《Drugs in R&D》：Biochemical Characterization and Stability of a New Fibrinogen Concentrate (BT524) Manufactured Using an Innovative Virus Inactivation Step
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背景与目的：人血浆用于生产包括纤维蛋白原在内的救命药物，纤维蛋白原是凝血块形成、组织修复和止血的关键因子。纤维蛋白原缺乏会导致凝血功能障碍及潜在的严重出血事件。纤维蛋白原浓缩物或冷沉淀是纤维蛋白原替代治疗的首选方案。两者均能提高血浆纤维蛋白原水平，但使用纤维蛋
背景与目的：人血浆用于生产包括纤维蛋白原在内的救命药物，纤维蛋白原是凝血块形成、组织修复和止血的关键因子。纤维蛋白原缺乏会导致凝血功能障碍及潜在的严重出血事件。纤维蛋白原浓缩物或冷沉淀是纤维蛋白原替代治疗的首选方案。两者均能提高血浆纤维蛋白原水平，但使用纤维蛋白原浓缩物更具优势。它通过制造程序去除或灭活人血浆中可能存在的病毒或朊病毒，从而增强了病原体安全性。
方法：研究人员开发了一种新颖的制造工艺，可在一个工作流程中同时产出纤维蛋白原浓缩物（BT524）和凝血因子VIII（Haemoctin? SDH）。该工艺包含多个病毒灭活步骤，包括一项创新的UV-C照射步骤和一个用于去除朊病毒的阳离子交换色谱（CEX）步骤。
结果：在成功灭活潜在病毒污染的同时，UV-C照射对纤维蛋白原的结构和组成没有影响，也未发现新抗原结构的形成。纤维蛋白原浓缩物（BT524）几乎只含有活性接近100%的纤维蛋白原，亚可见颗粒数量极低，且无可测量的血栓形成活性。临床材料的稳定性研究表明，产品在多种储存条件下可稳定保存五年。在室温下使用nextaro?v转移装置复溶后，溶解时间为2-4分钟，纤维蛋白原浓缩物几乎可以立即使用。复溶后的溶液在24小时内表现出理化稳定性。
结论：采用新颖制造工艺生产的纤维蛋白原浓缩物（BT524）是一种高质量、高纯度且具有病毒安全性的产品。此外，它还具备优异的溶解性、长期稳定性和高活性。与Haemoctin? SDH共享工艺步骤，有助于更道德、更高效地利用人血浆。临床试验证明了所生产纤维蛋白原浓缩物的效力、安全性和耐受性。
研究背景与目的
纤维蛋白原（Fibrinogen），又称凝血因子I，是一种可溶性血浆糖蛋白，在初级和次级止血过程中发挥关键作用，包括血凝块形成、血小板聚集和组织修复。其分子呈细长状（45 nm），由两套三条多肽链（Aα、Bβ、Bγ）构成。在凝血过程中，凝血酶切割纤维蛋白原，生成纤维蛋白单体，进而聚合形成不溶性的纤维蛋白支架。正常人血浆中纤维蛋白原浓度为2-4 g/L。纤维蛋白原缺乏会导致凝血功能受损，增加出血风险，可分为先天性和获得性两种，其中获得性缺乏更为常见。治疗主要通过补充纤维蛋白原浓缩物、新鲜冰冻血浆（FFP）或冷沉淀。欧洲指南推荐，当显著出血伴随血浆纤维蛋白原水平低于1.5 g/L时，应使用纤维蛋白原进行治疗。相比FFP和冷沉淀，纤维蛋白原浓缩物具有浓度恒定、制备迅速、无需血型匹配以及通过病毒灭活增强病原体安全性等优点。然而，全球对血浆源性产品的需求日益增长，而血浆采集量增长缓慢，这凸显了开发更高效制造工艺的迫切性。本研究旨在介绍一种新的制造工艺，该工艺能与凝血因子VIII（Haemoctin? SDH）的生产共享初始步骤，并通过引入创新的UV-C照射等三步病毒灭活步骤，生产出一种高纯度、高活性、稳定性好的冻干纤维蛋白原浓缩物（BT524）。
研究方法与技术
