小叶女贞（Ligustrum ovalifolium，木犀科）是一种在许多国家广泛栽培的绿篱植物。2021年12月，印度旁遮普邦Doaba地区一处私人花园中生长的小叶女贞出现了叶绿斑点及花叶症状。现场存在的粉虱及症状特征提示可能感染单双核病毒。从5株病株中采集了带病叶片样品，提取总DNA，并使用单双核病毒衣壳蛋白特异性引物进行PCR扩增（Wyatt和Brown 1996）。全部5份带病样品均扩增出约570 bp的片段，该片段经1%琼脂糖凝胶纯化后直接测序，无需克隆。对所得序列进行BLAST分析，确认存在一种与番茄叶卷Joydebpur病毒（ToLCJV）具有相似性的单双核病毒。

为进一步研究该初步鉴定出的病毒，研究人员从GenBank数据库检索了15份ToLCJV分离株的全基因组序列并进行比对。基于比对序列中的保守区域设计了病毒特异性引物。引物TLCV-AF（5'-GAGGTCAGCAATCTGCCAAC-3'）和TLCV-AR（5'-CTCTAGCTGATCTTCCATCG 3'）用于扩增约1.7 kb的ToLCJV部分基因组片段。PCR扩增条件如下：94 °C预变性3 min（1个循环），随后进行30个循环，每个循环包括94 °C 1 min、56 °C 40 s、72 °C 3 min 15 s，最后72 °C延伸7 min。全部5份带病样品均获得约1.7 kb的PCR产物，将其克隆至pGEM?-T Easy载体（Promega，美国）中，经纯化后进行测序。利用ORF Finder和BLASTP分析对所获序列进行了分析。所得序列修剪至1691个核苷酸，并提交至NCBI GenBank数据库，登录号为OQ128010。BLAST分析显示，该鉴定出的分离株与ToLCJV（GenBank登录号HM007098）具有98.76%的核苷酸一致性。ToLCJV感染L. ovalifolium的发现扩展了该病毒的已知寄主范围。据我们所知，这是ToLCJV感染L. ovalifolium的首次报道。