《Chinese Herbal Medicines》：Jichuanjian ameliorates slow transit constipation through modulation of epithelial–mesenchymal transition associated with Wnt signaling
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**目的**：慢传输型便秘（STC）是一种显著影响患者生活质量的功能性胃肠疾病。上皮-间质转化（EMT）可能导致上皮功能障碍和黏液分泌减少，进而引起肠道动力障碍和STC。济川煎（JCJ）是一种广泛用于STC治疗的中药复方，但其作用机制尚不明确。本研究旨在探讨J
**目的**：慢传输型便秘（STC）是一种显著影响患者生活质量的功能性胃肠疾病。上皮-间质转化（EMT）可能导致上皮功能障碍和黏液分泌减少，进而引起肠道动力障碍和STC。济川煎（JCJ）是一种广泛用于STC治疗的中药复方，但其作用机制尚不明确。本研究旨在探讨JCJ缓解STC的药效及其机制。
**方法**：采用洛哌丁胺诱导的STC小鼠模型，通过检测排便时间、粪便重量及含水量、小肠推进率及组织病理学改变评估JCJ的药效。将JCJ吸收入血及分布于结肠的成分预测与RNA测序（RNA-seq）相结合，结果显示JCJ通过Wingless-related integration site（Wnt）信号通路调控上皮-间质转化（EMT）从而缓解STC。采用阿尔辛蓝-过碘酸雪夫染色（AB-PAS染色）、免疫组织化学、Masson染色、免疫荧光及实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）评估EMT标志物、结肠黏液分泌、胶原沉积、肠道损伤及Wnt通路关键基因。
**结果**：JCJ剂量依赖性增加STC小鼠粪便含水量、缩短首粒黑便排出时间并提高小肠推进率；其中高剂量JCJ（JCJ-H）疗效最佳，被选用于后续机制研究。JCJ通过Wnt信号通路调控EMT，从而恢复肠道动力和排便功能。JCJ下调EMT标志物Ⅰ型胶原α1链（COL1A1）、Ⅲ型胶原α1链（COL3A1）、纤连蛋白1（FN1）、N-钙黏蛋白（CDH2）、Snail家族转录抑制因子2（SNAI2）、锌指E-box结合同源盒1（ZEB1），上调紧密连接蛋白（Claudin-1、Occludin），促进杯状细胞黏液分泌，并增加结肠水通道蛋白3（AQP3）和水通道蛋白9（AQP9）的表达。JCJ还可纠正STC小鼠中Wnt相关基因胰高血糖素样肽1受体（Glp1r）、分泌型卷曲相关蛋白4（Sfrp4）、黏蛋白1（Muc1）、三叶因子2（Tff2）、雌激素受体2（Esr2）的异常表达。
**结论**：上述结果表明，JCJ通过Wnt信号通路调控肠道EMT，从而改善肠道动力和排便功能，缓解STC。该研究为靶向肠道EMT治疗STC提供了机制依据，并支持JCJ作为STC治疗策略的临床应用。
慢传输型便秘（STC）是一种常见的功能性胃肠疾病，以结肠传输延迟为主要特征，严重影响患者生活质量，并给医疗系统带来经济负担。现有治疗手段如泻药、促动力药、手术及生物反馈疗法等存在副作用明显、复发率高或疗效不稳定等局限，因此亟需开发安全有效的治疗策略。近年研究提示，上皮-间质转化（EMT）可能通过破坏肠上皮屏障、减少黏液分泌及促进胶原沉积等机制参与STC的发病，但其确切作用仍需验证。济川煎（JCJ）是源于《景岳全书》的传统中药复方，由当归、牛膝、肉苁蓉、泽泻、升麻、枳壳组成，具有“养血补精、润肠通便”之功效，临床用于STC疗效确切，但分子机制不清。研究人员基于“润肠通便”功效与抑制EMT以维持上皮功能具有相似性的中医理论，提出JCJ可能通过调控EMT改善STC的科学假说，并开展本研究加以验证。
