年龄与族裔对血清全反钴胺素（holoTC，“活性”维生素B12）及甲基丙二酸（MMA）浓度的影响：维生素B12状态评估标志物的多族裔医院队列研究

《European Journal of Clinical Nutrition》：Age and ethnicity influence serum holotranscobalamin (‘Active’ B12) and methylmalonic acid concentrations, two markers of vitamin B12 status assessment

　　

背景：血清维生素B₁₂（B₁₂）和全反钴胺素（holoTC）是维生素B₁₂状态的生物标志物，常与甲基丙二酸（MMA）等确证试验联合使用。血清B₁₂浓度随年龄和族裔变化，但这些因素对holoTC的影响尚不清楚。方法：研究人员在伦敦一个族裔多样的医院人群中检测了61,193份样本的holoTC（2022年1月至2023年10月）。holoTC <25、25–70和>70 pmol/L分别归类为缺乏、不确定和充足。对holoTC 25–70 pmol/L的12,233例患者检测了MMA。结果：holoTC浓度按族裔差异显著。儿童中族裔差异很小，但成年后变得明显，Black患者holoTC浓度最高，Asian居中，White最低（p<0.001）。总体而言，1.7%患者holoTC缺乏，25.3%不确定。在holoTC 25–70 pmol/L患者中，使用年龄特异性MMA切点（≤65岁>280 nmol/L；>65岁>360 nmol/L）时，MMA升高见于32.7% White、14.8% Black和34.1% Asian患者（p<0.001）。使用更高MMA切点（>750 nmol/L），患病率分别降至4.0%、1.2%和4.7%。整个队列维生素B₁₂缺乏总患病率根据MMA阈值分别为7.8%或2.4%。与White患者相比，Black患者MMA升高的可能性低34.6%。结论：holoTC和MMA浓度随年龄和族裔显著变化。Black成年人表现出较高holoTC和较低MMA浓度，提示B₁₂状态更好或代谢差异。应考虑holoTC和MMA的年龄和族裔特异性参考范围。

研究背景与问题：维生素B₁₂状态评估常用血清总维生素B₁₂（B₁₂）和全反钴胺素（holoTC，即转钴胺素结合的活性B₁₂部分），并可联合功能标志物如甲基丙二酸（MMA，维生素B₁₂功能状态标志物）和/或同型半胱氨酸（homocysteine）作确证。B₁₂检测测定与转钴胺素（transcobalamin）和haptocorrin（一种B₁₂结合蛋白）结合的B₁₂总量；holoTC为转钴胺素结合部分。holoTC自动化检测可用，研究支持其作为一线诊断并可能为B₁₂耗竭最早标志，在婴幼儿、儿童和孕妇中较B₁₂更及时准确。年龄和族裔可独立于摄入和吸收影响血清B₁₂，原因未完全阐明，可能涉及结合蛋白丰度、肝脏储存及遗传因素；高奶摄入可能影响幼儿B₁₂。holoTC是否受年龄和族裔影响证据不足。B₁₂依赖甲硫氨酸合酶和(R)-甲基丙二酰辅酶A变位酶；腺苷钴胺素为甲基丙二酰辅酶A变位酶催化甲基丙二酰辅酶A向琥珀酰辅酶A转化所需，B₁₂不足时甲基丙二酰辅酶A水解为MMA，使循环MMA升高。MMA检测分析困难、较昂贵，老年和肾功能受损者解释复杂，族裔影响资料缺乏，但仍被视为敏感缺乏标志并越来越多用于确证。该研究旨在评估年龄和族裔是否影响holoTC浓度及其以MMA为状态指标时对B₁₂状态的影响，并展示所用诊断算法在临床实践中的表现及配对holoTC和MMA检测可能出现的差异。

研究开展与结论意义：研究人员回顾性分析2022年1月至2023年10月伦敦东南族裔多样医院人群常规样本，共61,193份holoTC结果；对holoTC 25–70 pmol/L者反射检测MMA，共12,233例；收集年龄、自报族裔和临床专科。holoTC<25、25–70和>70 pmol/L分别定义为缺乏、不确定和充足；MMA采用年龄切点（≤65岁>280 nmol/L，>65岁>360 nmol/L）及>750 nmol/L。结果显示holoTC和MMA随年龄和族裔显著变化，Black成人holoTC最高、MMA最低，提示B₁₂状态较好或代谢差异；研究支持考虑holoTC和MMA年龄及族裔特异性参考范围/切点，并提示统一参考区间用于临床决策可能不理想。

