《Immuno》：Adenosine A2A Receptor Expression in Tumor Cells and Stromal Tumor-Infiltrating Lymphocytes in Invasive Breast Carcinoma of No Special Type (NST)
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背景：乳腺癌（BC）是全球癌症发病率和女性癌症相关死亡率的首要原因，是一项非常严峻的健康挑战。尽管免疫治疗在临床上取得了成功，但关于疾病初始或最终失控的担忧始终存在。腺苷2A受体（A2AR）在保护组织免受过度放纵的免疫反应中发挥重要作用。本研究旨在评估腺苷受体
背景：乳腺癌（BC）是全球癌症发病率和女性癌症相关死亡率的首要原因，是一项非常严峻的健康挑战。尽管免疫治疗在临床上取得了成功，但关于疾病初始或最终失控的担忧始终存在。腺苷2A受体（A2AR）在保护组织免受过度放纵的免疫反应中发挥重要作用。本研究旨在评估腺苷受体A2A在浸润性乳腺癌中的免疫组化表达及其与临床病理参数的相关性。材料与方法：这是一项回顾性横断面组织生物标志物研究，纳入50例非特殊类型浸润性乳腺癌（NST）病例，以福尔马林固定石蜡包埋组织块存档，并进行A2AR免疫组化染色。其中26例为新辅助化疗后获取的标本。根据A2AR表达情况，以100为截断值将病例分为低表达（<100）和高表达（≥100）。结果：在所研究病例中，30%的肿瘤细胞（TCs）检测到高A2AR表达。肿瘤细胞中高A2AR表达与肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）中高A2AR表达以及高Ki-67增殖指数显著相关。结论：总之，这项探索性研究表明，A2AR在TCs和TILs中均有表达，且TCs与TILs中A2AR表达呈正相关。肿瘤细胞中高A2AR表达还与高Ki-67增殖活性相关。这些关联在校正新辅助化疗因素后仍然存在，但并不能确立因果关系。研究结果支持在更大规模的独立研究中进一步探讨A2AR作为潜在免疫治疗靶点的价值。
论文解读：腺苷A2A受体在非特殊类型浸润性乳腺癌中的表达及其临床病理意义
一、研究背景与问题提出
乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤，也是女性癌症死亡的首要原因。尽管近年来在早期筛查、靶向治疗和手术技术方面取得了显著进展，乳腺癌仍然影响全球数百万患者，其复发和转移风险依然是临床面临的重大挑战。免疫治疗作为新兴的治疗策略，通过激活机体抗肿瘤免疫反应来改善治疗效果，但在实际应用中，部分患者存在初始治疗失败或最终耐药的问题，这促使研究者不断探索新的免疫治疗靶点和联合治疗策略。
肿瘤细胞通过多种免疫抑制机制逃避免疫监视，其中细胞外腺苷的积累是肿瘤免疫逃逸的重要途径之一。腺苷是肿瘤微环境（TME）中重要的免疫反应调节介质，被视为TME中最关键的免疫检查点之一。在TME中，CD39和CD73的序贯作用将细胞外ATP转化为腺苷，腺苷通过激活表达于肿瘤细胞、内皮细胞或免疫细胞表面的腺苷受体，以旁分泌和自分泌方式促进肿瘤生长。腺苷受体包括A1、A2A、A2B和A3四种G蛋白偶联细胞表面受体（GPCRs），其中A2AR已被确定为抑制适应性免疫的关键介质。
值得注意的是，A2AR在不同细胞区室的生物学意义可能不同。在肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）中，A2AR激活通常通过抑制T细胞增殖、细胞毒活性和细胞因子产生来削弱抗肿瘤免疫；而在肿瘤细胞（TCs）中，A2AR表达可能反映与增殖和生存相关的肿瘤内在信号通路，但这些效应尚未被充分证实。因此，肿瘤细胞上的A2AR表达不应等同于淋巴细胞上的表达，也不能直接解释为免疫抑制的证据。然而，许多研究仅检测肿瘤细胞标志物或间质TILs中的单一指标，无法确定免疫高肿瘤是否真正含有浸润肿瘤巢的淋巴细胞。由于间质和上皮区室可能表现出不连续的免疫状态，这种区分至关重要。目前，A2AR在浸润性乳腺癌中的临床和免疫学效应仍不明确，这正是本研究开展的背景和动机。
二、研究设计与技术方法
本研究为回顾性横断面组织生物标志物研究，纳入2024年在埃及开罗艾因沙姆斯大学医院病理科存档的50例非特殊类型浸润性乳腺癌（NST）手术切除标本。研究人员从90例候选病例中排除了男性乳腺癌（n=3）、新辅助化疗后完全病理缓解无残留肿瘤细胞（n=15）以及非NST组织学类型（n=22）的病例。其中26例为新辅助化疗（NAC）后获取的标本，24例未经新辅助化疗。研究人员通过电子数据库获取临床病理数据，依据WHO乳腺肿瘤分类第5版（2019）复核诊断，采用免疫组化替代指标定义分子亚型，并按照国际TILs工作组标准评估间质TILs百分比。A2AR免疫组化染色采用小鼠单克隆抗A2AR抗体（克隆7F6-G5-A2），在BenchMark XT自动染色仪上完成。免疫组化结果采用半定量H-score评分系统评估，以100为截断值将A2AR表达分为低表达（<100）和高表达（≥100）。统计学分析采用SPSS 27软件，使用Fisher-Freeman-Halton精确检验、卡方检验、Student's t检验和二元逻辑回归分析，以p<0.05为统计学显著性标准。
