胶质母细胞瘤类器官冷冻保存及干细胞自我更新能力评估

《Scientific Reports》：Cryopreservation techniques for adult and pediatric glioblastoma organoids and their effects on stem cell self-renewal

摘要

类器官是一种先进的三维体外模型，能够精准再现肿瘤结构、细胞异质性和微环境相互作用，因此成为癌症研究的宝贵工具，尤其是在研究致命的原发性脑肿瘤——胶质母细胞瘤（GBM）时。然而，类器官的制备过程耗时且资源密集，因此需要可靠的冷冻保存技术以实现长期存储、生物样本库建设和样本共享。虽然已有针对小型球体及类器官的冷冻保存方法，但这些方法尚未进行直接比较；而对于较大尺寸（多毫米级别）的类器官的冷冻保存则基本未被探索。此外，目前使用的含FBS（胎牛血清）的冷冻保存方法可能会诱导神经细胞分化，但其维持GBM干细胞自我更新的能力尚未经过系统评估。我们测试了多种定制及市售的冷冻保存容器和培养基对GBM干细胞自我更新、细胞存活率、结构以及从患者组织直接培育的类器官中干细胞保护效果的影响。结果表明，常见的非商业冷冻培养基（含有10% DMSO，既可以是无血清培养基，也可以添加80% FBS的培养基）在维持GBM干细胞存活率和自我更新能力方面，与市售冷冻保存试剂相当甚至更优。经冷冻保存后的类器官在解冻后仍能保持存活率、自我更新能力及组织学特性。这些发现为大规模GBM类器官的冷冻保存提供了可行的方法，有利于其在生物样本库建设、合作研究及实验研究工作中的广泛应用。