关键技术与方法：研究为回顾性实验室数据队列，样本来源于英国伦敦东南Guy’s and St. Thomas’ NHS Trust医院人群2022年1月至2023年10月的匿名常规血清holoTC样本（61,193份）；对holoTC 25–70 pmol/L者反射检测MMA（12,233例），并在可于检测前一周内获得估算肾小球滤过率（eGFR）≥60 mL/min/1.73 m²者中分析。收集年龄、自报族裔和申请专科。holoTC采用ARCHITECT?免疫分析（Abbott Diagnostics）测定，MMA采用液相色谱-串联质谱（LC–MS/MS）测定。统计分析包括按年龄、族裔和holoTC分类的描述性统计，Mann–Whitney、Kruskal–Wallis和卡方检验，以及二元logistic回归评估holoTC 25–70 pmol/L范围内MMA升高的可能性。

研究结果：
1. 整个患者人群特征：分析61,193份匿名holoTC结果（54.2%女性）。White、Black、Asian、Mixed（合并）、Asians Far East、Latin American、Middle East分别占38.9%、17.2%、5.0%、1.9%、1%、0.3%、0.2%，35.5%族裔未分类；62.3%样本来自>50岁，儿童仅4.6%。育龄女性（18–49岁）holoTC检测频率高于同龄男性，>50岁男性申请多于女性。按holoTC分类的B₁₂状态总体无性别差异，主要族裔内亦同；holoTC总体男女无差异（p=0.053），但White>40岁女性holoTC中位101 pmol/L高于男性94 pmol/L、MMA中位258低于男性280 nmol/L，holoTC差异p<0.001；Asian和Black>40岁无显著性别差异。因>128 pmol/L精确值不可得，未进一步性别分层。

2. 按地点分布holoTC结果：结果来自364个临床地点，归为44专科/地点。肾科比例最高（N=10,418，17%），其次成人评估8.3%、胃肠7.5%、老年5.8%、心脏5.7%；未知5.6%。Black（30.7%）和Asian（23.7%）患者来自肾科比例高于White（16.8%）。广泛地点使队列反映医院全人群而非单一科室。

3. 按年龄组和holoTC浓度类别在主要族裔男女合并中的holoTC浓度分布：White、Black、Asian三组holoTC随年龄显著变化。儿童中0–1、6–9、10–13岁差异不显著（p=0.425、0.066、0.438）；2–5岁Asian高于Black（p=0.002）和White（p=0.003），14–17岁Asian较高。成年后Black>30岁最高，Asian居中，White最低（各组间p<0.001）。去除肾科、产前、代谢病和肿瘤专科样本后差异无显著影响；因>128 pmol/L比例大，均值可能偏倚，部分儿科样本量小限制统计效能。按浓度类别分析支持上述结果：充足（>70 pmol/L）比例Black 83%、Asian 78%、White 68%；>128 pmol/L比例Black最高56.8%。

4. 基于holoTC浓度的维生素B₁₂状态（缺乏、不确定、充足）患病率：总体holoTC<25、25–70、>70 pmol/L分别1.7%、25.3%、73.0%。<25患病率最高0–1岁6.2%，其次14–17岁2.5%、18–29岁2.4%、≥80岁2.0%。三大族裔中低和不确定holoTC最高为White（1.9%和29.6%）；Black仅15.9%处于25–70 pmol/L，56.8%>128 pmol/L。

5. 进行MMA检测的患者：共13,160次MMA检测：holoTC<25者45例、25–70者12,233例、>70者882例。45例holoTC<25中32例（71%）MMA升高符合缺乏，13例（29%）MMA正常，包括可能接受转钴胺素缺乏治疗的4岁儿童（holoTC<5 pmol/L；该病中holoTC持续不可测，因检测抗体依赖转钴胺素-B₁₂复合物）、1例13岁外科患者holoTC14 pmol/L、1例27岁神经科患者MMA274 nmol/L接近切点，另10例holoTC20–23 pmol/L、MMA111–300 nmol/L。holoTC>70者中882例（6.7%）检测MMA，707例（80.2%）正常；175例（19.8%）升高，其中71例（41%）holoTC>128 pmol/L，提示代谢病或肾损；16例holoTC>128 pmol/L者MMA>5000 nmol/L。总体15,475例（25.3%）holoTC25–70 pmol/L，其中12,233例（79%）检测MMA，未测的21%可能包括肾功能受损者。

