巴西亚马逊Bothrops atrox中Raillietiella furcocerca新记录：形态特征、感染描述与肺外感染部位

《Acta Parasitologica》：New Record of Raillietiella furcocerca (Pentastomida: Raillietiellidae) in Bothrops atrox from the Brazilian Amazon: Morphological Characterization and Infection Sites

　　

目的：本研究旨在记录下亚马逊地区、巴西帕拉州Bothrops atrox感染Raillietiella furcocerca的情况，提供形态计量学特征、感染描述指标以及对肺外感染部位（extrapulmonary infection sites）的新认识。方法：研究人员于2009—2011年（塔帕若斯国家森林）和2023—2024年（圣塔伦和贝尔特拉）检查了48份B. atrox标本。尸检中采集舌虫（Pentastomida），计数、测量并进行形态学鉴定。计算寄生虫学描述指标，包括流行率（Prevalence）、平均丰度（Mean abundance）和平均强度（Mean intensity），并对新热带区舌虫—蛇相互作用文献进行综述。结果：9份宿主标本被感染（9/48），总流行率为18.8%，平均丰度为0.48，平均强度为2.56。舌虫从肺和体腔（coelomic cavity）中采集，主动附着于内脏浆膜（visceral serosa），并伴有局灶性组织病变（focal tissue lesions）。结论：本研究为亚马逊生物群系（Amazonian biome）B. atrox中R. furcocerca提供首个定量寄生虫学基线，确认体腔是可行的生前（antemortem）肺外感染部位，并提供新热带蛇舌虫感染的最新文献综述和分布制图（distribution mapping）。

研究背景：舌虫（Pentastomida，一类蠕虫样内寄生虫）属于Pancrustaces、Ichthyostraca纲，主要寄生于脊椎动物呼吸系统。文献已识别约144个有效种，成虫为专性吸血者，生活史可涉及昆虫等中间宿主，并在终末宿主呼吸道达到生殖阶段。新热带区舌虫研究覆盖阿根廷、秘鲁、智利、哥斯达黎加、墨西哥和巴西等多样生态系统。Raillietiellidae Sambon, 1922主要由Raillietiella Sambon, 1910属代表，利用昆虫作为中间宿主，在爬行动物尤其蜥蜴和蛇的肺组织发育。R. furcocerca (Diesing, 1836)原作为Pentastoma furcocerca Diesing, 1836描述自巴西Boa constrictor Linnaeus, 1758，后经Heymons (1935)和Rêgo (1983, 1984)修订，Raillietiella gomesi Motta, 1963经钩结构与交配刺形态计量分析被认定为次异名。该虫为广宿主寄生虫，可感染Boidae、Colubridae、Dipsadidae和Viperidae，但南美记录大多来自大西洋森林、卡廷加和塞拉多生物群系，亚马逊北部生态系统存在明显生物地理空白。巴西蛇类已记录6种Raillietiella；尽管新热带蛇Raillietiella研究较多，但呼吸系统以外继发感染部位记录稀少，且尚无成虫在其他感染部位的报告。因此，研究人员开展本研究，记录巴西帕拉州下亚马逊B. atrox感染R. furcocerca，提供形态与形态计量特征、感染参数及肺外感染部位信息，并更新新热带蛇舌虫感染文献综述和分布制图。

