《EFSA Journal》：Peer review of the pesticide risk assessment of the active substance Trichoderma atrovirideT11
编辑推荐：
本文报告了欧洲食品安全局（European Food Safety Authority，EFSA）在同行评审过程中，针对由 rapporteur 成员国瑞典及 co-rapporteur 成员国意大利所完成的农药活性物质深绿木霉T11（Trichoderma
本文报告了欧洲食品安全局（European Food Safety Authority，EFSA）在同行评审过程中，针对由 rapporteur 成员国瑞典及 co-rapporteur 成员国意大利所完成的农药活性物质深绿木霉T11（Trichoderma atroviride T11）初始风险评估所得出的结论。此次同行评审的背景依据为欧盟委员会实施条例（EU）No 844/2012 的相关规定。上述结论基于对深绿木霉T11作为杀菌剂，在田间及温室条件下用于草莓、生菜和番茄的代表性用途评估而得出。本报告列出了适用于监管风险评估的可靠终点（reliable end points），指出了监管框架所要求但缺失的信息，并识别了尚未能最终定论的问题。
论文主体内容总结
1. 微生物活性物质的规格、物理技术特性及分析方法
深绿木霉T11（Trichoderma atroviride T11）生产用微生物农药活性剂（microbial pest control agent，MPCA）中孢子最低和最高含量分别为3×1010 和5×1010 CFU/g，规格基于工业规模生产批次数据制定。MPCA及微生物植保产品（microbial pest control product，MPCP）中微生物污染物含量均低于欧盟工作文件规定的限值。通过扩增深绿木霉T11特异性SCAR标记A1，可将其与近缘木霉属（Trichoderma spp.）菌株进行鉴别和区分。代表性制剂在商业包装4°C条件下储存24个月保持稳定。已建立可接受的方法用于测定MPCA和MPCP中微生物含量及污染物含量。由于未设定深绿木霉T11的残留定义，因此无需监测方法。
2. 微生物的生物学特性
深绿木霉T11为野生型菌株，最初分离自西班牙萨拉曼卡Aldearrubia的甜菜农业土壤。深绿木霉（Trichoderma atroviride）为欧洲自然发生的土壤传播真菌。代表性用途的靶标生物包括草莓上的恶疫霉（Phytophthora cactorum）、生菜上的灰葡萄孢（Botrytis cinerea）以及番茄上的镰孢菌属（Fusarium spp.）。其作用机制包括营养竞争、抗生作用、重寄生作用、产抗真菌化合物及细胞壁降解酶，以及促进植物生长和营养吸收。生长研究表明该菌株在25°C下生长最佳，在37°C下生长受限；最适pH范围为4至6。该菌株对多种抗真菌药物敏感性测试显示，两性霉素B、伏立康唑和卡泊芬净可测定最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC），而酮康唑、氟康唑、伊曲康唑和氟胞嘧啶在最高测试浓度下未显示生长抑制。现有证据表明该菌株可能产生潜在毒理学关注的次级代谢物，但缺乏全基因组测序（whole genome sequencing，WGS）分析。对单批次MPCA-AM的分析筛查未检出单端孢霉烯、胶霉毒素、聚酮类、大黄素（emodin）、细胞松弛素或喜树碱，仅鉴定出6-PP的可能衍生物，而肽菌素（peptaibols）的生产无法排除。
3. 对人类/哺乳动物健康的潜在影响
3.1 微生物的哺乳动物感染性和致病性及致敏效应
现有医学信息显示，深绿木霉属物种无证据表明可在免疫功能正常的健康人体内引起感染。生产处理过程中未报告工人出现不良健康效应。深绿木霉属物种未被列入EFSA的合格安全推定（qualified presumption of safety，QPS）清单。基于微生物特性，深绿木霉T11应被视为潜在致敏原，建议标注警示语。大鼠经口、气管内和腹腔内急性给予该活性物质后未见毒性或致病性迹象，气管内暴露后的微生物学分析显示活性生物体完全清除，无感染性。对代表性制剂，家兔皮肤和眼睛刺激试验仅观察到轻微可逆刺激。基于现有数据，结论为深绿木霉T11在免疫功能正常人群中无感染性/致病性潜力。
3.2 （潜在）关注代谢物的哺乳动物毒性
深绿木霉T11可产生挥发性化合物6-戊基-2H-吡喃-2-酮（6-PP），该物质已获授权为食品调味物质，在90天大鼠研究中确定无可见不良效应水平（no observed adverse effect level，NOAEL）为12.1 mg/kg bw/天，在估计摄入水平下无安全关注。6-PP的两种可能衍生物在缺乏毒理学证据的情况下不太可能成为毒理学关注代谢物。关于肽菌素，体外细胞毒性已观察到，但体内急性毒性较低，基于现有信息不太可能成为人类健康关注代谢物。大黄素属于蒽醌类，因与已知遗传毒性物质芦荟大黄素结构相关而被视为潜在遗传毒性和致癌化合物，在单批次MPCA-AM分析中未检出，因此产品中潜在存在仍具不确定性，存在数据缺口。Pachybasin也属于蒽醌类聚酮家族，急性和重复剂量研究显示低毒性潜力，文献综述未见遗传毒性证据，但鉴于蒽醌环系统的结构警示，其遗传毒性潜力需进一步阐明，存在数据缺口。细胞松弛素和喜树碱在MPCA-AM中未检出，总体而言不太可能成为人类健康关注代谢物。除大黄素和pachybasin相关数据缺口外，未识别非膳食暴露关注。
