细菌共存诱导卡斯泰兰尼棘阿米巴脱囊：对隐形眼镜相关感染风险的影响

《Contact Lens and Anterior Eye》：Bacterial coexistence induces excystment of Acanthamoeba castellanii: Implications for contact lens–associated infection risk

　　

引言

Acanthamoeba是一种广泛存在的自由生活原生动物，常见于土壤和水生环境中。作为一种机会性病原体，它可引起Acanthamoeba角膜炎（AK），这是一种严重且往往难以治愈的角膜感染，可导致永久性视力丧失[1]，[2]。Acanthamoeba的生活周期包含两个可逆阶段：活动的营养体（滋养体）和休眠的高抗性包囊。在不利环境条件下，滋养体发生包囊化。相反，当环境条件改善时，包囊通过脱囊恢复为滋养体形式[3]。包囊具有坚固的双层囊壁，使其对抗菌药物具有显著的抵抗力。一旦包囊侵入角膜前弹力层，临床治疗便变得极具挑战性[4]。

佩戴隐形眼镜是AK的主要危险因素，约占病例的93%[5]，[6]。近年来，角膜塑形镜（orthokeratology）佩戴者中的AK发病率有所上升，这类患者夜间使用专用镜片重塑角膜，以便在白天获得无辅视力[7]。导致这些感染的重大因素是镜片和镜盒卫生不良，通常与低用户依从性相关，包括清洁不充分和接触自来水[8]。这些行为将多种微生物引入镜片储存环境。事实上，当从角膜炎患者中分离出Acanthamoeba时，其镜盒或护理系统其他部件中常同时分离出大量革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌[9]，[10]。

既往研究表明，Acanthamoeba castellanii滋养体在革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌（包括从透气性镜盒中分离的菌株）存在时可增殖[11]。此外，其他研究结果表明，从角膜塑形镜镜盒中分离的细菌菌株也可促进滋养体增殖[12]。虽然细菌的存在明显增加了Acanthamoeba增殖的风险，但许多商业消毒剂对包囊阶段的疗效有限[13]，[14]，但并非全部如此[15]。因此，存活包囊可能在镜盒中持续存在。当化学应激缓解或营养物质补充后，这些包囊可发生脱囊，导致滋养体再现并增加潜在感染风险。

鉴于高抗性包囊阶段带来的临床挑战，本研究探讨了A. castellanii的脱囊是否由与革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌（包括从角膜塑形镜镜盒中分离的细菌菌株）共存所诱导。此外，还评估了细菌分泌物质和细胞成分对A. castellanii脱囊的影响。

章节摘要

Acanthamoeba castellanii包囊的制备

所有实验均使用与AK相关的致病性菌株Acanthamoeba castellanii（ATCC 50370）。滋养体在22°C下于含Ac#6培养基（pH 6.5至6.6）的培养瓶中无细胞培养，培养基按ISO 19045附录A制备[16]。Ac#6培养基由20 g Biosate蛋白胨（BD，日本东京 / Gibco，Thermo Fisher Scientific，日本东京）、5 g D(+)-葡萄糖（FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation，日本大阪）、0.3 g KH₂PO₄（Nacalai Tesque，日本京都）、

革兰氏阴性菌：E. coli和P. aeruginosa

与革兰氏阴性菌共存显著促进了A. castellanii的脱囊[F(5, 12) = 47.83，p < 0.001，ω² = 0.93]（图1A）。阴性对照显示较低的自发脱囊率（10 ± 4.5%；包囊维持率：90 ± 4.5%），而阳性对照的脱囊率高达73 ± 7.8%。

两种细菌均诱导了明确的剂量依赖性脱囊刺激。与共培养5.5 × 10² CFU/mL和5.5 × 10⁶ CFU/mL时，脱囊率分别为40 ± 8.3%和65 ± 6.1%

讨论

本研究发现，所有受检细菌种类（包括革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌及从角膜塑形镜镜盒中分离的菌株）均能显著诱导A. castellanii以剂量依赖性方式脱囊。既往研究已证实，A. castellanii滋养体在与多种革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌共存时可有效增殖，包括从透气性镜盒中分离的菌株（如Bacillus subtilis和Microbacterium sp.）

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