研究人员开展的研究及意义：研究人员检查来自巴西帕拉州Belterra和Santarém市6个采样点的48份B. atrox（28雌、20雄），两个采样期为2009年12月至2011年12月（n=37）和2023年12月至2024年7月（n=11）。标本按CONCEA指南麻醉并处死，尸检系统检查肝、肺、心、口腔、喉、胃、小肠、大肠、体腔和肾，采集舌虫并保存于70%乙醇；同时采集其他蠕虫供后续分类研究。形态鉴定使用Hoyer's medium透明、临时玻片和100—400×光镜，显微照片由Zeiss Axioplan显微镜配Axiocam ERc 5s相机采集；形态计量包括体长体宽、硬化钩和雄性交配刺尺寸与结构、体表环纹数，使用Zen Blue Edition 2软件测量。扫描电镜（SEM）样品经2.5%戊二醛、1%四氧化锇固定、乙醇梯度脱水、临界点干燥、金钯镀膜后以Leo Stereoscan S-440观察。寄生虫学描述指标按Bush et al. (1997)计算，95%置信区间用Quantitative Parasitology 3.0按Reiczigel et al. (2019)估计，流行率用Clopper–Pearson精确法，平均丰度和平均强度用2,000次bootstrap重采样；形态计量相似性用Bray–Curtis相异指数聚类分析（PAST 4.0），数据经z-score标准化，文献缺失值按成对删除处理。文献综述按PRISMA指南于2026年3月在Web of Science、Scopus、SciELO和ScienceDirect检索，检索词组合包括“snake”或“reptilia”、“parasitic pentastomids”或“pentastomida”或“tongue worms”、“Brazil”或“neotropical”，无日期限制，排除学位论文和会议摘要；文献导入Rayyan去重，两名研究人员（ACOS和SR）独立盲法筛选标题和摘要，分歧经共识解决，纳入同行评议原创文章并提取作者、年份、地点、宿主、舌虫种类、感染部位和寄生虫学指标。研究意义在于提供下亚马逊B. atrox中R. furcocerca的首个定量寄生虫学基线，扩展该虫地理与宿主范围认识，并确认体腔为生前肺外感染部位。

关键技术方法概括（不超过250字）：样本来自巴西帕拉州Belterra和Santarém市6个采样点，两个时段为2009—2011年（n=37；Tapajós National Forest）和2023—2024年（n=11；Santarém与Belterra）。研究人员对48份B. atrox进行尸检并系统检查肺、体腔等器官，采集舌虫；以光镜和扫描电镜（SEM）进行形态与形态计量；按Bush et al. (1997)计算流行率、平均丰度和平均强度，用Quantitative Parasitology 3.0、Clopper–Pearson法和2,000次bootstrap估计置信区间；用Bray–Curtis相异指数聚类分析（PAST 4.0）；按PRISMA指南在Web of Science、Scopus、SciELO和ScienceDirect检索并综述新热带蛇舌虫感染记录。

研究结果：总体感染与采样期比较显示，48份B. atrox中9份感染舌虫，总流行率18.8%（9.0—32.6%），从肺和体腔共采集23份R. furcocerca，总平均丰度0.48（0.15—1.10），总平均强度2.56（1.33—4.78）。第二采样期2023—2024年感染率54.5%（6/11），高于2009—2011年的8.1%（3/37），平均强度分别为3.33和1.00寄生虫/感染宿主。

文献综述（Literature Review）：系统检索纳入53篇报道新热带蛇舌虫感染的文献，获得132条宿主—寄生虫相互作用记录，涵盖9种舌虫以及仅鉴定至属或Pentastomida indet.的记录，分布于5属、4科、2目，感染59种蛇、5科（Boidae、Colubridae、Dipsadidae、Elapidae和Viperidae）。记录数较高的科为Porocephalidae Fain, 1961（57条）、Raillietiellidae（35条）、Sebekidae Heymons, 1922（14条）和Cephalobaenidae Heymons, 1922（14条）；属级记录以Porocephalus Humboldt, 1811最多（41条），其次Raillietiella Sambon, 1910（35条）、Kiricephalus Sambon, 1922（17条）、Cephalobaena Heymons, 1922（14条）和Sebekia Sambon, 1922（14条）。原文列出的物种记录包括R. furcocerca（29条）、Porocephalus crotali (Humboldt, 1808)（19条）、Cephalobaena tetrapoda Heymons, 1922（14条）、Kiricephalus coarctatus (Diesing, 1850)（12条）、Porocephalus stilesi Sambon, 1922（10条）、Sebekia oxycephala (Diesing, 1836)（9条）、Porocephalus clavatus (Wyman, 1845)（5条）和Raillietiella venteli Motta, 1965（2条）。地理分布以巴西为主，另有阿根廷、秘鲁、智利、哥伦比亚、委内瑞拉、巴拉圭、法属圭亚那、哥斯达黎加、墨西哥、巴拿马、洪都拉斯、玻利维亚、危地马拉和特立尼达的记录。感染部位分析表明肺是R. furcocerca主要感染部位；文献中其他新热带宿主Boa constrictor、Lachesis muta (Linnaeus, 1766)和Crotalus durissus Linnaeus, 1758已有胃、肝、肠、肠系膜和体腔等肺外感染记录；Crotalus durissus terrificus (Laurenti, 1768)胃肠道中R. furcocerca的记录支持本研究中B. atrox体腔感染发现。

