肌肽添加改善小鼠卵母细胞玻璃化冻融后的发育能力：降低氧化应激并增强线粒体功能

《Journal of Ovarian Research》：Carnosine enhances mouse oocyte vitrification outcomes with associated redox and transcriptional changes

　　# 摘要## 背景卵母细胞玻璃化冻融技术已广泛应用于生育力保存，但冷冻保存相关的氧化应激和线粒体功能障碍可能损害随后的胚胎发育。本研究旨在探讨添加肌肽是否能够改善玻璃化冻融小鼠卵母细胞的发育能力。## 方法将处于第二次减数分裂中期（MⅡ）的卵母细胞在含有0、100或500 μM肌肽的条件下进行玻璃化冷冻和复温，随后进行卵胞浆内单精子注射并培养胚胎。新鲜卵母细胞作为对照组。对100 μM组及对照组中的活性氧（ROS）、线粒体膜电位以及NANOG阳性上胚层（EPI）细胞计数进行评估。在一个独立实验中，对NADH/FAD成像进行了描述性分析。对获得的2细胞期胚胎进行了蛋白质组学和转录组学分析。## 结果两种浓度的肌肽均显著恢复了2细胞形成率（分别为80%和81%，对照组为70%）和囊胚形成率（分别为59%和56%，对照组为40%）。在100 μM浓度下，与常规玻璃化冻融相比，肌肽显著降低了ROS荧光水平，并增加了NANOG阳性EPI细胞数量。添加肌肽后JC-1比值数值升高，提示线粒体膜电位可能有所改善。描述性NADH/FAD成像显示，添加肌肽组的自发荧光信号更高。晚期2细胞胚胎的蛋白质组学分析鉴定出与肌肽相关的蛋白质变化，包括mRNA输出支架蛋白Thoc2和肌动蛋白基马达蛋白Myo1c的上调，以及应激伴侣蛋白Clusterin的下调。转录组学分析鉴定出1026个差异表达基因，富集于转录调控通路；通过RT-PCR验证了细胞命运决定相关基因Tfap2c的表达变化。## 结论添加肌肽可改善小鼠卵母细胞玻璃化冻融后的着床前发育，并与氧化应激降低和EPI细胞数量增加相关。线粒体观察和分子谱分析提示了潜在的作用机制。本研究结果支持进一步评估肌肽作为卵母细胞冷冻保存添加剂的可行性。