基于四重同位素稀释UHPLC-MS/MS法测定尿基质中马尿酸的方法学研究

《Scientific Reports》：Quadruple isotope dilution versus conventional calibration methods for accurate urinary hippuric acid quantification with a synthesized isotopically labelled material

　　

摘要

马尿酸是毒理学和代谢研究中的关键生物标志物。本研究提出了一种准确测定尿基质中马尿酸含量的超高效液相色谱 - 串联质谱（UHPLC-MS/MS）方法。采用四重同位素稀释（ID⁴）策略来补偿可能的基质效应和校准差异，并提高准确度。马尿酸-d? 由甘氨酸和苯甲酰氯-d? 在内部合成，将材料成本降低至易于负担的水平。优化了质谱和色谱参数以提高灵敏度和分离效果。在优化实验后，评估了 UHPLC-MS/MS 系统的分析性能。所开发的方法显示出从 55.80 ng/kg 到 530.10 μg/kg 的宽线性范围，检出限（LOD）为 15.6 ng/kg，定量限（LOQ）为 52.1 ng/kg。该方法通过有证标准物质和相同基质中的梯度加标回收试验进行了验证，结果与证书值吻合度极佳，回收率一致。将结果与更常规的外标法（ES）校准和单点同位素标记标准加入法进行比较，证明了 ID⁴ 方法的优越性。拟议方法旨在作为尿液中马尿酸的候选参考程序，可用于为常规 LC-MS/MS 方法的质量控制和校准材料赋值。此外，马尿酸-d₅ 的内部合成使得计量机构以外的实验室也能负担得起这种方法。