样本，PD参与者来自运动障碍门诊；开展标准化神经系统检查、MDS-UPDRS、MoCA、Innsbruck-RBD-Inventory及Sniffin’-Sticks-Identification（SSI）/Sniffin’-Sticks-Discrimination（SSD）嗅觉测试；由耳鼻喉科专家刷取OM样本；在维罗纳大学以aSyn-SAA（RT-QuIC）检测aSyn种子活性；统计分析采用卡方检验、ANOVA/ANCOVA、logistic回归及年龄和性别平衡敏感性分析。

总体OM-SAA结果显示，共纳入188人：PD 51例、post-COVID 95例（COVID+OD 42例、COVID–OD 53例）、HC 42例。OM-SAA阳性率分别为PD 80.4%、post-COVID 24.2%、HC 11.9%（p < 0.001）；PD与post-COVID及HC均显著不同（均p < 0.001），post-COVID与HC差异不显著。通过横断面组间比较和卡方检验得出上述结论。

结果小标题“健康对照与SARS-CoV-2感染后参与者的OM-SAA结果”显示，在HC和post-COVID共137人中OM-SAA阳性率为20.4%（28/137）；HC为11.9%、COVID+OD为35.7%、COVID–OD为15.1%；组别与OM-SAA状态总体相关（χ²(2) = 8.84，p = 0.012，Cramer’s V = 0.25）；COVID+OD高于HC和COVID–OD（FDR校正p = 0.030），COVID–OD与HC无差异（p = 0.65）。年龄和性别校正logistic回归中组别仍显著（omnibus χ²(4) = 10.14，p = 0.038，Nagelkerke R² = 0.11），组别为唯一显著预测因素，年龄和性别均不相关；校正两两logistic回归确认COVID+OD的OM-SAA阳性几率高于HC和COVID–OD。通过该组分析得出，OM-SAA阳性升高特异于post-COVID伴持续性OD者。

结果小标题“健康对照与SARS-CoV-2感染后参与者的临床结局”显示，年龄和性别校正ANCOVA中，MoCA组间差异显著（F = 3.50，p = 0.033，partial η² = 0.05），年龄与MoCA强相关（F = 42.14，p < 0.001，partial η² = 0.24），性别无显著效应；事后比较显示COVID+OD低于HC（p = 0.038）。MDS-UPDRS总分组间差异显著（F = 10.27，p < 0.001，partial η² = 0.13），年龄相关（F = 29.21，p < 0.001，partial η² = 0.18），性别无显著效应；COVID+OD高于HC（p < 0.001）和COVID–OD（p = 0.015）。MDS-UPDRS Part I（F = 5.01，p = 0.008，partial η² = 0.07）、Part II（F = 4.05，p = 0.020，partial η² = 0.06）、Part III（F = 6.63，p = 0.002，partial η² = 0.09）均存在组效应；COVID+OD较HC在Part I（p = 0.006）、Part II（p = 0.021）、Part III（p = 0.002）更高，Part III在COVID+OD高于COVID–OD（p = 0.025）。年龄和性别平衡敏感性分析每组33人，结果与主分析相近，确认COVID+OD较HC MoCA更低、MDS-UPDRS总分更高，Part I和Part III更高，Part II未达显著。通过该分析得出，COVID+OD存在较低认知筛查评分和较高MDS-UPDRS评分，且敏感性分析支持其主要发现稳健。

结果小标题“SARS-CoV-2感染后参与者中OM-SAA阳性者与阴性者的临床结局”显示，OM-SAA阳性与阴性post-COVID者年龄可比；年龄和性别校正ANCOVA显示OM-SAA阳性者SSD较低（F = 12.51，p < 0.001，partial η² = 0.12）、SSI较低（F = 7.61，p = 0.007，partial η² = 0.08）；年龄与SSD和SSI强相关（均p < 0.001；partial η²分别为0.13和0.26），性别无显著效应；OM-SAA阳性与MDS-UPDRS总分或子分数、MoCA或RBD-I评分无显著关联。通过该分析得出，在post-COVID者中OM-SAA阳性与嗅觉识别和辨别损害相关，而未与运动、认知或RBD筛查指标相关。

讨论部分总结：本初步研究在持续性post-COVID OD者中约三分之一检测到OM aSyn种子活性；无OD的post-COVID者OM-SAA阳性率与HC相似（15.1% vs 11.9%），与既往研究总体一致。PD者OM-SAA阳性率高（80.4%），处于既往OM基质研究报道的上限范围。虽然整个post-COVID队列与HC总体OM-SAA阳性率无显著差异，但持续性OD者阳性率较高，提示SARS-CoV-2相关嗅黏膜损伤可能在炎症背景下触发局部aSyn错误折叠。近期对持续性post-COVID嗅觉减退患者嗅神经元的研究显示持续炎症改变，而寡聚α-synuclein和其他神经退行标志物未较HC增加；外周aSyn聚集能否持续、向中枢传播并最终导致临床PD或其他突触核蛋白病仍属推测。COVID+OD者MoCA较低、MDS-UPDRS总分较高，后者主要由Part I非运动日常生活体验损害和Part III轻微客观运动异常驱动；不能由现有数据推断因果，但该模式与持续性post-COVID嗅觉功能障碍可能伴随更广泛神经精神后遗症的报道相容。Part III评分较高值得关注，因为嗅觉减退是PD最强前驱标志之一；不过绝对运动评分仍低，不提示临床明显帕金森综合征，且本研究中OM-SAA阳性未与运动表现相关，反对嗅黏膜aSyn种子与运动发现存在简单关系；这些细微运动异常反映持续性post-COVID后遗症、既存前驱神经退行改变还是二者交互尚不清楚，需纵向研究结合多巴胺能影像及液体和组织生物标志物确定。实验研究显示SARS-CoV-2对黑质多巴胺能神经元及干细胞衍生多巴胺能神经元有害，SARS-CoV-2诱导的神经炎症可能触发aSyn错误折叠和聚集，并可能加重或诱导α-突触核蛋白病。尽管post-COVID持续性OD者OM-SAA阳性率增加在生物学上合理，但现有结果不足以判断其预后相关性，需长期随访明确感染后OM-SAA阳性是暂时现象还是持续发现；α-synuclein病理在post-COVID嗅觉减退者中富集与PD伴嗅觉损害者SAA阳性率较高相平行，进一步支持α-synuclein种子活性与嗅觉通路受累相关。研究优势在于对有SARS-CoV-2感染史个体评估OM-SAA阳性并开展客观嗅觉和临床表型分析；局限包括post-COVID样本量较小、因一般人群SARS-CoV-2暴露和既往感染增加而难以招募COVID-na?ve HC、横断面设计、连续招募致HC与post-COVID年龄不完全平衡；通过年龄和性别校正及年龄性别平衡敏感性分析，主要发现总体稳健，但较小平衡队列中个别MDS-UPDRS子分数显著性有所差异，总体模式和解释未变；OM-SAA阳性与阴性比较未做相应敏感性分析，因两组年龄更接近且所有分析均校正年龄和性别；此外不能完全排除部分HC存在未识别的既往SARS-CoV-2感染，因可区分感染与疫苗诱导血清反应的核衣壳抗体检测在HC招募完成后才引入。研究结论翻译：OM-SAA阳性在持续性post-COVID OD个体中富集，并与嗅觉损害相关；该发现反映短暂感染后现象还是早期突触核蛋白病特征尚待确定。