siRNA介导的RNF213耗竭加剧炎症缺氧诱导的内皮功能障碍并改变内皮-平滑肌通讯：一种与烟雾病相关的体外模型

《Cell Biochemistry and Biophysics》：siRNA-Mediated RNF213 Depletion Aggravates Inflammatory Hypoxia-Induced Endothelial Dysfunction and Alters Endothelial–Smooth-Muscle Communication in an In Vitro Model Relevant to Moyamoya Disease

　　

摘要

烟雾病是一种进行性脑血管疾病，与环指蛋白 213 (RNF213) 变异、内皮功能障碍及病理性动脉重塑有关。然而，RNF213 丰度降低、炎症性缺氧与内皮 - 平滑肌通讯之间的关系仍不完全清楚。本研究调查了小干扰 RNA (siRNA) 介导的 RNF213 耗竭对暴露于缺氧、肿瘤坏死因子 α (TNF-α) 和干扰素 γ (IFN-γ) 联合作用的原代人脑微血管内皮细胞的影响。评估了内皮细胞活力、增殖、凋亡、迁移、血管生成网络形成及屏障完整性。随后使用条件培养基和间接共培养系统检查原代人脑血管平滑肌细胞的反应。联合 RNF213 耗竭和炎症性缺氧降低了内皮细胞活力和增殖，增加了凋亡，损害了迁移和网络形成，并破坏了屏障完整性。屏障受损表现为跨内皮电阻降低、右旋糖酐通透性增加以及血管内皮钙粘蛋白 (VE-cadherin)、闭锁小带蛋白 -1 (ZO-1)、Claudin-5 和密封蛋白的破坏。RNF213 耗竭还增强了内皮炎症激活。来自 RNF213 耗竭的炎症性缺氧内皮细胞的条件培养基与平滑肌细胞增殖、迁移和集落形成增加相关。这些反应伴随着收缩标记表达降低以及分泌性磷酸蛋白 1 (SPP1)、Krüppel 样因子 4 (KLF4)、纤连蛋白 1 (FN1) 和基质金属蛋白酶 9 (MMP9) 增加，这与向合成型、基质重塑表型转变一致。未确定负责的内皮来源介质或介质组合。使用间接共培养和靶向不同 RNF213 序列的独立 siRNA 重现了部分发现。这些发现支持 siRNA 介导的 RNF213 耗竭、内皮应激易感性以及内皮 - 平滑肌通讯改变之间的关联，该关联存在于与烟雾病相关的体外模型中。需要 RNF213 再表达或正交遗传学验证才能建立 RNF213 特异性因果关系。

临床试验编号：无。