《Journal of Inflammation Research》：Acupoint Catgut Embedding Mitigates Sneezing Behavior in Allergic Rhinitis Rats and is Associated with the Attenuation of NMB-NMBR-cVRG Signaling
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**摘要**
**目的：** 探讨迎香穴穴位埋线（ACE）是否能缓解变应性鼻炎（AR）大鼠模型中的喷嚏行为，并探索其与NMB-NMBR-cVRG神经通路衰减的关系。
**方法：** 将84只SPF级SD大鼠初步分为对照组（n = 24）和OVA致敏组（n
**摘要**
**目的：** 探讨迎香穴穴位埋线（ACE）是否能缓解变应性鼻炎（AR）大鼠模型中的喷嚏行为，并探索其与NMB-NMBR-cVRG神经通路衰减的关系。
**方法：** 将84只SPF级SD大鼠初步分为对照组（n = 24）和OVA致敏组（n = 60）。研究分两个连续阶段进行。在第一阶段（n = 24），通过比较随机抽取的模型大鼠亚组（n = 12）与对照组（n = 12），验证AR模型是否成功建立。在第二阶段，模型确认后，将剩余AR大鼠（n = 48）随机分为四个治疗亚组（每组n = 12）：AR模型组、ACE组、NMB-siRNA组和NMB-nc组。剩余的对照组大鼠（n = 12）作为空白组。主要结局指标为喷嚏频率和呼吸气流模式，通过全身体积描记法（WBP）评估。次要指标包括鼻部炎症介质（ELISA）、黏膜组织病理学（HE）、以及通过蛋白质印迹法（WB）、免疫组织化学法（IHC）和免疫荧光法（IF）检测的三叉神经-脑干轴中NMB、NMBR和c-Fos的蛋白表达。
**结果：** 1. 通过卵清蛋白致敏成功建立了AR模型。2. 与AR模型组相比，ACE组显著缓解了喷嚏症状，降低了鼻灌洗液中AR相关炎症因子的水平，并改善了鼻黏膜病理损伤。3. 与AR模型组相比，ACE组和NMB-siRNA组的NMB、NMBR和c-Fos表达水平均显著降低。
**结论：** 迎香穴ACE减弱了NMB-NMBR-cVRG通路内炎症刺激诱导的神经元激活。这些发现表明，ACE在调节AR大鼠中枢喷嚏反射敏感性和神经源性炎症中发挥关键作用。
**论文解读：迎香穴穴位埋线通过调控NMB-NMBR-cVRG通路缓解变应性鼻炎大鼠喷嚏行为的机制研究**
**一、研究背景与科学问题**
变应性鼻炎（allergic rhinitis, AR）是一种由免疫球蛋白E（IgE）介导的慢性炎症性疾病，其典型症状包括鼻痒、流涕和阵发性喷嚏。近年来，AR的全球患病率持续攀升，严重影响患者的生活质量、学习效率和工作能力，并给医疗卫生系统带来沉重经济负担。喷嚏是AR最突出的症状之一，频繁或剧烈的喷嚏不仅干扰日常活动，还可能增加呼吸道病原体传播的风险。因此，阐明AR相关喷嚏的发病机制并寻找安全有效的干预策略，具有重要的临床和公共卫生意义。
神经调控在AR相关喷嚏中起着关键作用。喷嚏反射是由复杂神经网络协调的本能性呼吸防御机制。神经生物学研究已证实，鼻部机械或化学刺激经三叉神经传递至延髓“喷嚏中枢”。在这一框架中，多种神经肽作为重要的化学信使，精细调控反射的阈值和强度。神经介素B（neuromedin B, NMB）是由感觉神经元分泌的神经肽，广泛分布于鼻黏膜、气道和中枢神经系统，参与炎症、感觉传导和反射活动的调节。其高亲和力受体——神经介素B受体（neuromedin B receptor, NMBR）属于G蛋白偶联受体家族，广泛表达于鼻感觉神经和中枢呼吸调节区域。延髓尾端腹侧呼吸群（caudal Ventral Respiratory Group, cVRG）与呼吸节律调节密切相关。现有研究表明，NMB与NMBR的相互作用可激活神经回路，从而触发和调节喷嚏反射；cVRG不仅调节呼吸节律，还与三叉神经系统和延髓喷嚏中枢协作介导喷嚏的执行过程。因此，NMB-NMBR-cVRG通路可能构成AR相关喷嚏的中枢调节机制。