分类学摘要（Taxonomic Summary）：R. furcocerca (Diesing, 1836) Sambon, 1910，异名为Raillietiella gomesi Motta, 1963；门Arthropoda von Siebold, 1848，超纲Oligostraca Zrzavy, Hyp?a & Vlá?ková, 1997，纲Ichthyostraca Zrzavy, Hyp?a & Vlá?ková, 1997，亚纲Pentastomida Diesing, 1836，目Raillietiellida Almeida & Christoffersen, 1999，科Raillietiellidae Sambon, 1922，属Raillietiella Sambon, 1910；模式宿主Boa constrictor Linnaeus, 1758，模式产地巴西Mato Grosso州。附加宿主包括Viperidae的Bothrops atrox、Bothrops jararaca (Wied-Neuwied, 1824)、Crotalus durissus Linnaeus, 1758；Boidae的Boa constrictor、Epicrates cenchria (Linnaeus, 1758)、Eunectes murinus (Linnaeus, 1758)、Corallus hortulana (Linnaeus, 1758)；Colubridae的Philodryas nattereri (Steindachner, 1870)、Philodryas olfersii (Lichtenstein, 1823)、Leptodeira annulata (Linnaeus, 1758)、Clelia clelia (Daudin, 1803)、Oxyrhopus trigeminus Duméril, Bibron & Duméril, 1854、Spilotes pullatus (Linnaeus, 1758)、Erythrolamprus poecilogyrus (Wied-Neuwied, 1824)和Chironius spp.。附加地点为新热带区，南美包括巴西（Amazonia、Caatinga、Cerrado和Atlantic Forest生物群系，Pará、Ceará、Pernambuco、Bahia、Minas Gerais、Rio de Janeiro、S?o Paulo、Mato Grosso州）、阿根廷Chaco生物群系、哥伦比亚和委内瑞拉。感染部位为呼吸道（肺、气管；主要部位）及肺外内脏部位（体腔、内脏浆膜；本研究及文献）。本研究B. atrox流行率为18.8%（9.0—32.6）。本研究中分布地点为Tapajós National Forest（3o53′241′′S 55o05′224′′W）、Belterra市（2°38′18′′S 54°56′41′′W）和Santarém市Vale dos Oliveiras（2°32′51′′S 54°53′53′′W），巴西帕拉州。

形态特征（Morphological Characteristics）：所分析标本呈圆柱形、蠕虫样，两性体扁；体尺寸和环纹可变且难以观察和定量。雄性头胸甲呈圆轮廓，前口腔，钩呈梯形排列；内部交配扩张器延长，远端呈C形弯曲，基部宽并具嵴；可见缩短的侧突（parapoids）退化为钩部3个突起，并可见几丁质附属结构；两对钩基部发达，后钩大于前钩。交配扩张器仅见于雄性，明显延长、基部扩展并具嵴，远端略呈正向弯曲。雌性尺寸可变，口复合体如雄性呈更几丁质化环状区域并具分叉末端；两性钩排列和比例相当；雌性头胸甲结构与雄性相当但无交配扩张器。基于相似性树状图和R. furcocerca采样地区均值，本研究中雄性标本与巴西S?o Paulo和Mato Grosso州Drymarchon corais (Boie, 1827)中R. furcocerca标本的形态计量相似性超过95%；本研究中雌性R. furcocerca与先前报道宿主标本相似性低，表明寄生虫大小变异可受多种因素影响，并非仅因宿主不同。

