Salvia dumetorum氢乙醇提取物片剂的植物化学、生物活性与临床前安全性综合评估

《Molecules》：From Salvia dumetorum Hydroethanolic Extract to Tablet Formulation: Integrated Phytochemical, Biological, and Preclinical Safety Evaluation

　　

背景/目的：Salvia dumetorum Andrz. ex Besser是一种研究相对不足的药用植物，具有潜在生物活性，但其植物化学特征及基于其提取物所开发制剂的安全性仍研究不足。本研究旨在表征S. dumetorum提取物的植物化学成分与生物学特性，并评价基于该提取物开发片剂的临床前安全性。方法：采用微波辅助提取获得氢乙醇提取物，并以HPLC-ESI-QTOF-MS/MS（高效液相色谱-电喷雾电离-四极杆飞行时间串联质谱）表征；采用分光光度法和微生物学测定总酚含量（TPC）、总黄酮含量（TFC）、抗氧化、α-淀粉酶抑制及抗菌活性。结果：提取物TPC和TFC分别为40.15 ± 2.25 mg GAE/g_extrt和40.55 ± 5.56 mg QE/g_extr。HPLC-QTOF-ESI-MS/MS分析显示酚类、黄酮类、二萜类及有机酸类成分的多样谱。提取物具强抗氧化活性，Trolox等效抗氧化能力（TEAC）、总抗氧化能力（TAC）和铁还原抗氧化能力（FRAP）分别为1.88 ± 0.07 mM、250.43 ± 12.08 mg AsAE/g_extr和427.91 ± 9.74 mg TE/g_extr，DPPH IC₅₀为0.03 ± 0.00 mg/mL。α-淀粉酶抑制活性为5.63 ± 0.51 mg AcrE/g_extr；对受试微生物的抗菌活性在MIC为1.25–10 mg/mL时观察到。所得片剂保留可测的抗氧化和α-淀粉酶抑制活性，尽管其活性谱与原始提取物不同。综合体内评价显示重复给药后无治疗相关不良效应，包括对免疫参数、雌性生殖功能、胚胎胎仔发育、骨骼骨化或致敏无显著影响。结论：S. dumetorum提取物显示多样生物活性，而片剂制剂显示良好临床前安全性特征。研究结果扩展了现有急性毒性数据，并支持该片剂制剂的进一步药物开发。

研究背景与目的：药用植物仍是生物活性化合物的重要来源，Salvia L.（唇形科）因成分多样及抗氧化、抗菌、抗炎等活性受到关注。从活性提取物到药品不仅需证明药理潜力，还需系统表征安全性；植物制剂含复杂初生和次生代谢物，其效应可受物种、提取工艺、提取物组成、剂量、给药途径和制剂影响。S. dumetorum Andrz. ex Besser分布于中亚，在哈萨克斯坦包括中部地区有自然分布，但植物化学、生物活性尤其是安全性研究不足；其片剂虽已有开发和急性经口毒性数据，但重复暴露、雌性生殖功能、胚胎胎仔发育、免疫反应及致敏等尚未充分评价。本研究即对S. dumetorum提取物及片剂进行综合植物化学、生物活性和临床前安全性评价，重点评估片剂重复给药后的系统耐受性、免疫毒性、雌性生殖功能、胚胎胎仔发育、骨骼骨化和局部刺激/致敏潜力。结论显示提取物具多样生物活性，片剂具良好临床前安全性，扩展了急性毒性证据并支持进一步药物开发。

关键技术方法：叶片于2025年7月采自哈萨克斯坦Karaganda附近（49°88.898′ N，73°15.569′ E），经M.Yu. Ishmuratova鉴定，凭证标本QAR00068存于E.A. Buketov Karaganda University；动物来自认证繁殖设施。以微波辅助提取制备40%乙醇提取物，HPLC-ESI-QTOF-MS/MS（高效液相色谱-电喷雾电离-四极杆飞行时间串联质谱）鉴定成分；分光光度法测总酚（TPC）、总黄酮（TFC）、Trolox等效抗氧化（TEAC）、总抗氧化（TAC）、铁还原抗氧化（FRAP）、DPPH自由基清除及α-淀粉酶抑制；EUCAST肉汤微量稀释测最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌/杀真菌浓度（MBC/MFC）；直接压片并质控；用小鼠角叉菜胶足肿胀、3周重复给药与免疫毒性、大鼠生殖与胚胎胎仔发育、豚鼠皮肤刺激/致敏模型。

