《European Journal of Pharmacology》：C-terminus of HSC70-Interacting Protein-Mediated Transforming Growth Factor-β 1 Protein Degradation Underlies the Anti-fibrotic Effects of Verbascoside in Pulmonary Fibrosis
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•毛蕊花糖苷通过CHIP降解TGF-β1蛋白。•CHIP介导毛蕊花糖苷的抗纤维化作用。•一种治疗肺纤维化的新机制。引言肺纤维化（PF）是一种进展性且危及生命的间质性肺病，其特征是过多的细胞外基质（ECM）积聚，导致肺泡破坏和呼吸衰竭。尽管近年来在治疗方面取得了进展，但五年生存
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毛蕊花糖苷通过CHIP降解TGF-β1蛋白。
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CHIP介导毛蕊花糖苷的抗纤维化作用。
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一种治疗肺纤维化的新机制。
引言
肺纤维化（PF）是一种进展性且危及生命的间质性肺病，其特征是过多的细胞外基质（ECM）积聚，导致肺泡破坏和呼吸衰竭。尽管近年来在治疗方面取得了进展，但五年生存率仍约为20%，凸显了对更有效治疗的迫切需求（Barratt等，2018；Heukels等，2019）。
博来霉素（BLM）是一种化疗药物，会通过产生过多的活性氧（ROS）和激活促纤维化通路等剂量限制性副作用诱导肺纤维化（Della Latta等，2015a；Ishida等，2023；Kolb等，2020a）。BLM诱导的小鼠模型密切重现了人类PF的关键病理特征，已成为治疗评估的标准临床前平台（Della Latta等，2015b；Moeller等，2008）。
在PF的关键驱动因素中，转化生长因子-β1（TGF-β1）通过促进成纤维细胞激活、肌成纤维细胞分化和ECM产生而发挥核心作用。ROS可直接激活潜伏型TGF-β1，而TGF-β1反过来又可放大ROS的产生，形成一个维持纤维化进展的正反馈环路（Rangarajan等，2017；Samarelli等，2021；Ye和Hu，2021）。因此，限制TGF-β1可用性或活性的策略具有巨大的治疗前景。
毛蕊花糖苷（VBS，又称紫苑糖苷）是一种具有明确抗氧化和抗炎特性的苯丙素类糖苷（Kityania等，2023；Zhao等，2023）。近期研究表明VBS在肺和肝纤维化模型中具有保护作用，但其分子机制尚未完全阐明（Chen等，2022；Salvoza等，2022）。
HSC70相互作用蛋白的C末端（CHIP）是一种E3泛素连接酶，通过将靶蛋白靶向蛋白酶体降解来调控蛋白质质量控制（Zhang等，2011）。重要的是，CHIP介导的泛素化可受蛋白激酶A（PKA）的调控，后者在某些情况下可促进TGF-β蛋白的降解（Shen等，2022）。PKA活性依赖于细胞内cAMP水平，据报道VBS可在体外升高cAMP水平（Bers等，2019；Pennacchio等，1999）。然而，VBS升高cAMP的确切机制尚不清楚，PKA是否直接磷酸化CHIP以增强其活性也有待确定。
在本研究中，我们研究了VBS在BLM诱导的PF中的治疗潜力，并探索了潜在的分子机制。我们检验了如下假设：VBS通过以PKA依赖性方式促进CHIP介导的TGF-β1泛素化和降解来减轻PF。我们的研究结果鉴定了一条新的通路，即VBS增强PKA/CHIP/TGF-β1轴以降低TGF-β1蛋白稳定性，为PF提供了新的治疗策略。
章节片段
试剂和抗体
博来霉素硫酸盐（B8416）和毛蕊花糖苷（V4015，纯度≥98%）购自Sigma-Aldrich（上海，中国）。MG132（S2619）和H89（S1582）购自Selleck Chemicals（上海，中国）。重组人TGF-β1（100-21）购自PeproTech（上海，中国）。针对I型胶原（ab254113）、α-SMA（ab5694）、纤连蛋白（ab268020）和CHIP（ab228742）的一抗购自Abcam（上海，中国）；针对TGF-β1（26155-1-AP）的一抗购自Proteintech（上海，中国）；
VBS减轻BLM诱导的肺纤维化并在体内外降低TGF-β1蛋白表达
为评估VBS的抗纤维化作用，我们首先建立了一种BLM诱导的肺纤维化小鼠模型。VBS处理显著降低了BLM诱导的羟脯氨酸含量，羟脯氨酸是胶原蛋白沉积的公认生物标志物（图1A）。通过H&E和Masson三色染色进行的组织学检查证实，VBS有效减轻了BLM诱导的肺组织结构破坏和胶原积聚（图1B、C）。此外，VBS降低了
讨论
在本研究中，我们鉴定了毛蕊花糖苷（VBS）减轻肺纤维化的一个先前未被认识的机制：VBS激活cAMP/PKA通路，增强CHIP介导的TGF-β1泛素化，并促进TGF-β1的蛋白酶体降解。该机制在翻译后水平发挥作用，因为VBS在不改变TGF-β1 mRNA表达的情况下降低其蛋白水平。据我们所知，这是第一项在肺纤维化背景下将VBS与CHIP依赖性TGF-β1降解联系起来的研究报告
结论
在本研究中，我们证明毛蕊花糖苷（VBS）通过PKA激活促进CHIP介导的TGF-β1泛素化和降解，从而在博来霉素诱导的肺纤维化中发挥强效抗纤维化作用。VBS处理在体内外显著降低胶原沉积、ROS水平和纤维化标志物表达。在机制上，VBS升高细胞内cAMP水平，激活PKA，增强CHIP与TGF-β1之间的相互作用，并驱动TGF-β1的蛋白酶体
CRediT作者贡献声明
张新悦：撰写——审阅与编辑，形式分析。孙晋珂：撰写——审阅与编辑，验证。徐业秋：撰写——审阅与编辑，形式分析。崔姝岚：撰写——审阅与编辑，形式分析。罗双：撰写——审阅与编辑，验证。李敏：撰写——审阅与编辑，验证。李锦涛：撰写——审阅与编辑，验证。朱雁平：撰写——审阅与编辑，撰写——初稿。姬秀利：撰写——审阅与编辑，形式分析。韩 剑
伦理声明
本研究按照ARRIVE（动物研究：体内实验报告）指南进行。本研究已获山东中医药大学附属医院实验动物伦理委员会批准。（批准号：No.2024-332）
伦理批准与参与同意
所有动物实验均按照美国国立卫生研究院《实验动物护理与使用指南》进行，并获山东中医药大学附属医院实验动物伦理委员会批准（批准号：2024-332）。我们尽最大努力减少动物痛苦并降低动物使用数量。本研究不涉及人类参与者、人类数据或人类组织样本。因此，知情同意
资助
本研究由山东健康与健康领军人才计划（项目编号：2021-1-6）、山东省中医药科学技术发展计划项目（项目编号：2013ZDZK-099）和山东省自然科学基金一般项目（项目编号：ZR2019MH108）资助。
利益冲突声明
? 作者声明他们不存在已知的相互竞争的经济利益或个人关系，这些利益或关系可能影响本论文中报告的工作。
韩剑|卢珊珊|朱雁平|姬秀利|徐业秋|崔姝岚|张新悦|孙晋珂|李敏|李锦涛|罗双
