延胡索丙素通过延胡索酸介导的PHD 2/3-HIF1α信号通路抑制食管癌转移

《Chinese Journal of Integrative Medicine》：Siwuyin Inhibits Esophageal Cancer Metastasis by Modulating PHD 2/3–HIF1α Signal Pathway Mediated by Fumaric Acid

　　**摘要****目的**探讨四物饮（SWY）抑制食管癌转移的具体机制，重点验证其作用是否通过延胡索酸-脯氨酰羟化酶结构域（PHD）–低氧诱导因子-1α（HIF1α）信号轴介导。**方法**采用网络毒理学预测潜在靶点，探索延胡索酸促进食管癌转移的途径。体外实验方面，用单甲基延胡索酸（MMF，50或100 μmol/mL）或SWY（150 μg/mL）处理KYSE150和Eca109细胞24小时，采用划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力；Western blot检测脯氨酰羟化酶（PHDs）家族成员、HIF1α以及上皮-间质转化（EMT）标志物E-cadherin和vimentin的蛋白表达。体内实验方面，将C57BL/6小鼠随机分为5组，于第1–16周通过饮用水给予4NQO诱导食管癌发生。MMF处理组于第17–18周每日经胃给予MMF，剂量为30 mg/kg；SWY处理组于第17–24周每日经饮用水给予20% SWY溶液，剂量为400 mg/kg；其余各组给予普通饮用水。采用Western blot、免疫荧光和免疫组化检测小鼠食管组织中PHDs和HIF1α的表达，并用HE染色验证肿瘤转移情况。**结果**网络毒理学分析提示，延胡索酸通过作用于HIF1α信号通路促进食管癌发展。延胡索酸积累促进食管癌细胞迁移和侵袭，其机制涉及延胡索酸积累下调PHD2和PHD3表达（*P*<0.01），导致HIF1α稳定并表达增加（*P*<0.01），进而促进E-cadherin蛋白表达下降和vimentin蛋白表达升高，从而促进食管癌细胞转移（*P*<0.05或*P*<0.01）。SWY可有效抑制延胡索酸积累对食管癌细胞迁移和侵袭的促进作用，并作用于PHD2/3-HIF1α信号通路（*P*<0.05或*P*<0.01）。**结论**延胡索酸积累促进食管鳞状细胞癌（ESCC）转移，SWY可通过调控延胡索酸积累介导的PHD2/3-HIF1α信号通路抑制ESCC细胞转移。