SFN通过PAK1–MYC–NECTIN2/TIGIT信号轴调控肝内胆管癌中NK细胞抑制及免疫逃逸机制

《Journal of Translational Medicine》：Tumor-intrinsic stratifin contributes to NECTIN2–TIGIT-mediated NK-cell suppression and therapeutic vulnerability in intrahepatic cholangiocarcinoma

　　

摘要

背景

肝内胆管癌（ICC）是一种侵袭性恶性肿瘤，对免疫治疗的反应有限。自然杀伤（NK）细胞无需抗原预先呈递即可清除肿瘤细胞，但其细胞毒性在肿瘤微环境中常受到抑制。在ICC中，限制NK细胞活性并重塑肿瘤–NK细胞通讯的肿瘤内在机制仍不清楚。

方法

整合bulk RNA测序、单细胞RNA测序、蛋白质组学、组织微阵列及外部队列数据，以刻画ICC中的免疫重塑特征并筛选候选调控因子。功能研究采用ICC细胞系、NK细胞共培养系统及小鼠ICC模型开展。通过流式细胞术、免疫荧光、免疫组化及功能实验评估NK细胞的浸润与活性。利用基于CellChat的配体–受体推断方法提名候选肿瘤–NK细胞信号轴，并通过共培养、基因救援及受体阻断实验评估其功能相关性。采用免疫共沉淀、泛素化实验、ChIP-qPCR及双荧光素酶报告基因实验探究SFN相关信号通路以及NECTIN2/TIGIT介导的肿瘤–NK细胞通讯机制。

结果

基于其在ICC肿瘤细胞中高表达、与不良预后相关以及与免疫浸润呈负相关等特点，14-3-3σ（Stratifin，SFN）被列为候选肿瘤内在调控因子。SFN高表达肿瘤中瘤内NK细胞数量减少，且NK细胞功能特征受损。在小鼠mIC-23原位移植ICC模型中，SFN敲低增强了NK细胞浸润及效应活性，而NK细胞耗竭则减弱了SFN敲低的抗肿瘤效果。基于CellChat的配体–受体推断及功能扰动实验支持NECTIN2/TIGIT信号在SFN相关NK细胞抑制中的作用。机制上，SFN与PAK1相互作用，与TRIM21相关的K48连接泛素化减少及PAK1蛋白稳定性增加相关。SFN相关的PAK1–AKT/GSK-3β信号通路促进MYC激活，MYC参与NECTIN2的转录调控。化疗联合PD-1与TIGIT阻断在小鼠mIC-23原位移植ICC模型中增强了抗肿瘤反应及NK细胞活性。探索性回顾分析提示SFN高表达可能与免疫治疗反应降低相关。

结论

这些发现支持这样一个模型：肿瘤内在的SFN信号通过PAK1–MYC相关信号轴，参与NECTIN2/TIGIT介导的肿瘤–NK细胞通讯。本研究为ICC中NK细胞功能障碍提供了机制层面的见解，并支持进一步评估化疗联合PD-1/TIGIT阻断策略。