感染部位（Infection Sites）：舌虫从肺和体腔（近肝、小肠、大肠和泄殖腔脂肪组织）采集；体腔标本显示寄生虫主动附着于内脏组织，直接伴局部出血和局灶组织反应，支持其作为真正肺外感染部位而非死后移位。肺组织大体病变表现为局灶性实质损伤和血液外渗入肺腔。

讨论总结与结论翻译：本研究首次记录亚马逊地区B. atrox中R. furcocerca，扩展该寄生虫在巴西的已知地理分布；体腔采集标本是重要发现，因为舌虫传统上被认为是脊椎动物呼吸系统专性寄生虫。新热带蛇肺外舌虫感染已有Porocephalus sp.、S. oxycephala、R. venteli和R. furcocerca记录；胃、肝和体腔等肺外部位存在成虫提出主动组织迁移或生活史变异的假设，提示宿主生态和行为因素及环境因素可能影响若虫扩散和附着，但原文指出肺外定位解释需谨慎并需进一步研究。死后移位是蠕虫和舌虫已知现象；本研究中舌虫主动附着内脏组织并伴局部出血组织反应，支持真正生前肺外定位而非人为死后移位。本研究报告的总流行率18.8%高于Carvalho et al. (2018)在Ceará州L. annulata中的报告，但低于Almeida et al. (2007)在Ceará州Crato市P. nattereri中35%的流行率；本研究提供下亚马逊B. atrox中R. furcocerca流行率、强度和平均丰度新数据，有助于理解该寄生虫与宿主的生态关系。先前研究主要将舌虫记录限于大西洋森林和卡廷加生物群系宿主；文献综述显示R. furcocerca广泛分布于Amazon、Caatinga和Atlantic Forest生物群系，感染多样蛇宿主，本研究证实B. atrox是亚马逊生物群系中R. furcocerca的适宜宿主，扩展对南美舌虫地理和宿主范围的认识。综述模式显示Porocephalidae和Raillietiellidae记录频率高，这更多反映不同地区和宿主类群研究努力及寄生虫可检测性的历史差异，而非绝对生物学优势；Raillietiella广宿主谱与针对该属寄生虫学调查的高集中相关，采样努力增加可扩展已知宿主关联。分子和系统发育数据方面，公共数据库中舌虫数据虽全球扩展，但新热带蛇寄生虫仍存在明显序列缺口；原文11种已鉴定舌虫中仅3种（Porocephalus crotali、P. clavatus、S. oxycephala）有已发表序列数据，主要为核18S/28S rDNA和线粒体COX₁/12S rDNA，且多数序列来自中美/北美或输入圈养标本；广泛新热带类群尤其R. furcocerca（n=12宿主记录）和C. tetrapoda（n=7宿主记录）目前缺乏已保存分子序列数据。舌虫形态特征保守，仅依赖物理鉴定可能低估隐存多样性，因此有必要整合分子工具（如DNA barcoding和多基因系统发育）与经典形态计量学，以检验R. furcocerca等广泛谱系是单一广适种还是隐存分类群复合体。研究地理集中巴西东北和东南，显示其他南美生态系统采样空白；巴西占亚马逊生物群系60%以上，但现有巴西调查集中于Caatinga和Atlantic Forest，广大巴西亚马逊及邻国亚马逊领地（如秘鲁、哥伦比亚、委内瑞拉）严重不足；这些差异源于偏远野外采样和野生宿主处理的后勤挑战；野生亚马逊蛇舌虫研究相对医学或兽医关注寄生虫仍不足。未来研究应优先在未充分探索的亚马逊生境开展靶向野外调查并结合分子表征，以揭示其真实进化多样性和传播途径。研究结论翻译：本研究为亚马逊生物群系B. atrox中R. furcocerca提供首个定量寄生虫学基线，确认体腔是可行的生前肺外感染部位，并提供新热带蛇舌虫感染的最新文献综述和分布制图。