基于阳离子交换色谱法定量测定疏水离子对复合物中蛋白质释放及活性分析

《Analytical Methods》：Quantifying protein release from hydrophobic ion pairs by cation exchange chromatographyOpen Access

【字体：大中小】 时间：2026年10月27日 来源：Analytical Methods 3

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　　打开图像查看器疏水离子配对是一种已建立的小分子和肽类溶度工程学策略，但其向蛋白质的扩展应用仍然相对探索

疏水离子配对是一种已建立的小分子和肽类溶度工程学策略，但其向蛋白质的扩展应用仍然相对探索不足，而且在生物相关条件下测量蛋白质从这些复合体中释放的定量方法仍然有限。比色法和基于紫外线的测定会受到共配制剂的表面活性剂、胆盐和磷脂的干扰。在此，我们报告了一种阳离子交换色谱法，在快速蛋白液相色谱系统上实施，该方法在紫外检测之前将溶菌酶从这些基质成分中分离出来。根据ICH Q2(R2)进行的验证显示，线性范围为20至320 μg/mL（R2为0.9998），检测限为7 μg/mL，定量限为20 μg/mL，在高离子强度介质中回收率为88.2%。在含磷脂的介质中回收率降至42.6%，限制了在这些条件下的绝对定量，支持蛋白质释放的比较评估。该方法应用于溶菌酶-十二烷基硫酸钠和溶菌酶-二辛基磺基琥珀酸盐复合体，显示出随pH、离子强度和模拟肠液成分而显著不同的解离行为。溶菌酶-十二烷基硫酸钠在所有条件下均释放出可测量的蛋白质，而更稳定的溶菌酶-二辛基磺基琥珀酸盐复合体则抵抗解离，在大多数模拟肠液条件下释放的溶菌酶低于定量限。根据解离介质的不同，回收的溶菌酶保留了天然溶菌酶17-40%的催化活性，证明色谱分离能够实现释放蛋白质的定量和功能评估。