高滴度猫源恢复期血清对重症发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV）感染小鼠的被动免疫保护作用及早期给药时效性研究

《Veterinary Microbiology》：High-titer convalescent serum from cats recovered from severe fever with thrombocytopenia syndrome protects SFTSV-infected mice

　　

来自重症发热伴血小板减少综合征（SFTS）康复猫的高滴度恢复期血清可保护SFTSV感染小鼠。•从SFTS康复的猫可产生高滴度SFTSV中和抗体。•高滴度猫恢复期血清可保护SFTSV感染小鼠。•在感染后第2天或第3天（dpi）早期给予血清可实现完全存活。•来自多只SFTS康复猫的血清具有治疗效应。

Hirohisa Mekata等围绕猫源恢复期血清对SFTSV感染小鼠的被动免疫保护作用开展研究。重症发热伴血小板减少综合征（severe fever with thrombocytopenia syndrome，SFTS）是由重症发热伴血小板减少综合征病毒（severe fever with thrombocytopenia syndrome virus，SFTSV）引起的新发、潜在致死性蜱传人兽共患病；SFTSV为有包膜、三节段、负链RNA病毒，分类上属于Phenuiviridae科Bandavirus属Bandavirus dabieense种。人SFTS以发热、胃肠道症状、白细胞减少、血小板减少和多器官受累为特征，自2011年中国首次报告后，韩国、日本及部分东南亚国家相继发现，报告病死率约5%–27%。家猫对SFTSV高度易感，报告病死率为58%–63%；2024年日本通过动物SFTS诊断网络报告194例猫SFTS，超过同年人SFTS报告病例数，并已记录兽医人员和照护感染猫人员由猫直接感染SFTSV的事件。然而，猫SFTS目前尚无有效治疗或疫苗。恢复期血液制品的被动免疫治疗已在急性病毒感染中探索，但SFTS证据有限；既往SFTSV感染小鼠模型中，人SFTS恢复期血清在感染后1天开始给药仅获得20%存活，而SFTS康复猫恢复期血清是否具有治疗保护作用尚未研究。因此，研究人员比较SFTS康复猫与SFTS恢复期患者的中和抗体滴度，并评估猫恢复期血清在SFTSV感染小鼠模型中的治疗作用。研究结论为：部分自然感染SFTS后康复的猫可产生高滴度中和抗体，高滴度恢复期猫血清在感染早期给药可保护SFTSV感染小鼠；该研究为猫SFTS恢复期血清被动免疫提供了实验性概念验证，但尚需在自然感染猫中开展临床研究以确定安全性、有效性和实际适用性。

研究人员使用的主要关键技术方法如下：样本队列包括6例来自University of Miyazaki Hospital的SFTS恢复期患者血清，以及14只来自private veterinary clinics的SFTS康复猫血清；采用80%噬斑减少中和试验（80% plaque reduction neutralization test，PRNT₈₀）检测中和抗体滴度。动物实验使用AG129小鼠（缺乏I型和II型干扰素受体的小鼠模型），皮下接种200 focus-forming units（FFU）的A17株SFTSV，并在不同感染后天数（days post-infection，dpi）腹腔注射恢复期猫血清，观察生存、体重和临床体征；采用逆转录定量PCR（reverse transcription quantitative PCR，RT-qPCR）检测全血SFTSV RNA；统计分析包括Kaplan–Meier法、log-rank检验、双因素重复测量方差分析（ANOVA）、Kruskal–Wallis检验及Dunn多重比较等。

3.1. 恢复期猫与恢复期患者的中和抗体滴度
研究人员检测6例SFTS恢复期患者和14只SFTS康复猫血清的PRNT₈₀滴度。猫的中位PRNT₈₀为937（四分位距（interquartile range，IQR）428.2–2044），患者为404（IQR 180.3–689.5）；Mann–Whitney U检验显示差异无统计学意义（P=0.06）。该结果说明部分SFTS康复猫可产生较高水平中和抗体，但该探索性比较未证明猫的中和抗体反应强于人。

3.2. 单剂恢复期猫血清对SFTSV感染小鼠的保护作用
研究人员将PRNT₈₀为1408的恢复期猫血清在2、3或4 dpi单次腹腔给药，对照小鼠在2 dpi接受健康猫血清。生存分析显示组间差异有统计学意义（P=0.0028）；对照小鼠至8 dpi全部死亡，存活率0/5；2或3 dpi给药组存活率均为5/5，4 dpi给药组存活率为2/5。2或3 dpi给药显著减轻体重下降；2 dpi给药组在5 dpi血病毒RNA水平显著降低（P<0.01），但10 dpi幸存者血中仍可检出病毒RNA。研究期间未观察到可归因于健康猫血清或恢复期猫血清给药的临床明显不良反应。该结果说明单剂恢复期猫血清在感染早期给药具有治疗获益。

