摘要
背景
Hippo通路效应因子YAP1已被发现与前列腺癌的进展、迁移及去势抵抗相关,但药物抑制YAP1如何重塑前列腺癌蛋白质组目前仍缺乏表征。
方法
我们采用无标记定量蛋白质组学结合功能学实验,表征选择性YAP1抑制剂CA3在雄激素非依赖性PC3和雄激素敏感性LNCaP前列腺癌细胞中的蛋白质组及表型效应,并通过伤口愈合实验、Western blot以及针对黏着斑激酶(FAK)、波形蛋白(vimentin)、旁细胞闭塞蛋白(occludin)和连接黏附分子A(JAM-A)的免疫检测实验对关键发现进行验证。
结果
CA3以剂量和时间依赖的方式降低两种细胞系的细胞活力和YAP1蛋白水平(p?0.05)。非线性回归分析得出的24 h IC50值分别为PC3细胞1.59?μM(95% CI,1.38–1.83)和LNCaP细胞0.63?μM(95% CI,0.53–0.77),对应的48 h值分别为0.59?μM(95% CI,0.50–0.69)和0.49?μM(95% CI,0.39–0.62)。CA3在非致瘤性PNT1A前列腺上皮细胞系中表现出显著较低的功效(24 h IC50为18.87?μM;48 h IC50为4.47?μM),对应约7至30倍的选择性窗口,有利于癌细胞的靶向。无标记定量蛋白质组学在PC3和LNCaP细胞中分别鉴定出365个和153个差异表达蛋白(DEPs)。功能富集分析揭示了与RNA代谢和翻译相关的通路在不同细胞系中的依赖性改变,以及迁移和黏附相关过程,包括黏着斑、细胞骨架组织和导向信号通路。将这些蛋白与基因本体细胞迁移基因集(GO:0016477)进行比较,鉴定出EGFR、SRC、TGFB1、IL6和SCARB1为PC3细胞中的枢纽蛋白,RAC1、RHOC、NF1、FSCN1和ASPM为LNCaP细胞中的枢纽蛋白。功能验证确认CA3降低了两种细胞系的伤口愈合能力,降低了FAK蛋白水平,在PC3细胞中选择性降低了波形蛋白水平,在两种细胞系中均增加了旁细胞闭塞蛋白水平,并在PC3细胞中特异性增加了JAM-A水平(所有p?0.05)。
结论
据我们所知,本研究首次表征了前列腺癌细胞中CA3诱导的蛋白质组变化,并将这些变化与迁移相关蛋白质网络联系起来,且研究涵盖了具有不同雄激素依赖性的细胞系。
利益冲突
作者在过去2年内与任何在本手稿中显著涉及其产品的公司,或生产竞争产品的公司,均无财务安排(咨询、股票持有、股权利益、专利许可协议、研究支持、酬金或类似安排)需要披露。
数据可用性声明
本研究中产生的质谱蛋白质组学数据及其他所有数据集均可由通讯作者根据合理请求提供。


