《Food Science & Nutrition》：XuanBi Mitigates Rheumatoid Arthritis via Regulation of ECM-Receptor Interactions and IL-17 Signaling: Insights From Integrated Proteomic and Pharmacological Analyses
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植物来源多酚具有广泛抗炎活性，可能对慢性炎症性疾病有益。玄碧方（XuanBi）是一种含可口服吸收多酚类成分的中药复方，用于治疗类风湿关节炎（RA）。该研究考察其可吸收成分及与滑膜炎症性增生相关的潜在机制。研究人员在胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠及类风湿关节炎滑
植物来源多酚具有广泛抗炎活性，可能对慢性炎症性疾病有益。玄碧方（XuanBi）是一种含可口服吸收多酚类成分的中药复方，用于治疗类风湿关节炎（RA）。该研究考察其可吸收成分及与滑膜炎症性增生相关的潜在机制。研究人员在胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠及类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（RASFs）中评价玄碧方。采用高效液相色谱-四极杆-Orbitrap质谱联用（HPLC-Q-Orbitrap-MS）表征汤剂及大鼠血清中的成分。将预测靶点与滑膜差异表达蛋白（DEPs）取交集，随后进行网络药理学、基因本体（GO）、京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析及实验验证。鉴定出26种可吸收成分，包括儿茶素、槲皮素、黄芩素和汉黄芩素，并确定14个与RA滑膜病理相关的候选蛋白。富集分析涉及细胞外基质（ECM）-受体相互作用、黏着斑及白细胞介素-17（IL-17）信号通路。中、高剂量玄碧方减轻CIA大鼠关节肿胀、滑膜增生和炎症浸润。在RASFs中，玄碧方抑制增殖、迁移和侵袭，并下调纤连蛋白1（FN1）和小窝蛋白1（CAV1），降低SRC、黏着斑激酶（FAK）和FYN磷酸化，减少整合素α2b（ITGA2B）+/整合素β1（ITGB1）+细胞，降低白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、基质金属蛋白酶3（MMP3）和基质金属蛋白酶9（MMP9）。总体而言，玄碧方在实验性RA中发挥抗炎及抗滑膜增生作用，并伴随上述通路相关蛋白改变，支持这些通路可能参与其中，值得进一步机制和临床研究。
类风湿关节炎（RA）滑膜组织炎症性增生是重要病理特征，可触发多种促炎介质产生，加重全身炎症及关节疼痛、肿胀；滑膜蛋白表达差异是RA发病中的重要事件，但其调控过程尚不清楚。玄碧方（XuanBi）临床用于缓解RA关节红、肿、热、痛，既往研究提示其可降低TNF-α、IL-6、IL-17及基质金属蛋白酶，但探索其RA治疗机制的研究仍少，尤其缺乏以滑膜组织和相关细胞类型为基础的研究；网络药理学预测的IL-17等通路仍需动物和细胞模型实验验证。Hao Zhu、Zhenfeng Pan等基于前期相对和绝对定量同位素标记（iTRAQ）滑膜蛋白质组研究获得的154个CIA相关DEPs，整合生物信息学、网络药理学和实验验证，围绕RA滑膜炎症性增生，考察玄碧方可吸收成分及潜在分子作用，为临床前评价提供证据。研究人员在CIA大鼠和RASFs中评价玄碧方，鉴定26种可吸收成分，获得14个与RA滑膜病理相关的候选蛋白，富集到ECM-受体相互作用、黏着斑和IL-17信号通路；中、高剂量减轻关节肿胀、滑膜增生和炎症浸润；在RASFs中抑制增殖、迁移和侵袭，下调FN1、CAV1，降低SRC、FAK、FYN磷酸化，减少ITGA2B
+/ITGB1
+细胞及IL-1β、IL-6、TNF-α、MMP3、MMP9；经IL-17A刺激后降低p-Act1、p-P38、p-P65。结论为玄碧方在实验性RA中具抗炎和抗滑膜增生作用，伴随上述通路相关蛋白改变，支持这些通路潜在参与，值得进一步机制和临床研究；其意义在于为玄碧方药理特性和治疗潜力提供实验依据，支持经典方剂的循证研究。