研究结果：
2.1.1 HPLC-QTOF-ESI-MS/MS Profiling of S. dumetorum Extract：负离子模式下暂定鉴定39个化合物，涵盖酚酸、苯丙素、黄酮及其苷、二萜、脂肪酸和有机酸；结论为提取物具多样酚类等成分谱，并扩展了该种已知成分。
2.1.2 Total Phenolic Content and Total Flavonoid Content of the Extract and Tablets：提取物TPC为40.15 ± 2.25 mg GAE/g_extr、TFC为40.55 ± 5.56 mg QE/g_extr；片剂TPC为38.91 ± 9.63 mg GAE/g_tablet，TFC未检出；结论为片剂保留可测酚类，黄酮在所用条件下未检出。
2.1.3 Antioxidant Activity of the Extract and Tablets：提取物TEAC 1.88 ± 0.07 mM、TAC 250.43 ± 12.08 mg AsAE/g_extr、FRAP 427.91 ± 9.74 mg TE/g_extr、DPPH IC₅₀ 0.03 ± 0.00 mg/mL；片剂TEAC 0.16 ± 0.00 mM、TAC 69.57 ± 6.85 mg AsAE/g_tablet、FRAP 55.83 ± 1.92 mg TE/g_tablet、DPPH IC₅₀>1.0 mg/mL；结论为片剂抗氧化活性低于提取物。
2.1.4 α-Amylase Inhibitory Activity of the Extract and Tablets：提取物α-淀粉酶抑制活性为5.63 ± 0.51 mg AcrE/g_extr，片剂为4.539 ± 0.183 mg AcrE/g_tablet；结论为片剂保留可测酶抑制活性。
2.1.5 Antimicrobial Activity of S. dumetorum Extract：提取物对受试微生物MIC 1.25–10 mg/mL、MBC/MFC 1.25–10 mg/mL；S. aureus两株、S. epidermidis、M. luteus和C. glabrata最敏感（MIC 1.25 mg/mL）；结论为具广谱抗菌活性。
2.2.1 Standardization of the S. dumetorum Extract：建立提取物标准化参数，包括感官、溶解度、酚类鉴别、干燥失重、重金属、微生物纯度和迷迭香酸定量及接受标准。
2.2.2 Quality Evaluation of the Tablet Formulation：片剂外观、质量均匀性、崩解、溶出、硬度和脆碎度符合要求；HPLC-UV确认迷迭香酸占片重0.41%。
2.3.1 Anti-Inflammatory Activity：小鼠角叉菜胶足肿胀模型中，100、250、500 mg/kg片剂在3、12、24 h显著降低足体积，呈剂量依赖；>250 mg/kg于3 h最明显，与双氯芬酸钠相当且优于Rotokan；结论为片剂保留体内抗炎活性。
2.3.2 Repeated-Dose Toxicity Test：小鼠100、250、1000 mg/kg连续3周给药，一般状态、活动、体重、摄食饮水、开放场行为、血液学、血生化、器官重量及大体形态无治疗相关显著变化，恢复期无持续改变；结论为耐受良好。
2.3.3 Reproductive and Embryofetal Toxicity：大鼠250 mg/kg未见性行为、动情周期、生育力、卵巢质量、黄体、着床、胎儿数、吸收及着床前后丢失的显著差异；妊娠指数数值较高但无统计学意义；胚胎胎仔发育、冠臀长、胎重、骨骼骨化和畸形无显著异常；结论为无生殖与胚胎胎仔毒性证据。
2.3.4 Allergenicity Assessment：豚鼠单次皮肤250 mg/kg无局部刺激，评分0/10；反复表皮10次或20次无阳性反应；完全弗氏佐剂皮下挑战亦无阳性；结论为无局部刺激或致敏证据。
2.3.5 Immunotoxicity：小鼠3周100、250、1000 mg/kg给药后TNF-α（肿瘤坏死因子-α）、IL-6（白细胞介素-6）、CRP（C反应蛋白）、铁蛋白、总抗体滴度和IgG（免疫球蛋白G）无显著差异，停药3周后仍无显著差异；结论为无体液免疫毒性证据。

讨论部分总结：讨论认为提取物TPC高于既往S. dumetorum叶优化微波提取的35.23 ± 0.50 mg GAE/g DW，可能受采收期和环境条件影响；其TPC处于其他Salvia报道范围内，TFC因参考标准不同需谨慎比较。39个暂定化合物以酚类为主，并包含此前该种未记录的danshensu、sagerinic acid、lithospermic acids A/B、salvianolic acid K、yunnaneic acids D–F、hydroxycarnosic acid、rosmanol、sugiol等，扩展了成分谱；抗氧化活性与整体酚类基质相关，α-淀粉酶抑制为该种新增活性，抗菌谱较广。片剂每片含50 mg干提取物、片重750 mg（约6.7%），其TPC和抗氧化降低部分归因于提取物稀释及基质/分析影响；TFC未检出不能直接解释为黄酮完全降解；α-淀粉酶抑制降低较小，显示部分保留。最终片剂体内抗炎呈剂量依赖，>250 mg/kg与双氯芬酸钠相当且优于Rotokan；3周重复给药无临床相关不良，免疫、雌性生殖、胚胎胎仔、局部刺激/致敏均为阴性；结合既往急性毒性数据支持继续开发。

研究结论翻译：本研究对S. dumetorum及其氢乙醇提取物片剂进行了综合植物化学、生物学与临床前评价。提取物具有多样植物化学成分，包括酚类、黄酮、二萜和有机酸，并具显著抗氧化、α-淀粉酶抑制和广谱抗菌活性。制成片剂后保留可测抗氧化和α-淀粉酶抑制活性，但其定量特征与原始提取物不同，提示最终制剂基质影响可测生物学性质。综合体内评价显示重复给药后无治疗相关不良效应，无临床相关免疫毒性、雌性生殖功能损害、胚胎胎仔发育毒性、骨骼骨化异常或致敏证据。研究结果扩展了既往急性经口耐受数据，并为S. dumetorum片剂良好临床前安全性提供证据。总体支持继续药物开发，并为药理疗效、制剂性能和长期安全性研究提供基础。