目前，常规AR治疗虽能缓解症状，但存在长期疗效欠佳、不良反应多、患者依从性差等局限。穴位埋线（acupoint catgut embedding, ACE）是一种通过可吸收线提供持续刺激的技术，在缓解AR症状方面显示出临床潜力。研究人员的既往临床试验表明，ACE不仅能有效缓解AR症状，还具有独特的中枢反应机制；动物实验亦证实，迎香穴（LI20）ACE可显著改善喷嚏、流涕等典型症状，其疗效通过调节“上颌神经支-蝶腭神经节-鼻黏膜感觉支”通路实现。然而，ACE干预在AR中是否通过特定中枢神经回路（尤其是NMB-NMBR-cVRG通路）发挥作用，尚待阐明。
基于此，本研究旨在探讨ACE是否通过中枢NMB-NMBR-cVRG通路缓解AR相关喷嚏，假设ACE抑制三叉神经-脑干轴上NMB和NMBR的表达，从而减弱cVRG内炎症刺激诱导的神经元激活，以缓解喷嚏反射。
**二、研究设计与技术方法**
研究人员采用两阶段严格设计，共使用84只雄性SPF级SD大鼠。第一阶段（n=24）专门验证AR模型成功建立，比较随机抽取的模型大鼠（n=12）与对照组（n=12）。第二阶段在模型确认后，将剩余AR大鼠（n=48）随机分为四个治疗亚组（每组n=12）：AR模型组、ACE组、NMB-siRNA组和NMB-nc组，剩余对照组大鼠（n=12）作为空白组。关键设计在于，外周全身免疫学评估和局部组织病理学评估仅在对照组、AR模型组和ACE组中进行；而NMB-siRNA和NMB-nc组仅用于三叉神经-脑干轴的中枢神经机制研究。AR模型通过卵清蛋白（ovalbumin, OVA）腹腔注射致敏联合鼻内激发建立，ACE组接受双侧LI20埋线干预，NMB-siRNA组和NMB-nc组分别接受立体定向微量注射NMB-siRNA和阴性对照。
主要结局指标采用全身体积描记法（whole-body plethysmography, WBP）评估喷嚏频率和呼吸气流模式，喷嚏事件通过特征性气流波形（尖锐高振幅吸气峰后伴随爆发性呼气）结合同步高速视频双人独立交叉验证确定。次要指标包括：鼻灌洗液中炎症介质（IgE、IL-4、IFN-γ）采用酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）检测；鼻黏膜组织病理学采用苏木精-伊红（hematoxylin and eosin, HE）染色评估；三叉神经中NMB蛋白表达采用蛋白质印迹法（Western blotting, WB）检测；脑干中NMBR表达采用免疫组织化学法（immunohistochemistry, IHC）检测；cVRG区域c-Fos表达采用免疫荧光法（immunofluorescence, IF）检测。统计分析使用SPSS 27.0软件，组间比较采用单因素方差分析或非参数秩和检验。
**三、主要研究结果**
**模型验证：行为表现与评分**
对照组大鼠摄食、活动正常，无异常行为；模型组大鼠活动减少、喜静喜卧、被毛粗糙、喷嚏频繁，并出现抓耳、抓鼻、抓眼及面部摩擦等行为，鼻孔周围潮湿肿胀，鼻面可见抓挠所致的血痂。末次鼻内激发后，模型组总鼻部症状评分为（6.24 ± 0.56），对照组为（3.50 ± 0.67），差异具有统计学意义（P < 0.001），表明AR大鼠模型成功建立。
**模型验证：血清sIgE和IL-4水平**
模型组血清sIgE水平为（9.32 ± 1.65）ng/mL，对照组为（5.35 ± 0.75）ng/mL；IL-4水平分别为（10.71 ± 1.50）pg/mL和（8.32 ± 1.03）pg/mL。与对照组相比，模型组sIgE和IL-4水平均显著升高（P < 0.05），表明OVA致敏成功诱导了IgE介导的免疫反应和Th2细胞因子上调，进一步验证了AR模型构建的有效性。