6. holoTC 25–70 pmol/L样本中MMA浓度按年龄和族裔分布：该范围MMA中位（IQR）238（184–330）nmol/L；17例MMA>5000 nmol/L（含1婴儿和8例17–30岁）。所有年龄组中Black患者MMA最低，低于Asian和White；总体Asian与White无差异；按年龄分层，White在≤60岁MMA较高，Asian在60+岁高于White。

7. 不确定holoTC范围内按族裔的MMA升高发生率：采用年龄切点>280/>360 nmol/L，holoTC25–70者中MMA升高总体30%（N=3720）；结合holoTC<25，全队列提示B₁₂缺乏7.8%（N=4772）。MMA升高比例随holoTC升高从25–30 pmol/L的50%降至61–70 pmol/L的21%。采用>750 nmol/L定义明确缺乏，25–70者中3.6%（N=441）超过；结合holoTC<25，全队列2.4%（N=1493）。按族裔，>280/>360和>750切点下Black分别15%和1.2%，White 34%和4.0%，Asian 32%和4.7%；MMA中位分别为White 257、Black 185、Asian 226 nmol/L（p<0.001）。二元logistic回归显示年龄较大和holoTC较低者MMA升高可能性更高（p<0.001）；以White为参照，Asian族裔不影响B₁₂状态（p=0.823，Exp(B)=0.977），Black患者MMA升高可能性低34.6%（p<0.001）。

讨论部分总结：讨论指出，大样本医院队列holoTC随年龄和族裔显著差异，Black成人最高、Asian中间、White最低；holoTC25–70者MMA也随年龄和族裔变化，Black所有年龄组最低。与既往血清B₁₂结果一致；holoTC年龄轨迹为婴儿后上升、约6岁峰值、青春期下降、30岁后上升至60–70岁后下降，与总B₁₂平行。结合蛋白产生差异可解释；Black转钴胺素浓度较高；儿童差异不显著提示早期代谢相对同质、共同饮食及基因表达未成熟。holoTC<25最高0–1岁，其次14–29岁和≥80岁；婴儿与母体B₁₂或先天吸收代谢病有关，青少年与膳食不足和需求增加有关，老年与胃酸/内因子下降、共病和多药（二甲双胍、PPI）有关。Asian成人高于White可能与补充率较高及holoTC对近期摄入更敏感有关；holoTC较血清B₁₂更受肾功能影响，肾科来源Black/Asian比例较高。MMA由D-甲基丙二酰辅酶A水解酶形成，甲基丙二酰辅酶A变位酶需5’-脱氧腺苷钴胺素；B₁₂不足时MMA升高。其他因素包括奇数链脂肪酸、胆固醇、肠道菌群及遗传变异（HIBCH、ACSF3、SUCLG1、SUCLA2）。Black低MMA与既往研究一致；年龄相关MMA升高在White和Asian更明显，不能归因White肾功能较差，因本研究中Black肾科来源最高。50–70 pmol/L内MMA判别缺乏与充足能力有限；年龄依赖切点来自Hordaland Homocysteine Study，>750 nmol/L切点用于明确缺乏；holoTC>50 pmol/L可能提示充足，高于此MMA升高更可能反映其他因素。NICE NG239对holoTC统一采用<25、25–70、>70 pmol/L，且未对holoTC作族裔调整；结果支持holoTC和MMA年龄及族裔特异性参考范围。局限包括ARCHITECT?动态范围窄、>128赋值为129使真实族裔差异可能更大，以及回顾性去标识数据缺乏完整临床记录和少数族裔亚组样本不足。

研究结论（翻译）：在成年Asian、Black和White患者中观察到holoTC浓度显著差异。与血清B₁₂浓度一致，Black成人holoTC水平最高，近一半记录值>128 pmol/L。MMA浓度以及holoTC值25–70 pmol/L个体中MMA升高的频率也受年龄和族裔影响。值得注意的是，在该holoTC范围内，Black患者在全部年龄组中MMA浓度最低，提示B₁₂状态更好、holoTC利用更有效，或可能反映与钴胺素状态无关的因素。这些发现支持考虑holoTC和MMA的年龄及族裔特异性切点。