三、研究结果
3.1 临床病理参数
50例患者平均年龄50.76±12.8岁（范围26-76岁）。右侧乳腺28例（56%），左侧22例（44%）。组织学分级以2级最常见（43例，86%），其次为3级（5例，10%）和1级（2例，4%）。TNM分期方面，T1期11例（22%）、T2期27例（54%）、T3期7例（14%）、T4期5例（10%）；淋巴结阴性（N0）17例（34%），淋巴结阳性33例（66%）；无远处转移（M0）48例（96%），有远处转移（M1）2例（4%）。总体分期：I期3例（6%）、II期22例（44%）、III期23例（46%）、IV期2例（4%）。原位成分见于30例（60%），淋巴血管侵犯28例（56%）。分子亚型分布：Luminal A样25例（50%）、Luminal B样16例（32%）、HER2富集型4例（8%）、三阴性乳腺癌（TNBC）5例（10%）。接受NAC者26例（52%）。间质TILs低浸润（≤60%）35例（70%），高浸润（>60%）15例（30%），平均间质TILs百分比为36.8%（范围5-90%）。
3.2 A2AR免疫组化表达
肿瘤细胞中低A2AR表达（H-score<100）见于35例（70%；95% CI: 56.4-81.3%），高表达（H-score≥100）见于15例（30%；95% CI: 18.7-43.6%）。TILs中低A2AR表达见于31例（62%；95% CI: 48.2-74.5%），高表达见于19例（38%；95% CI: 25.5-51.8%）。
3.3 A2AR表达与临床病理参数的相关性
研究发现，肿瘤细胞中高A2AR表达与高Ki-67增殖指数显著相关（p=0.011），OR值为5.27（95% CI: 1.38-20.14）；肿瘤细胞中高A2AR表达与TILs中高A2AR表达显著相关（p=0.006），OR值为5.78（95% CI: 1.55-21.50）。然而，A2AR表达与年龄、肿瘤侧别、组织学分级、肿瘤大小（T）、淋巴结状态（N）、远处转移（M）、肿瘤分期、淋巴血管侵犯、原位成分、间质TILs水平、NAC史及分子亚型之间均未发现统计学显著关联。
3.4 NAC状态与临床病理参数及A2AR表达的相关性
在接受NAC的患者中，观察到与低Ki-67的显著关联（p=0.025），OR值为0.27（95% CI: 0.08-0.86）。NAC状态与年龄、肿瘤侧别、分级、T分期、N分期、M分期、肿瘤分期、淋巴血管侵犯、原位成分、分子亚型、间质TILs水平以及A2AR在TCs和TILs中的表达均无显著关联。
3.5 TILs中A2AR表达与临床病理参数的相关性
TILs中A2AR表达在不同分子亚型间存在差异（p=0.039），但由于HER2阳性（n=4）和TNBC（n=5）组样本量过小，该发现仅为探索性结果，需谨慎解读。TILs中A2AR表达与Ki-67（p=0.057）及其他临床病理参数均无显著关联。
3.6 高Ki-67表达的回归分析
二元逻辑回归分析显示，肿瘤细胞中高A2AR表达与高Ki-67的高几率相关（粗OR 5.27，95% CI: 1.38-20.14，p=0.015），而NAC与低Ki-67几率相关（粗OR 0.27，95% CI: 0.08-0.86，p=0.027）。相互调整后，肿瘤细胞中A2AR表达仍与高Ki-67显著相关（调整后OR 4.91，95% CI: 1.21-19.82，p=0.026），表明该关联不受NAC状态影响；而NAC的调整后效应不显著（调整后OR 0.29，95% CI: 0.08-1.00，p=0.050）。
四、讨论与结论
本研究发现肿瘤细胞中高A2AR表达率为30%，低于既往文献报道，研究人员认为这可能与样本量、组织处理差异、抗体克隆差异以及H-score评分方法的主观性有关。研究首次在NST浸润性乳腺癌中同时评估了TCs和间质TILs中A2AR的表达，发现两者之间存在显著正相关，这与基于转录组数据计算的高A2AR表达与高间质和免疫评分正相关的报道一致。此外，肿瘤细胞中高A2AR表达与高Ki-67增殖指数的显著关联与既往研究结果相符，提示A2AR表达可能与肿瘤增殖活性相关，但尚需功能学研究阐明其机制。研究还发现NAC与低Ki-67显著相关，这与既往文献一致，但本研究无法确立因果关系。
研究局限性包括：回顾性单中心设计、样本量小（n=50）、HER2阳性和TNBC亚组过小无法进行可靠的亚型分层分析、混合了未经治疗和新辅助化疗后标本（生物学上不等价）、未进行多重检验校正。尽管调整了NAC状态，残余混杂仍不能排除。
结论：这项探索性研究揭示了肿瘤细胞中高A2AR表达与TILs中高A2AR表达之间的正相关关系，以及肿瘤细胞中高A2AR表达与高Ki-67增殖指数之间的显著关联。这些发现支持A2AR作为乳腺癌免疫治疗潜在靶点的进一步研究价值，建议开展更大规模的独立研究以阐明A2AR在乳腺癌免疫治疗中的作用。