关键技术方法概括（不超过250字）：该研究采用6–7周龄Sprague–Dawley大鼠36只（18雄18女，体重200±30 g，购自苏州大学实验动物中心）；6只为正常对照，30只建立CIA模型后分为CIA模型、玄碧方低/中/高剂量和甲泼尼龙组，每组6只；玄碧方剂量4.65、9.3、18.6 g/kg/d灌胃3周，甲泼尼龙2 mg/kg隔日腹腔注射。关键技术包括HPLC-Q-Orbitrap-MS鉴定汤剂及给药后血清成分；中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）预测靶点并与前期CIA滑膜DEPs交集，行GO/KEGG富集；CIA大鼠形态学、关节炎指数、苏木精-伊红（H&E）染色和免疫组织化学（IHC）；分离正常滑膜成纤维细胞（SF）与CIA RASFs，经波形蛋白免疫荧光鉴定后，用5-乙炔基-2′-脱氧尿苷（EdU）染色、Transwell、划痕、流式细胞术（FCM）、蛋白质印迹（WB）和酶联免疫吸附试验（ELISA）验证。
3.1 玄碧方抑制CIA大鼠红肿：通过第28天形态观察和关节炎指数动态评分，模型鼠踝关节肿胀、强直、充血；中、高剂量改善皮肤红和踝肿胀，低剂量无显著差异；甲泼尼龙（MP）阳性对照显著减轻。3.2 玄碧方抑制CIA大鼠滑膜炎症性增生：H&E显示模型滑膜明显增生和炎症细胞浸润；中、高剂量减轻滑膜增殖和浸润，低剂量类似模型，MP作用最明显。3.3 玄碧方可吸收成分鉴定：HPLC-Q-Orbitrap-MS分析汤剂和血清，以高质量精度（<3 ppm）并与TCMSP比对，确认26种可吸收成分，包括5-羟甲基-2-糠醛、(-)-儿茶素、(-)-千金藤啶碱、槲皮素、木犀草素、黄芩素、汉黄芩素等。3.4 玄碧方对CIA滑膜病理变化的潜在靶点和通路：将26种可吸收成分对应的182个预测靶点与前期154个滑膜DEPs交集，获得14个共同靶点；GO提示细胞增殖、炎症反应、分化及ECM/细胞膜、黏附分子结合等；KEGG富集ECM-受体相互作用、黏着斑、IL-17信号通路；构建示意网络关联CAV1-FYN、FN1-ITGA2B/ITGB1-SRC/FAK及IL-17-Act1-P38-P65-MMPs/炎症因子。3.5 玄碧方抑制CIA滑膜FN1、CAV1、MMP3、MMP9表达：IHC显示模型滑膜这些蛋白表达升高，玄碧方随剂量降低，低剂量作用弱，中剂量较明显，高剂量最明显，MP最强。3.6 SFs和RASFs鉴定：波形蛋白免疫荧光显示绝大多数细胞阳性，纯度>90%，确认分离细胞为滑膜成纤维细胞。3.7 玄碧方抑制RASFs增殖：EdU和免疫荧光显示中、高剂量显著降低RASFs增殖率；RGDS或Daidzein降低增殖但弱于玄碧方，二者联合更显著；提示与FN1/CAV1相关通路变化有关。3.8 玄碧方抑制RASFs迁移和侵袭：Transwell迁移/侵袭和划痕实验显示中、高剂量显著抑制迁移、侵袭和伤口闭合；RGDS或Daidzein降低但不及玄碧方，联合更强；提示与FN1和CAV1调控有关。3.9 玄碧方抑制RASFs ITGA2B/ITGB1表达：FCM显示模型组ITGA2B
+/ITGB1
+比例升高、双阴性降低；中、高剂量降低双阳性细胞，效果类似RGDS；伴随FN1变化，符合FN1相关ECM-受体相互作用通路潜在参与。3.10 玄碧方与RASFs ECM-受体相互作用、黏着斑和IL-17信号相关蛋白及炎症介质变化相关：WB显示中、高剂量降低FN1、p-SRC、p-FAK、CAV1、p-FYN；RGDS或Daidzein分别降低下游靶点活性；IL-17A刺激模型中，中、高剂量降低p-Act1、p-P38、p-P65及MMP3、MMP9、IL-1β、IL-6、TNF-α；支持通路潜在关联但非直接因果。
讨论部分总结：识别实际入血成分较仅依据数据库筛选更具生物学相关性；26种可吸收成分含多酚，槲皮素、黄芩素已有RA相关证据，但血清定性检测不能直接反映绝对生物利用度、暴露水平、半衰期、组织分布或因果药理贡献，且研究未设多酚富集、去除或单体干预组，不能将效应特异归因于多酚。FN1和CAV1分别参与细胞-ECM黏附和胞内信号，FN1可经整合素触发SRC、FAK磷酸化，CAV1可促进FYN磷酸化；玄碧方降低RASFs增殖、迁移、侵袭，并伴随FN1、CAV1及SRC、FAK、FYN磷酸化改变，支持相关通路潜在参与。IL-17信号中Act1、P38、P65参与炎症反应，玄碧方可降低IL-17A刺激后p-Act1、p-P38、p-P65及MMP3、MMP9、IL-1β、IL-6、TNF-α，但未行IL-17通路阻断或救援实验，不能确立直接因果。整合网络药理学、生物信息学和蛋白质组学有助于识别候选蛋白和通路。局限包括CIA模型不能完全复现人RA滑膜病理，需人滑膜组织或患者原代细胞验证；混合性别未行性别分层；主要验证RASFs，未充分研究免疫细胞及成纤维-免疫细胞互作；复方成分复杂，未区分主要活性成分及协同作用；TCMSP预测可能受数据库覆盖和偏倚影响；需进一步因果实验和临床样本验证。研究结论（译）：总体而言，玄碧方在实验性RA中发挥抗炎及抗滑膜增生作用，并伴随上述通路相关蛋白改变，支持这些通路可能参与其中，值得进一步开展机制和临床研究。