3.3. 连续两日给予恢复期猫血清的治疗效应
研究人员将同一恢复期猫血清在2和3 dpi、3和4 dpi、4和5 dpi或5和6 dpi连续两日给药，对照小鼠在2和3 dpi接受PBS。生存分析显示组间差异有统计学意义（P<0.0001）；对照小鼠至9 dpi全部死亡，存活率0/6；2和3 dpi或3和4 dpi给药组存活率均为6/6；3和4 dpi组出现短暂超过10%的体重下降后恢复；4和5 dpi组存活率为2/6，5和6 dpi组为0/6。6 dpi时，2和3 dpi或3和4 dpi给药组血病毒RNA水平显著低于对照（两项比较均P<0.01）；13 dpi时上述早期治疗组幸存者血病毒RNA水平亦较低。该结果说明连续两日早期给药具有治疗活性，但未提供足够证据证明重复给药较单次给药具有更强病毒学获益或显著延长治疗窗口。

3.4. 来自个体恢复期猫的血清具有治疗效应
研究人员进一步在3 dpi单次给药，评估来自3只不同恢复期猫的血清：Cat #2（PRNT₈₀=1243）、Cat #3（PRNT₈₀=315）和Cat #4（PRNT₈₀=617），对照在3 dpi接受PBS。生存分析显示组间差异有统计学意义（P<0.0001）；对照小鼠至9 dpi全部死亡，存活率0/6；Cat #2组存活率6/6，且7和8 dpi体重下降显著少于对照；Cat #3和Cat #4组存活率均为5/6，其中Cat #3组1只达到人道终点，Cat #4组1只死亡，其余动物恢复。5 dpi时，Cat #2组（P<0.01）和Cat #4组（P<0.05）血病毒RNA水平显著低于对照。该结果说明治疗效应并非局限于单一供体猫血清；但由于仅评估3只供体且未在供体层面独立重复，供体中和抗体滴度与疗效之间的关系仍不确定。

讨论部分总结：原文指出，该研究显示部分自然感染SFTS后康复的猫可产生高PRNT₈₀滴度，其血清在感染早期给药可保护SFTSV感染小鼠，为猫SFTS被动免疫治疗提供了概念验证。猫与人恢复期血清PRNT₈₀中位数的探索性比较在数值上猫较高，但差异无统计学意义（P=0.06），且样本量小（14只猫和6例人）、采样距发病时间不同（猫31–690天，人106–253天）、年龄和临床特征未匹配，因此不能据此认为猫的中和抗体反应强于人；也未对急性期病毒载量进行匹配比较，不能确定急性感染病毒负荷是否影响后续中和抗体滴度。治疗效果受给药时机强烈影响：2或3 dpi给药保护明显，延迟至4 dpi或以后疗效下降；早期治疗还减轻疾病严重程度和病毒复制。由于腹腔给药后抗体需从腹腔吸收后才进入系统循环，原文指出更符合猫临床使用的静脉给药可能获得更快系统暴露，应进一步评估。连续两日给药未显著延长生存治疗窗口，早期重复给药组与单次给药组存活相似；不同独立实验间可能存在变异，且晚期病毒RNA检测仅能来自幸存动物，限制组间比较。来自3只个体恢复期猫的血清亦显示治疗效应，但供体数量少且未在供体层面独立重复，滴度与疗效关系不确定。主要局限是使用缺乏I型和II型干扰素受体的AG129小鼠；免疫健全小鼠SFTSV复制有限且不出现临床疾病，而AG129小鼠不能完全再现猫SFTS，且SFTSV在AG129小鼠主要靶向巨噬细胞/单核细胞谱系细胞，在猫主要靶向浆母细胞，因此小鼠存活获益应视为实验性概念验证而非猫临床疗效的直接证据；实验中对照小鼠全部死亡，而自然感染猫报告病死率约60%，临床价值最终需在自然感染猫的精心设计临床研究中评估。此外，供体血清除中和抗体外还含多种成分，原文未进行IgG（免疫球蛋白G）清除、纯化IgG转移或Fc（可结晶片段）受体依赖抗体效应功能分析，故不能确定中和抗体相对于Fc受体依赖效应功能或其他血清因素的贡献。临床转化还涉及安全性和物流问题：小鼠按体重使用的血清体积大，不能直接换算为猫临床剂量；猫的最佳剂量、途径和频率未知；猫血液制品可致严重输血反应，需血型鉴定和交叉配血；实施还需符合标准供体条件的SFTS康复猫，包括猫免疫缺陷病毒（feline immunodeficiency virus，FIV）和猫白血病病毒（feline leukemia virus，FeLV）检测阴性，并表征其中和抗体滴度。

研究结论部分翻译：总之，部分从SFTS康复的猫可产生高滴度中和抗体，高滴度恢复期猫血清在感染早期给药可保护SFTSV感染小鼠。这些发现为基于恢复期血清的猫SFTS被动免疫治疗提供了实验性概念验证，但尚需在自然感染猫中开展临床研究以确定其安全性、有效性和实际适用性。