**模型验证：鼻黏膜组织病理学**
对照组大鼠鼻黏膜组织结构完整清晰，上皮细胞排列整齐致密，固有层含少量纤维结缔组织、丰富腺体和血管，炎性细胞浸润少见。模型组大鼠鼻黏膜损伤明显，黏膜上皮出现变性、坏死，局部上皮脱落、缺失，上皮细胞排列稀疏伴增生，黏膜层增厚、细胞层次增多，部分细胞肥大，坏死上皮区域及固有层可见大量炎性细胞浸润，以带状分叶核中性粒细胞和深染淋巴细胞为主，呈现典型的AR样鼻黏膜组织损伤。
**ACE干预后指标变化：大鼠喷嚏症状**
WBP分析显示，对照组大鼠呼吸模式稳定，无明显波形波动；AR模型组大鼠频繁出现高振幅呼吸峰，伴鼻抓挠和喷嚏，喷嚏样事件数量显著高于对照组；ACE组高振幅峰较AR模型组减少，NMB-siRNA组显示相似程度的减少；NMB-nc组喷嚏样反应与AR模型组相似。
**ACE干预后指标变化：鼻灌洗液相关指标**
与对照组相比，AR模型组大鼠鼻灌洗液中IgE和IL-4水平显著升高，IFN-γ水平显著降低（P < 0.05）。ACE组IgE、IL-4和IFN-γ水平与对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。与AR模型组相比，ACE组显著降低了IgE和IL-4水平，同时升高了IFN-γ水平（P < 0.05），表明ACE改善了AR大鼠局部免疫失衡。
**ACE干预后指标变化：HE染色**
对照组和AR模型组鼻黏膜病理形态学改变与前述一致。ACE组与AR模型组相比，鼻黏膜炎症和结构损伤明显减轻。
**ACE干预后指标变化：三叉神经中NMB表达**
WB分析显示，AR模型组和NMB-nc组三叉神经中NMB表达水平较对照组显著升高（P < 0.01）；ACE组和NMB-siRNA组NMB蛋白表达与对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）；与AR模型组相比，ACE组和NMB-siRNA组NMB表达均显著降低（P < 0.01），表明ACE有效抑制三叉神经中NMB表达，效果与NMB-siRNA干预相当。NMB-nc组与AR模型组之间NMB表达无显著差异（P > 0.05）。
**ACE干预后指标变化：脑干中NMBR表达**
AR模型组和NMB-nc组脑干中NMBR表达水平较对照组显著升高（P < 0.01）。ACE组和NMB-siRNA组NMBR表达与对照组相比无显著差异（P > 0.05），但较AR模型组均显著降低（P < 0.01）。NMB-nc组与AR模型组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。
**ACE干预后指标变化：cVRG区域神经元兴奋性**
与对照组相比，AR模型组、NMB-nc组和NMB-siRNA组cVRG中c-Fos表达水平和荧光强度均显著增加（P < 0.01）；ACE组c-Fos表达和荧光强度较对照组轻度升高（P < 0.05）。与AR模型组相比，ACE组和NMB-siRNA组c-Fos表达和荧光强度均显著降低（P < 0.01），而NMB-nc组与AR模型组之间无显著差异（P > 0.05）。
**四、结论与讨论**
本研究首次证实，迎香穴ACE可显著缓解AR大鼠模型的喷嚏行为，这一行为改善伴随三叉神经中NMB表达降低、脑干中NMBR表达降低以及cVRG区域c-Fos激活减弱。ACE在AR大鼠中减弱了炎症刺激诱导的NMB-NMBR-cVRG通路内神经元激活，提示ACE在调节中枢喷嚏反射敏感性和神经源性炎症中发挥关键作用。研究为外周穴位刺激影响中枢反射敏感性提供了初步的神经生物学框架，但c-Fos作为神经元激活标志物反映的是细胞反应性而非功能抑制的直接证据，NMB-NMBR轴可能只是中枢神经元激活的重要而非唯一机制。研究局限性包括：缺乏同步假埋线或非穴位对照组以独立区分LI20特异性神经调节与非特异性操作效应；采用两阶段实验设计存在时序特征；仅在单一2周时间点评估疗效；缺乏直接电生理学证据（如膜片钳或在体多单位活动分析）以捕捉cVRG神经元在喷嚏反射中的实时放电动态。未来研究需整合电生理记录、精细神经通路分析以及同步假埋线对照，以全面表征NMB-NMBR-cVRG回路的实时神经动力学并进一步验证ACE介导神经调节的穴位特异性。
