基于ITS2位点TaqMan SNP基因分型方法快速鉴别梅氏按蚊与达西亚按蚊

《Parasites & Vectors》：Development and validation of a TaqMan SNP genotyping assay for the molecular identification of the malaria mosquitoes Anopheles messeae and Anopheles daciae

　　

摘要

背景

Anopheles maculipennis（斑蚊）复合体包含广泛分布于古北界的近缘蚊种，具有重要的流行病学意义。Anopheles messeae（梅氏按蚊）和Anopheles daciae（达西亚按蚊）是该复合体中分布最广的成员之一，但二者在形态学上无法区分，这阻碍了针对特定物种的媒介监测以及生态学和流行病学研究。这一局限性凸显了开发快速、灵敏、特异且高通量的分子鉴定方法的迫切需求。

方法

我们报告了一种TaqMan SNP基因分型检测方法的开发与验证，该方法针对内部转录间隔区2（ITS2）位点，用于区分Anopheles maculipennis复合体中两种近缘成员——An. messeae和An. daciae。该检测方法靶向核糖体DNA的ITS2区域内的一个诊断性单核苷酸多态性（SNP）位点。

结果

优化后的TaqMan SNP基因分型检测方法应用于293只野外采集的蚊子。该方法表现出较高的分析灵敏度，检测限为0.1 ng基因组DNA，且特异性较高，在测试的非目标物种中未出现假阳性结果。TaqMan检测与PCR-RFLP方法的整体一致率为98%（Cohen's κ = 0.96），并能可靠地鉴定An. messeae、An. daciae及种间杂合体。该检测方法兼容快速DNA提取方案，为进化研究和流行病学研究中的物种鉴定提供了一种快速且高通量的途径。

结论

本研究成功开发并验证了TaqMan SNP基因分型检测方法，能够有效区分An. messeae和An. daciae。该方法为物种鉴定提供了一种快速且具有可扩展性的途径，可能有助于对An. messeae和An. daciae种群进行大规模监测。

图形摘要

背景

Anopheles maculipennis（斑蚊）复合体包含广泛分布于古北界的近缘蚊种，具有重要的流行病学意义。Anopheles messeae（梅氏按蚊）和Anopheles daciae（达西亚按蚊）是该复合体中分布最广的成员之一，但二者在形态学上无法区分，这阻碍了针对特定物种的媒介监测以及生态学和流行病学研究。这一局限性凸显了开发快速、灵敏、特异且高通量的分子鉴定方法的迫切需求。

方法

我们报告了一种TaqMan SNP基因分型检测方法的开发与验证，该方法针对内部转录间隔区2（ITS2）位点，用于区分Anopheles maculipennis复合体中两种近缘成员——An. messeae和An. daciae。该检测方法靶向核糖体DNA的ITS2区域内的一个诊断性单核苷酸多态性（SNP）位点。

结果

优化后的TaqMan SNP基因分型检测方法应用于293只野外采集的蚊子。该方法表现出较高的分析灵敏度，检测限为0.1 ng基因组DNA，且特异性较高，在测试的非目标物种中未出现假阳性结果。TaqMan检测与PCR-RFLP方法的整体一致率为98%（Cohen's κ = 0.96），并能可靠地鉴定An.messeae、An. daciae及种间杂合体。该检测方法兼容快速DNA提取方案，为进化研究和流行病学研究中的物种鉴定提供了一种快速且高通量的途径。

结论

本研究成功开发并验证了TaqMan SNP基因分型检测方法，能够有效区分An. messeae和An. daciae。该方法为物种鉴定提供了一种快速且具有可扩展性的途径，可能有助于对An. messeae和An. daciae种群进行大规模监测。

图形摘要