4. 残留
深绿木霉T11依据先前同行评审被列入法规（EC）No 396/2005附件IV。依据指导文件SANCO/11188/2013 Rev. 2中五项评估标准，深绿木霉T11不符合标准I和II。该菌株缺乏支持性基因组分析以证明多种次级代谢物基因的存在/缺失，其中部分具有潜在关注性。在代表性用途条件下，未研究生菜（被认为对潜在残留最关键的用途）、草莓和番茄上潜在遗传毒性代谢物大黄素和pachybasin的出现情况（包括潜在原位形成），需证明其在可食用农产品中的不存在，存在数据缺口。代表性用途包括生菜叶面喷雾及草莓和番茄滴灌或灌根直至收获，消费者暴露可预期，特别是生菜。可存活细胞可能在可食用农产品上原位产生潜在遗传毒性代谢物，但缺乏菌株特异性实验数据，存在数据缺口。基于现有信息，无法得出结论认为非存活残留仅以低于消费者潜在健康关注水平出现。6-PP的潜在产生对消费者不构成关注。因此，消费者风险评估无法最终定论，深绿木霉T11的五项评估标准均被认为未满足。
5. 环境归趋和行为
已提供满意信息表明深绿木霉T11不会干扰饮用水质量控制分析系统。土壤持久性和繁殖研究表明，该菌株可在温室盆中不同土壤类型中持续存在超过5个月，施用量为3 kg产品/ha，略低于但处于代表性用途3–6 kg产品/ha的范围内。文献信息表明木霉属土壤持久性在1年内下降至自然背景水平。已为所有代表性用途计算土壤预测环境密度（predicted environmental densities，PED）。缺乏地表水和沉积物中持久性或繁殖的菌株特异性研究，文献表明木霉属孢子在有利条件下可在水生环境中存活，但天然地表水中萌发和种群增长预计受限。空气中存活和竞争力预计有限。土壤中移动性信息不足，但水平和垂直移动性预计有限。关于次级代谢物，存在数据缺口，无法确定深绿木霉T11是否产生潜在关注次级代谢物（如大黄素和pachybasin）及其在环境 compartment 中可能出现的浓度，因此无法判定是否符合法规（EU）No 283/2013 Part B Section 7 (iv) 标准，导致问题无法最终定论。
6. 对非靶标生物的潜在影响
6.1 鸟类和哺乳动物
无深绿木霉T11或代表性制剂的鸟类研究，但一项深绿木霉（Trichoderma afroharzianum）T22研究被认为适用于评估。现有数据未显示深绿木霉T11对鸟类和野生哺乳动物具有感染性或致病性。由于次级代谢物的危害表征和暴露评估无法最终定论，田间和非永久性结构用途无法得出低风险结论，存在数据缺口导致问题未最终定论。永久性结构中暴露预计极小，可得出低风险结论。
6.2 水生生物
无深绿木霉T11的水生生物研究，但代表性制剂对鱼、水生无脊椎动物和藻类的急性研究以及其它木霉属物种研究被认为适用。现有数据未显示感染性或致病性。缺乏足够毒性数据进行次级代谢物危害表征，风险评估无法最终定论，存在数据缺口。RMS不同意并认为评估已定论。
6.3 蜜蜂
代表性制剂的18天经口毒性和14天接触毒性研究仅报告有限、非统计显著效应，但持续时间不足以评估感染性和致病性。其它木霉属物种的适当持续时间研究被认为相关。总体信息足以最终定论，无迹象表明该菌株对蜜蜂具有感染性或致病性。但次级代谢物风险评估无法最终定论，存在数据缺口。永久性结构中可得出低风险结论。
6.4 蜜蜂以外的非靶标节肢动物
无深绿木霉T11或代表性制剂的研究。一项含两种其它木霉属物种的制剂研究在最低测试剂量下报告繁殖不良效应，基于该制剂的说明性风险评估显示低安全边际，但读通相关性不确定。文献检索未发现其它致病性或感染性指示。由于缺乏菌株特异性数据、读通信息相关性有限和安全边际低，评估无法最终定论，田间和非永久性结构用途无法得出低风险结论。永久性结构中可得出低风险结论。
6.5 土壤生物
无土壤大型生物研究，但深绿木霉（Trichoderma asperellum）ICC012的蚯蚓研究及已发表木霉属蚯蚓研究被认为相关，未报告不良效应，无感染性或致病性迹象。次级代谢物毒性数据缺乏，风险评估无法最终定论，存在数据缺口。永久性结构中可得出低风险结论。土壤微生物无研究，但其它木霉属物种数据显示有限、短暂或无效应，信息足以最终定论，所有用途均可得出低风险结论。关于植物致病性，文献报道木霉属菌株对玉米具有致病性，但植物病原体通常具有寄主和菌株特异性，现有数据无法判定深绿木霉T11是否对陆生植物具有致病效应。
7. 风险管理者需考虑的特殊条件
建议在缺乏定量风险评估的情况下，考虑为操作者和工人使用个人防护装备（personal protective equipment，PPE）和呼吸防护装备（respiratory protective equipment，RPE）以减少暴露，并考虑微生物潜在致敏性引起不良效应的风险。
8. 关注问题及相关数据缺口
8.1 无法最终定论的问题
共识别四项无法最终定论的问题：第一，潜在关注次级代谢物（包括具有潜在遗传毒性和致癌特性的大黄素及具有潜在遗传毒性特性的pachybasin）的非膳食风险评估无法定论，缺乏代谢物产生数据及毒理学性质证据；第二，膳食消费者风险评估无法最终定论，缺乏代表性用途条件下可食用农产品上大黄素和pachybasin的充分定性和定量信息，以及可存活细胞原位产生这些代谢物的实验证据；第三，缺乏次级代谢物产生、环境中水平及潜在毒性的满意信息，导致陆生和水生非靶标生物风险评估无法定论；第四，缺乏评估蜜蜂以外非靶标节肢动物潜在感染性和致病性的数据。
8.2 关键关注领域
未识别关键关注领域。
