WHO联合化疗一年后多菌型麻风病患者中通过qRT-PCR检测到的提示麻风分枝杆菌存活的持续性RNA标志：临床与组织病理学相关性

《European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases》：Persistent RNA signatures suggestive of Mycobacterium leprae viability detected by qRT-PCR in multibacillary leprosy patients after one year of WHO-MDT: clinical and histopathological correlation

　　

摘要

背景

多药联合治疗（MDT）已显著减轻了麻风病的全球疾病负担；然而，最新证据表明，在高细菌指数（BI）的麻风病患者中，即使完成治疗后，仍有活的麻风分枝杆菌（Mycobacterium leprae）可能持续存在，这构成了复发和持续传播的风险。本研究旨在对高细菌指数多菌型麻风患者在MDT治疗期间及之后的麻风分枝杆菌活力相关基因RNA转录本进行纵向定量分析，并将这些发现与组织病理学和临床结局相关联。

方法

从180例新诊断的多菌型（MB）患者（BI＞3+）入组时、125例患者6个月时以及60例患者12个月时采集裂隙皮肤涂片（SSS）样本。从SSS中提取DNA和RNA，随后进行反转录为cDNA，并进行qPCR检测。利用所有基因的纯化扩增产物进行10倍系列稀释以生成标准曲线，用于定量拷贝数。使用DNA进行RLEP qPCR，以归一化16S rRNA、hsp18和esxA基因的RNA。我们利用实时定量PCR针对三个与活力相关的基因（16S rRNA、hsp18和esxA）对麻风分枝杆菌进行分子活力评估。统计分析采用ANOVA及Tukey多重比较检验。对12个月治疗后仍显示存在活菌的子集患者（n = 5）进行了组织病理学分析。

结果

我们观察到，相当大比例的患者在完成MDT治疗一年后的三个基因靶标仍呈持续表达。当患者在12个月时结束治疗（RFT）时，高BI MB麻风病患者中分别有40%、45%和46.6%检测到了16S rRNA、esxA和hsp18的基因表达。值得注意的是，在部分患者中，基因拷贝数随时间推移保持恒定或增加。组织病理学分析印证了分子学发现，显示此类RFT患者的活检标本中存在活动性肉芽肿和抗酸杆菌。统计分析证实MB MDT基线与第12个月之间存在基因表达的极显著差异。

结论

我们的发现表明，在完成标准12个月WHO-MDT方案后，部分高BI MB患者体内仍存在与麻风分枝杆菌活力相关的持续RNA特征。这些分子学发现提示细菌活力持续存在，但无法明确区分具有复制能力的活菌与残留RNA。分子活力标志物（16S rRNA、hsp18、esxA）的应用为监测治疗反应提供了灵敏工具，并支持对当前固定疗程方案进行重新评估的必要性，尤其针对高BI病例。