研究人员开发了一个新颖的联合生产工艺，从同一份血浆起始物料中分离纯化纤维蛋白原浓缩物（BT524）和凝血因子VIII。该工艺的关键技术方法包括：1）溶剂/去污剂（S/D）处理进行病毒灭活；2）阴离子交换色谱（AEX）分离纤维蛋白原与纤维连接蛋白、FVIII和血管性血友病因子（VWF）；3）甘氨酸沉淀进一步纯化；4）创新的UV-C照射（254 nm）病毒灭活步骤，使用UVivatec管式反应器确保均匀照射；5）阳离子交换色谱（CEX）去除残留VWF、去污剂及潜在的朊病毒蛋白；6）超滤浓缩和配方；7）冷冻干燥和热处理。稳定性研究遵循ICH指南，对三个临床规模批次在5°C、25°C/60%相对湿度和30°C/70%相对湿度条件下进行了长达60个月的监测。
研究结果
3.1 UV-C照射实验（实验室规模）： 通过比较不同照射剂量（最高达标准剂量的2.6倍）与未照射样品，研究发现所有样品的特异性纤维蛋白原活性均为98%，表明UV-C照射不影响该活性。肽图谱和二维差异凝胶电泳（2D-DIGE）分析显示，UV-C照射未改变纤维蛋白原的整体结构和组成。评估先天性和适应性免疫反应的测定结果表明，即使在高剂量照射下，也未形成新抗原结构。虽然观察到UV-C照射导致聚集体含量小幅增加约4%（终产品中聚集体水平为11-13%），但这并未损害产品的生物活性。
3.2 商业规模生产的纤维蛋白原浓缩物的生化表征： 对六个商业规模批次的分析显示，BT524具有高特异性纤维蛋白原活性（98 ± 1.6%），每克产品含1.0 ± 0.04克活性纤维蛋白原。钾浓度极低（0.1 mmol/L），对血钾水平影响可忽略不计。
3.3 纯度： SDS-PAGE和Western blot分析显示，主要条带为纤维蛋白原的α、β和γ链，杂质条带极微弱。工艺相关杂质（如白蛋白、免疫球蛋白、其他凝血因子）和产品相关杂质（如D-二聚体、纤维蛋白肽A、片段）的含量均很低或无法检测。非活化部分凝血活酶时间（NaPTT）远高于80%，无血栓形成活性。亚可见颗粒数量比药典要求低一到两个数量级。
3.4 稳定性： 对三个临床规模批次的长期稳定性研究显示，在5°C、25°C和30°C条件下储存60个月后，所有批次的特异性纤维蛋白原活性均未降至95%以下，表明产品可稳定保存五年。
3.5 复溶后溶液的溶解性与稳定性： 在室温下，使用nextaro?v转移装置复溶的平均时间为2分49秒，即使在冷藏条件下也仅为5分26秒，表明产品可快速使用。经过60个月储存后复溶的溶液，在5°C或25°C下放置24小时，各项特性指标仍保持稳定。
讨论与结论
讨论部分指出，BT524的生产工艺包含三个有效的病毒灭活步骤（S/D处理、UV-C照射和热处理）以及一个CEX色谱去除朊病毒步骤，提供了强大的病原体安全保障。与依赖纳米过滤的其他产品相比，UV-C照射不受目标蛋白大小和形状的限制，尤其对小而无包膜的病毒有效，且不会影响产品质量。尽管观察到UV-C照射导致聚集体轻微增加，但因其未影响活性且在临床试验中展现出良好的安全性，被认为是可接受的。BT524的高纯度、高活性（98%）以及极低的杂质水平（如VWF、D-二聚体、片段等）确保了其功能性和安全性。长达60个月的稳定性数据证实了其货架期。快速的复溶时间和复溶后24小时的稳定性使其在临床使用中极为便捷。
结论： 采用新颖制造工艺生产的纤维蛋白原浓缩物（BT524）是一种高质量、高纯度且具有病毒安全性的产品。此外，它还具备优异的溶解性、长期稳定性和高活性。与Haemoctin? SDH共享工艺步骤，有助于更道德、更高效地利用人血浆。临床试验证明了所生产纤维蛋白原浓缩物的效力、安全性和耐受性。
