气管平滑肌受体介导收缩与松弛评估的标准化器官浴协议

《Biology Methods and Protocols》：Pharmacological methods for evaluating competitive antagonism blockade in airway receptors

　　

摘要

气管平滑肌的张力由多种受体系统调节，这些受体系统在呼吸系统疾病中起着关键作用。因此，评估分离组织制备物中的竞争性受体拮抗作用对于表征新型治疗剂非常重要。然而，方法学上的差异以及缺乏标准化的功能框架通常会影响候选化合物的可重复评估和机制区分。本文介绍了一种标准化的器官 bath 协议，用于评估分离气管平滑肌制备物中的受体介导的收缩和松弛。该方法的目的是确定天然产物、植物提取物、生物活性成分或合成化合物是否通过受体阻断、受体刺激或非受体介导的机制来改变气道反应。

该协议结合了三种互补的方法：（1）在建立激动剂诱导的收缩或松弛反应后添加测试剂；（2）比较预先与受体选择性拮抗剂孵育的组织与未孵育的组织在 KCl 诱导的预收缩后的反应；（3）在存在生理盐水、参考竞争性拮抗剂或不同浓度测试剂的情况下进行累积浓度-反应曲线分析。气管环在 Krebs–Henseleit 溶液中安装，并在受控的器官 bath 条件下记录反应。

定量结果包括半数有效浓度（EC₅₀）、最大反应（E_max）、Hill 斜率以及浓度比减一（CR???1），后者用于量化浓度-反应曲线的位移。如果反应曲线呈平行向右移动且 E_max 保持不变，则支持竞争性拮抗作用；而 E_max 降低、斜率改变或位移不平行则提示非竞争性、混合性或下游功能机制。该协议为气道药理学机制研究和候选支气管扩张剂及支气管保护剂的临床前筛选提供了一个可重复的框架。

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