《Microorganisms》：Effects of Dark Septate Endophyte on the Growth, Physiology, Active Ingredients and Root Exudates of Dioscorea opposita
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口腔可能成为危重患者体内革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）的储库。本研究比较了短期口腔卫生方案，并探讨了与后续革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）口腔定植相关的因素。在这项前瞻性、单中心、非随机比较干预研究中，共纳
口腔可能成为危重患者体内革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）的储库。本研究比较了短期口腔卫生方案，并探讨了与后续革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）口腔定植相关的因素。在这项前瞻性、单中心、非随机比较干预研究中，共纳入90例重症监护病房（ICU）患者，其中86例根据预设的循环分配序列接受了单纯机械口腔清洁、机械清洁联合0.2%氯己定（chlorhexidine）或机械清洁联合海克替啶（hexetidine）治疗。在ICU入院时和第3天采集唾液样本。多变量逻辑回归分析为探索性分析。调整后，口腔卫生方案与第3天革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）生长无显著相关性（总体p = 0.479）。基线革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）定植（调整后比值比[aOR] = 2256.88，95%置信区间[CI]: 21.80–233,657.01）和可见牙菌斑（调整后比值比[aOR] = 41.18，95%置信区间[CI]: 2.42–701.66）与第3天细菌生长相关，但估计值不精确，且可能受稀疏数据偏倚和过拟合影响。未检测到口腔卫生方案与短期革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）定植之间存在统计学显著关联。不能推断等效性。基线定植和可见牙菌斑的关联性需在更大规模研究中验证。
论文解读
研究背景与研究目的
危重患者在重症监护病房（ICU）住院期间，口腔微生态平衡易被意识障碍、唾液分泌减少、全身炎症、抗生素暴露、气管插管及依赖护理人员口腔护理等因素迅速破坏，导致口腔菌群失调，促进包括铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii）和肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）等具有高毒力潜力的革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）定植。这种定植通常在入住ICU后48小时内发生。口腔生物膜被视为呼吸道病原体的潜在储库，其微吸入被认为是医院获得性肺炎和呼吸机相关性肺炎（VAP）的关键机制之一。因此，口腔卫生是ICU感染预防策略的常规组成部分。尽管氯己定作为辅助抗菌剂被广泛使用，但其对死亡率、机械通气时长及ICU住院时间的影响证据不一致，且存在黏膜毒性及革兰阴性菌敏感性降低的担忧。海克替啶虽具抗菌和抗生物膜特性，但在ICU口腔护理中的临床证据有限。鉴于ICU口腔护理方案差异较大，尚缺乏公认的最佳方案来预防危重患者的口腔致病菌定植。本研究旨在比较三种口腔卫生方案——单纯机械清洁、机械清洁联合海克替啶及机械清洁联合0.2%氯己定——对ICU患者口腔革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）微生态的短期影响，并确定可能促成ICU患者口腔革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）定植的因素。
研究方法
本研究为前瞻性、单中心、非随机比较干预研究，在克罗地亚萨格勒布大学医院中心“Sestre milosrdnice”重症医学科进行。研究人员采用非随机循环分配程序将患者分为三组：单纯机械清洁组、机械清洁联合0.2%氯己定（chlorhexidine）组及机械清洁联合1 mg/mL海克替啶（hexetidine）组。微生物学评估采用盲法。研究人员在ICU入院24小时内及第3个ICU日收集非刺激性唾液样本，接种于MacConkey琼脂和Sabouraud琼脂进行需氧培养，定量计数菌落形成单位（CFU/mL），并通过生化谱鉴定革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）。主要结局指标为第3次唾液样本中革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）定植的存在情况。统计分析采用卡方检验、Fisher精确检验、Mann-Whitney U检验、Stuart-Maxwell边际齐性检验及多变量逻辑回归模型。
研究结果
3.1 研究人群与基线特征
共纳入90例参与者，每组30例，4例因死亡退出，最终86例完成配对分析。其中43例在ICU入院时接受抗生素治疗，43例未接受。两组在疾病严重程度、年龄、性别分布方面无显著差异。可见牙菌斑在抗生素治疗组中更常见（60.5% vs. 41.8%，p = 0.048）。
3.2 ICU入院时基线口腔微生态
ICU入院时，34.9%（30/86）的患者首次唾液样本中分离出革兰阴性菌（Gram-negative bacteria），男性中更常见（p = 0.018）。多变量多项式逻辑回归模型显示，牙齿状态、可见牙菌斑及既往抗生素治疗是基线微生物学状态的最相关预测因子。
3.3 口腔护理后口腔微生态的整体变化
从ICU入院至第3天，记录到的微生物学类别未观察到统计学显著的整体变化（Stuart-Maxwell χ2 = 0.385，df = 2，p = 0.825）。
3.4 口腔卫生方案对革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）口腔定植的影响
各口腔卫生方案在减少革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）口腔定植方面均未表现出统计学显著优势。单纯机械清洁组从41.4%降至37.9%，氯己定组从26.7%升至30.0%，海克替啶组从37.0%降至33.3%。多变量模型中，口腔卫生方案与第3次唾液样本中革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）生长无独立关联（总体p = 0.479）。
3.5 新检出与持续性革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）定植
新检出革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）定植见于3.5%（3/86）的患者。首次唾液样本中革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）的存在与第2次样本中革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）生长强相关（p < 0.001），可见牙菌斑也与之相关（p = 0.023）。多变量逻辑回归模型中，首次样本中革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）的存在显示出最大的调整后关联（aOR = 2256.88，95% CI: 21.80–233,657.01；p = 0.001），可见牙菌斑亦有关联（aOR = 41.18，95% CI: 2.42–701.66；p = 0.010）。男性及较高的简化急性生理评分（SAPS）II也与较高风险相关，而ICU入院时抗生素治疗与较低风险相关。
3.6 革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）分离株的抗菌药物敏感性
共分析了59株革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）分离株，涵盖11个分类单元。鲍曼不动杆菌复合体（Acinetobacter baumannii complex）对亚胺培南和美罗培南耐药，而洛菲不动杆菌（Acinetobacter lwoffii）敏感。多数肠杆菌目（Enterobacterales）细菌对美罗培南、环丙沙星、庆大霉素、头孢曲松、厄他培南和头孢他啶敏感，但对氨苄西林普遍耐药。
讨论与结论
本研究发现，调整基线微生物学状态、可见牙菌斑、性别、年龄、疾病严重程度及抗生素治疗后，所分配的口腔卫生方案与第3天革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）生长无统计学显著关联。基线定植和可见牙菌斑在探索性调整分析中与结局相关，但估计值极大且置信区间宽泛，表明存在显著不确定性。这些发现仅产生关于基线口腔状态的假设，不能确立比较等效性、治疗效果或经过验证的临床预测能力。研究人员强调，可见牙菌斑作为床旁易于评估的指标，其与革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）生长的关联值得进一步研究。研究局限性包括单中心设计、样本量较小、非随机分配、潜在的稀疏数据偏倚及过拟合问题。结论指出，三种口腔卫生方案在短期革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）口腔定植方面未观察到统计学显著差异，现有数据未提供氯己定或海克替啶优于单纯机械清洁的证据。可见牙菌斑和基线革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）定植与口腔护理后革兰阴性菌（Gram-negative bacteria）生长显示出最强的调整后关联。这些发现支持在ICU患者中进行早期口腔评估和系统性机械生物膜控制，辅助抗菌剂的作用需在更大规模研究中确认。
