《Talanta》：Effervescent-tablet-integrated derivatization and salting-out extraction for LC–FLD determination of neuropathic pain drugs in human plasma
编辑推荐：
•开发了一种基于多功能片剂的单管一步法 EAD-SALLE 方法。•将 AQC 衍生化、CO2 辅助混合和盐析液-液萃取（SALLE）集成于同一试管中。•即取即用的片剂可实现 3.5 分钟样品制备，且储存稳定性达 3 个月以上。•经济高效的 LC–FLD 方法对 PRG、GB
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开发了一种基于多功能片剂的单管一步法 EAD-SALLE 方法。
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将 AQC 衍生化、CO2 辅助混合和盐析液-液萃取（SALLE）集成于同一试管中。
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即取即用的片剂可实现 3.5 分钟样品制备，且储存稳定性达 3 个月以上。
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经济高效的 LC–FLD 方法对 PRG、GBP 和 MG 的检测限为 0.011–0.023 μg/mL。
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盲样血浆加标回收率为 94.80%–110.00%（RSD ≤ 9.52%）。
引言
神经病理性疼痛是由累及躯体感觉系统的损伤或疾病所引起的，其症状持续且通常难以控制。它常见于糖尿病周围神经病变、带状疱疹后神经痛、术后神经损伤以及癌痛等疾病[1]、[2]。α2δ 钙通道配体普瑞巴林（PRG）、加巴喷丁（GBP）和米罗巴林（MG）被用于治疗神经病理性疼痛，也可作为多模式镇痛的辅助用药[3]、[4]。患者之间在吸收、肾清除率、合并疾病及剂量需求方面的差异——尤其是肾功能不全患者——可导致异质性临床反应[5]、[6]。因此，需要在生物基质中准确定量这些药物，以支持药代动力学评估、个体化剂量优化及药物管理。
PRG、GBP 和 MG 的直接色谱测定受到其分子量小、极性显著以及天然紫外/荧光信号弱等因素的限制[7]、[8]。柱前化学标记结合液相色谱-荧光检测提供了一种灵敏且易于实现的替代方案，其仪器要求相对较低[9]、[10]。6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯（AQC）在弱碱性条件下可与伯胺基团快速反应，生成具有强荧光的产品，从而增强可检测性[11]、[12]。除衍生化外，有效的萃取有助于从复杂样品基质中分离和富集目标分析物[13]、[14]。然而，在传统工作流程中，AQC 的添加、pH 控制、反应以及随后的萃取或净化是作为独立操作进行的，增加了手工操作和预处理时间。
将化学标记和萃取结合在单一预处理步骤中，可以减少样品转移、限制分析物损失，并提高分析通量[15]、[16]。类似地，超声辅助同时萃取与酶解缩短了山羊角 LC–MS/MS 分析的样品制备时间[17]。盐析液-液萃取（SALLE）利用盐诱导水和乙腈之间互溶性的变化，将目标化合物或其衍生物分配至富含乙腈的层中[18]、[19]、[20]。SALLE 也与空气辅助相分离[21]和超声辅助萃取[22]相结合，以简化样品制备。另一种方法是基于发泡的技术，通过原位产生 CO2 来分散试剂、增强混合、加速传质或反应动力学[23]、[24]。早期研究表明，发泡可以促进 SALLE，而基于片剂的剂型可以减少手工操作[25]、[26]。然而，一种能够同时提供发泡混合、pH 调节、衍生化、盐析相形成和萃取的即取即用片剂，尚未得到充分研究。
本研究介绍了一种用于血浆中 PRG、GBP 和 MG 单管一步法发泡辅助衍生化与盐析液-液萃取（EAD-SALLE）的多功能泡腾片。将 AQC 与 Na2CO3/NaH2PO4 泡腾对共同制剂于预压缩片剂中。当该片剂加入水样-乙腈混合物时，同时产生 CO2、调节反应环境、标记分析物并引发盐析，从而将荧光产物转移至富含乙腈的相中。首先利用相行为和色谱响应来确认可行性。随后逐一筛选操作变量，并通过响应面法进行优化。通过与顺序衍生化/萃取方案的比较以及评估批次间重现性和储存后的分析性能来考察实际表现。然后评价基质效应、校准、灵敏度、精密度和准确度，最后应用于血浆样本。
章节摘要
化学试剂与材料
PRG、GBP 和 MG 的分析标准品（纯度均 ≥ 98%）购自上海大玛斯-贝塔公司；其结构及相应的 log P 和 pKa 值见表 S1。碳酸钠（Na2CO3，99%）、四硼酸钠十水合物（Na2B4O7·10H2O，99%）、磷酸二氢钠（NaH2PO4，99%）和氯化钠（NaCl，99%）同样购自大玛斯-贝塔公司。6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯（AQC，97%）由阿达玛斯生命公司提供。
单管 EAD-SALLE 策略的可行性
单管 EAD-SALLE 策略旨在利用即取即用片剂在单个试管中集成衍生化、发泡混合和盐析萃取。选择乙腈是因为它可溶解 AQC，最初与水样混合，在盐析后形成富含有机相，且与 LC 流动相兼容。选择 AQC 是因为它可以与目标分析物的伯胺基团快速反应形成荧光衍生物，并且可以
结论
本研究建立了一种对血浆中 PRG、GBP 和 MG 进行单管一步法 EAD-SALLE 的多功能泡腾片。将 AQC 与碳酸盐/磷酸盐对共同制剂后，使得衍生化、CO2 驱动混合、pH 调节、盐析和萃取均能在一个试管中完成。优化后的预处理过程约需 3.5 分钟，使用干燥储存 3 个月的片剂所得分析物峰面积与使用新鲜片剂的结果相近。该分析方法表现出
CRediT 作者贡献声明
高亚萍：撰写 – 原稿、方法学、调查研究、形式化分析、数据整理。张小飞：撰写 – 原稿、可视化、验证、方法学、调查研究。王兰杰：撰写 – 原稿、调查研究、数据整理。马一新：撰写 – 原稿、方法学、调查研究。吕梦媛：撰写 – 原稿、方法学、调查研究。覃志飞：撰写 – 审阅与编辑、资源提供、调查研究。陈迪：撰写 – 审阅与编辑、
利益冲突声明
作者声明，他们不存在已知的可能影响本文所报告工作的竞争性经济利益或个人关系。
致谢
本研究由河南省科技攻关计划（262102311173）资助。
高亚萍|张小飞|王兰杰|马一新|吕梦媛|覃志飞|陈迪
