伊朗三个地区流产相关反刍动物中Schmallenberg病毒（SBV）既往暴露的病毒中和试验血清学证据

《Veterinary Medicine and Science》：Serological Evidence of Schmallenberg Virus Exposure in Ruminant Abortion Cases from Selected Regions of Iran: A Virus Neutralization Test-Based Study

　　

背景：Schmallenberg病毒（SBV）是一种新发正布尼亚病毒（Orthobunyavirus），与反刍动物生殖障碍相关。尽管SBV已从欧洲传播至亚洲部分地区，但伊朗的流行病学数据仍有限。目的：采用病毒中和试验（VNT）调查伊朗选定地区反刍动物中SBV暴露情况。方法：从伊朗东部（Sistan and Baluchestan）、中部（Qazvin）和西部（East Azerbaijan）三省采集92份反刍动物（37只羊和55头牛）血清样本，这些动物有流产史或SBV相容临床症状。血清经灭活、连续稀释（1:5–1:640），并以BHK-21细胞进行四复孔VNT，使用回滴定的SBV接种物（125 TCID₅₀/孔）。结果：92份样本中70份（76.1%）SBV中和抗体阳性（≥1:10）。东部、中部和西部地区的血清阳性率分别为87.5%（14/16）、64.1%（25/39）和83.8%（31/37）。平均VN₅₀滴度呈描述性差异，西部最高（60.47 ± 57.65），中部次之（43.30 ± 56.65），东部最低（22.73 ± 13.72）。尽管Kruskal–Wallis检验提示抗体滴度总体差异（p = 0.022），但Bonferroni校正后的事后（post hoc）两两比较未发现任何地区间差异有统计学显著性。因此，地区变异应视为探索性，不应解释为已确认的SBV暴露地理差异。结论：本研究提供反刍动物既往SBV暴露的血清学证据。血清阳性表明既往暴露，不能建立SBV感染与流产之间的因果关系。尽管描述性观察到平均抗体滴度的地区差异，但这些模式应视为探索性，因为多重检验校正后两两地区比较未保持统计学显著性。需要更大规模、基于群体且样本量平衡的研究以阐明伊朗SBV地理分布模式。

Schmallenberg病毒（SBV）是一种新发正布尼亚病毒（Orthobunyavirus），属Peribunyaviridae科Simbu血清组，与反刍动物流产及先天性异常等生殖障碍相关。SBV已从欧洲扩散至亚洲部分地区，邻国阿塞拜疆、土耳其和巴基斯坦已有暴露报道；伊朗此前仅有基于酶联免疫吸附试验（ELISA）的马和牛血清学资料，尚无VNT证据。由于伊朗的地理位置、跨境牲畜移动以及可能支持库蠓属（Culicoides）媒介的生态条件，有必要调查流产相关反刍动物中SBV暴露。研究人员因此开展探索性横断面研究，以VNT检测中和抗体，为未来监测提供基线数据；其意义在于补充伊朗VNT血清学证据，但血清阳性仅提示既往暴露，不能确定SBV与流产的因果关系。

关键技术方法（≤250字）：研究纳入伊朗东部Sistan and Baluchestan、中部Qazvin和西部East Azerbaijan三省2024年1—9月收集的92份血清（37只羊、55头牛），来源动物均有流产史或SBV相容临床症状，采用目的性采样。血清经56°C灭活30 min，自1:5至1:640连续倍比稀释，四复孔与回滴定SBV野毒株（125 TCID₅₀/孔）在BHK-21（幼仓鼠肾细胞）中孵育7天，以细胞病变效应（CPE）完全抑制判定≥1:10为阳性，Spearman–K?rber法计算VN₅₀（50%病毒中和滴度）。统计分析采用Kruskal–Wallis检验及Bonferroni校正的Mann–Whitney U两两比较。

研究结果：总体血清阳性方面，92份中70份（76.1%，95%置信区间（CI）66.4–83.6）VNT阳性；羊28/37（75.7%，95%CI 59.9–86.6），牛42/55（76.4%，95%CI 63.7–85.6），描述性阳性率相近。地区阳性率东部87.5%（14/16）、中部64.1%（25/39）、西部83.8%（31/37）。通过VNT和描述统计得出所有调查地区均存在既往暴露证据。

3.1 中和抗体滴度分布：东部<1:10为2/16（12.5%），1:10–1:20为4/16（25.0%），1:20–1:40为10/16（62.5%），无>1:40；中部<1:10为14/39（35.9%），1:10–1:20为3（7.7%），1:20–1:40为8（20.5%），1:40–1:80为7（17.9%），1:80–1:160为7（17.9%）；西部<1:10为6/37（16.2%），1:10–1:20为1（2.7%），1:20–1:40为9（24.3%），1:40–1:80为11（29.7%），1:80–1:160为10（27.0%）。西部≥1:40为56.8%，中部35.9%，东部0。通过滴度分布描述得出地区间数值模式不同，但属描述性。

3.2 地区间中和抗体滴度比较：平均VN₅₀西部60.47 ± 57.65、中部43.30 ± 56.65、东部22.73 ± 13.72；平均秩西部55.46、中部42.1、东部36.1。Kruskal–Wallis总体差异p = 0.022，但Bonferroni校正的Mann–Whitney U两两比较无显著差异（校正阈值p < 0.01）。因此通过非参数检验得出总体差异应谨慎解释，地区变异为探索性，不能视为已确认地理差异。

讨论部分总结：所有样本来自流产相关或临床疑似动物，属高风险亚组，不能代表伊朗一般反刍动物群体。SBV主要经库蠓属（Culicoides）叮咬传播，也存在媒介垂直传播和宿主动物垂直传播的假说；这些机制不能解释本研究的血清学模式。Zeynalova等报告阿塞拜疆2012—2018年间两波SBV流行，并提示伊朗西北部库蠓可能参与病毒传入阿塞拜疆；本研究西部与阿塞拜疆接壤地区描述性平均滴度较高，但不能确定跨境来源、方向或路径。Rasekh等曾在伊朗东部三省牛中报道ELISA血清阳性率12.45%（34/273）；本研究东部血清阳性率较高但滴度较低，可能与目的性采样、样本量有限及试验形式不同有关。ELISA主要检测核蛋白（N）抗体，VNT主要检测针对糖蛋白Gn和Gc的功能性中和抗体，二者不可直接比较感染动态。Wernery等报告巴基斯坦单峰骆驼86%血清阳性率，提示区域多物种监测需求。原文还指出中部省份此前无已发表反刍动物血清学或分子数据。局限性包括：目的性采样、地区样本量不均、VNT与Simbu血清组病毒可能交叉反应、未进行分子检测和病毒特征分析、不能判断活动感染或因果关系。

研究结论（翻译）：本研究提供基于VNT的血清学证据，表明伊朗选定地区流产相关和临床疑似的小反刍动物与大反刍动物存在既往SBV暴露。所有调查地区均观察到高血清阳性率，为这一临床选择人群中既往SBV暴露提供证据。尽管平均中和抗体滴度在西部描述性最高、东部最低，但多重比较校正后这些地区差异未保持统计学显著性，因此应视为探索性观察而非已确认的地理差异。这些结果为伊朗未来SBV监测提供基线；然而，目的性采样策略及地区和物种代表性的不均衡限制了外推到更广泛反刍动物群体。需要更大规模、基于群体且地理和物种代表性平衡的研究以阐明SBV暴露模式及其流行病学决定因素。分子监测和纵向研究将有助于确定活动性病毒感染范围并评估其与生殖疾病的潜在关系。