研究人员采用洛哌丁胺诱导的STC小鼠模型，首先评估JCJ低、中、高三个剂量（4.19、8.38、16.76 g/(kg·d?1)）对排便时间、粪便含水量和小肠推进率的影响，并以莫沙必利作为阳性对照。确定高剂量JCJ疗效最佳后，整合超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF/MS）鉴定JCJ吸收入血及分布于结肠的成分，结合网络靶点预测和RNA测序（RNA-seq）转录组分析预测潜在机制，随后运用HE染色、AB-PAS染色、Masson染色、免疫组织化学、免疫荧光及qRT-PCR等实验方法，从EMT标志物、紧密连接蛋白、胶原沉积、黏液分泌、水通道蛋白及Wnt通路关键基因等多个层面验证JCJ的作用机制。动物实验经天津中医药大学动物伦理委员会批准，小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
**JCJ对STC小鼠肠道传输和排便功能的影响**：与模型组相比，JCJ各剂量组粪便含水量显著升高、首粒黑便排出时间显著缩短、小肠推进率显著增加，且呈剂量依赖性，其中高剂量组效果最佳，故后续机制研究选用高剂量JCJ。
**JCJ对STC小鼠肠道病理形态的影响**：HE染色显示模型组结肠黏膜层炎性细胞浸润增加、肌层变薄、黏膜表面不规整、黏膜下层增宽，小肠绒毛缩短、隐窝萎缩、黏膜层部分脱落；JCJ治疗后显著减轻炎症浸润、修复黏膜损伤、增加肌层厚度，并改善绒毛和隐窝结构。
**JCJ改善STC肠道传输和排便功能的潜在机制**：UPLC-Q-TOF/MS共鉴定出JCJ提取物中65个成分，其中28个为入血成分、27个为结肠分布成分。基于这些成分预测获得1009个药物靶点，GO注释和KEGG富集分析显示JCJ的作用机制与细胞黏附、上皮-间质转化及Wnt信号通路密切相关。RNA-seq分析显示JCJ治疗后基因表达谱向正常状态回归，筛选出115个逆转表达基因，KEGG富集进一步指向Wnt信号通路，提示JCJ可能通过调控Wnt通路抑制EMT。
**JCJ调控EMT改善STC小鼠结肠上皮功能的验证**：qRT-PCR和免疫组织化学结果显示，模型组结肠中EMT标志物COL1A1、COL3A1、FN1、CDH2、SNAI2、ZEB1的mRNA和蛋白表达显著升高，JCJ治疗后均显著下调，表明JCJ可逆转STC小鼠结肠组织的上皮-间质转化。
**JCJ改善STC小鼠上皮细胞紧密连接损伤**：免疫荧光染色显示模型组紧密连接蛋白Claudin-1和Occludin的平均荧光强度显著降低，JCJ治疗后显著恢复，说明JCJ可修复肠上皮紧密连接损伤。
**JCJ改善与EMT相伴发生的胶原沉积**：Masson染色显示模型组结肠黏膜层和黏膜下层蓝染面积显著增加，胶原沉积明显，JCJ组纤维化面积显著减少，表明JCJ可减轻与EMT相关的结肠纤维化。
**JCJ调控EMT改善STC小鼠结肠上皮黏液分泌功能**：AB-PAS染色和Muc2免疫组化显示模型组上皮细胞和杯状细胞萎缩、黏液层变薄，JCJ显著增加AB-PAS和Muc2阳性面积、促进杯状细胞黏液分泌。qRT-PCR和免疫组化还显示JCJ显著逆转STC小鼠结肠水通道蛋白AQP3和AQP9表达的下调，改善结肠水液代谢。
**JCJ调控Wnt信号通路改善STC小鼠结肠上皮功能的验证**：qRT-PCR检测显示，JCJ显著上调模型组中表达降低的Glp1r和Sfrp4，下调表达升高的Muc1、Esr2、Tff2、Wnt1和β-catenin，表明JCJ通过负向调控Wnt/β-catenin信号通路抑制EMT。
讨论部分指出，STC存在肌层变薄和隐窝减少的病理特征，JCJ依据中医“养血补精、润肠通便”理论组方，对血虚肠燥证型STC具有优势。研究发现JCJ中阿魏酸、异阿魏酸、毛蕊花糖苷、白术内酯等活性成分具有抑制EMT的作用，与实验结果一致。JCJ通过调控Glp1r、Sfrp4、Muc1、Esr2、Tff2等Wnt通路相关基因，抑制Wnt/β-catenin级联反应，从而下调EMT标志物、恢复紧密连接、减少胶原沉积、促进黏液分泌并改善水液代谢，最终恢复肠道动力和排便功能。
研究结论：JCJ可缩短STC小鼠首粒黑便排出时间、提高小肠推进率、增加粪便含水量，从而缓解STC；其机制是通过调控Wnt信号通路抑制肠道EMT。该研究为JCJ作为STC的候选治疗药物提供了坚实的实验依据，并提示Wnt/EMT轴可作为未来STC干预的潜在靶点。
