盐酸氯米帕明在永生化及原代猫细胞中限制猫传染性腹膜炎病毒的复制

《Virology》：Clomipramine hydrochloride restricts feline infectious peritonitis virus replication in immortalized and primary feline cells

　　

摘要

猫传染性腹膜炎（FIP）是由猫冠状病毒（FCoV）引起的严重且常致命的猫类疾病。尽管抗病毒治疗的最新进展改善了临床预后，但成本、可及性、监管审批及抗病毒耐药性等方面的局限性凸显了需要探索额外治疗策略的紧迫性。靶向病毒复制所必需的宿主细胞过程的宿主导向抗病毒方法可能代表一种替代策略。本研究探讨了盐酸氯米帕明——一种具有溶酶体亲和性的兽用药物，此前已被报道对多种有包膜病毒具有抗病毒活性——是否能够抑制FIPV复制。氯米帕明预处理以浓度依赖性方式降低了Crandell-Rees猫肾（CRFK）细胞中的FIPV RNA和蛋白表达，并减少了具有感染性病毒的产量，EC₅₀为10.8 μM。计算得到的CC₅₀为60.5 μM，对应的选择性指数为5.6。氯米帕明在感染后立即给药或感染后4小时给药时仍保留抗病毒活性，尽管延迟治疗的效果有所降低。在源自腹水和胸水样本的猫原代细胞中也观察到了抗病毒活性。氯米帕明处理降低了FIPV诱导的干扰素刺激基因MX1和CXCL10的表达，而单独使用氯米帕明并未在未感染细胞中诱导这些基因的表达。MX1和CXCL10表达的降低与病毒RNA水平的下降密切相关，表明这些变化可能与病毒刺激减弱有关，而非这些干扰素刺激基因的直接诱导或抑制。LysoTracker染色显示FIPV感染细胞的荧光减弱，而氯米帕明处理的感染细胞则保留了染色。这些发现可能反映了抑制FIPV复制后与病毒相关的溶酶体区室紊乱减少。总之，这些发现表明氯米帕明是抗FIPV的潜在宿主导向抗病毒候选药物，并支持进一步研究其抗病毒活性和治疗潜力。

章节摘要

引言

猫传染性腹膜炎的致病因子是猫冠状病毒（FCoV），一种有包膜的正义单链RNA病毒，属于冠状病毒科和甲型冠状病毒1。FCoV存在两种血清型——I型和II型，其主要区别在于刺突（S）蛋白的氨基酸序列（Jaimes等，2020）。FCoV感染通常与猫肠道冠状病毒（FECV）相关，后者引起轻微或无症状的肠道疾病。在部分感染猫中，

氯米帕明在体外抑制FIPV复制

溶酶体亲和性化合物因其能够积累在酸性细胞内区室并调节溶酶体功能，而作为潜在抗病毒药物受到了越来越多的关注。盐酸氯米帕明是一种三环类抗抑郁药，用于兽医医学，是此类化合物之一，已被证明对多种有包膜病毒具有抗病毒活性，包括埃博拉病毒、SARS-CoV-2和MERS-CoV（Nobile等，2020；Zhao等，2018）。在此基础上

讨论

猫传染性腹膜炎（FIP）若未经治疗仍是猫类中严重且常致命的疾病，尽管直接作用抗病毒药物的开发已大幅改善了治疗效果。核苷类似物如GS-441524和3C样蛋白酶抑制剂GC376提供了显著的治疗益处。然而，抗病毒耐药性、成本、监管审批和可及性方面的局限性继续凸显了需要探索额外治疗策略的紧迫性。宿主导向抗病毒方法

细胞培养与病毒

CRFK细胞培养于添加10%胎牛血清（FBS；Gibco，美国）和1%青霉素-链霉素的Eagle最小必需培养基（MEM）中。细胞在37°C含5% CO₂的湿润大气中培养。II型FIPV 79-1146在CRFK细胞上扩增并在-80°C保存至使用。

病毒感染与氯米帕明处理

CRFK细胞用指示浓度的盐酸氯米帕明预处理24小时。随后以感染复数（MOI）感染

CRediT作者贡献声明

Ali Mirazimi：撰写——审稿与编辑、资金获取、概念化。Emma M Strage：撰写——审稿与编辑、验证、资源、方法学。Lijo John：撰写——初稿、可视化、验证、方法学、调查、形式化分析、数据管理、概念化

数据可用性

所有数据均包含在文章内

伦理批准

猫原代细胞来源于瑞典农业大学兽医临床病理实验室提供的匿名剩余临床渗出液样本（腹水和胸水）。样本采集自未经确认诊断FIPV的猫，并在已批准的伦理许可（6.7.18-14125/2025和6.7.18-14261/2022）下用于研究目的。

利益冲突

作者声明不存在利益冲突。

资助

本研究由MAD-CoV-2联盟资助，该基金来自欧盟地平线2020研究与创新计划，资助协议编号101005026。

利益冲突声明

? 作者声明不存在可能影响本论文所报告工作的已知竞争经济利益或个人关系。

Lijo John|Emma M. Strage|Ali Mirazimi

微生物学系，瑞典兽医机构，瑞典乌普萨拉