结合网络药理学、遗传学引导的多组学以及颗粒细胞实验，鉴定了知柏地黄丸中调节女性青春期时机的CASP3相关候选化合物—苦参碱和齐墩果酸

《Functional & Integrative Genomics》：Integrating network pharmacology, genetically informed multi-omics and granulosa-cell experiments identifies dauricine and oleanolic acid as candidate CASP3-modulating compounds of Zhi-Bai-Di-Huang-Wan in female pubertal timing

　　

摘要

知柏地黄丸（ZBDHW）是一种临床上用于治疗性早熟的中药方剂，但其分子机制尚不明确。初潮年龄提前（AAM）反映了女性青春期时间提前的趋势，为与性早熟相关的可遗传性终点提供了依据。本研究旨在通过整合靶点预测、基于孟德尔随机化的甲基化-表达-蛋白分析、贝叶斯共定位、网络分析以及颗粒细胞实验，鉴定与青春期时间相关的知柏地黄丸相关分子靶点。知柏地黄丸的组分和候选靶点从BATMAN-TCM 2.0数据库中获取。基于汇总数据的孟德尔随机化和贝叶斯共定位将甲基化、表达和蛋白数量性状位点与目前欧洲最大的AAM全基因组关联研究相结合。通过蛋白质-蛋白质相互作用分析评估网络连接性。对人KGN颗粒细胞分别用小檗碱或齐墩果酸处理，并通过定量逆转录聚合酶链反应检测CASP3 mRNA表达水平。CASP3是唯一在基因表达和蛋白丰度水平上均显示汇聚证据的知柏地黄丸相关靶点，且在cg06796944位点有支持的甲基化证据。遗传预测的较高CASP3表达和蛋白丰度与较晚的初潮年龄相关，且CASP3在知柏地黄丸相关蛋白质-蛋白质相互作用网络中处于中心节点位置。在KGN细胞中，小檗碱在40和80 μM浓度下增加了CASP3 mRNA水平，齐墩果酸在200 μM浓度下增加了CASP3 mRNA水平。这些发现支持以CASP3为核心的甲基化-表达-蛋白靶点轴作为连接知柏地黄丸相关化合物与女性青春期时间的候选机制，为知柏地黄丸作为性早熟辅助治疗的联合使用提供了遗传学指导的多组学证据和初步的颗粒细胞实验支持。