多肽稳定O/W乳剂递送大麻二酚（CBD）改善表皮生物利用度与抗炎活性

《Cosmetics》：Improved Epidermal Bioavailability and Anti-Inflammatory Activity of Cannabidiol Encapsulated in Polypeptide-Stabilised Emulsions

　　

大麻二酚（CBD）是皮肤应用中有前景的生物活性化合物；然而，其局部递送受限于水溶性差、高亲脂性和化学不稳定性。本研究开发了一种可实现CBD封装的多肽稳定水包油乳剂（ENC-CBD），作为创新递送系统以增强CBD的表皮生物利用度和生物活性。稳定的216 nm ENC-CBD含175 mg/mL CBD，在18个月内表现出长期物理化学稳定性，CBD含量、黏度、密度和粒径维持在预设指标内。在人角质形成细胞（HaCaT）和真皮成纤维细胞（HDF）中的细胞相容性研究显示浓度依赖性效应，在1.75 mg/mL时具有优异生物相容性。在紫外线B（UVB）照射细胞模型中，ENC-CBD使白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-8（IL-8）产生分别显著降低93%和73%。此外，在重建人表皮组织中，ENC-CBD无刺激性，并较非封装CBD实现显著更高的表皮CBD蓄积，在6 h和24 h后分别达到约11倍和7倍更高水平。将ENC-CBD应用于皮肤模型可显著减弱以IL-6、IL-8、白细胞介素-1B（IL-1B）和肿瘤坏死因子（TNF）基因过表达为特征的UV诱导炎症，同时该递送系统似乎在一定程度上具有抗炎特性。总体而言，多肽基乳剂载体增强了CBD表皮递送及其抗炎活性，凸显其作为皮肤炎症局部用成分的潜力。

大麻二酚（CBD，Cannabis sativa L.的主要非精神活性植物大麻素）在皮肤抗炎等方面具潜力，但其局部递送受水溶性差、高亲脂性（logP 5.79–6.33）和化学不稳定限制；角质层（SC）屏障使亲脂性CBD易滞留于SC，油基载体也易形成屏障，限制向活性表皮渗透。已有脂质体、脂质纳米粒（LNP）等载CBD，但载量常低（约1–10 mg/mL）；壳聚糖稳定乳剂虽粒径小，CBD仅1 mg/mL；Sharkawy et al.虽提高载量，但液滴>10 μm，主要滞留SC。因此需生物友好乳化剂、小液滴且高载量体系。两亲性多肽可自组装、可生物降解，但尚未作为乳化剂。研究人员据此制备以PSar₁₁₄-b-P(Glu₂₉-co-Val₇)稳定的水包油（O/W）乳剂封装CBD（ENC-CBD），并比较油溶CBD（O-CBD），评估其稳定性、细胞相容性、UVB炎症模型和重建人表皮中的递送与抗炎效果；意义在于提供高载量、稳定、安全的局部递送平台。

关键技术方法：以共聚多肽为稳定剂，将含CBD油相与甘油连续相预乳化后超声制备ENC-CBD；用动态光散射（DLS）、激光衍射、ζ电位、高效液相色谱（HPLC）及黏度/密度监测稳定性与载量；细胞来源为HaCaT（Cytion）和HDF（ATCC），重建人表皮为EpiDerm?（MatTek）；采用细胞活力检测、酶联免疫吸附试验（ELISA）测IL-6/IL-8、共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）观察渗透、HPLC测表皮CBD、UVB照射后定量实时PCR（qPCR）测炎症基因，并按OECD 439进行刺激试验。

3.1 多肽稳定乳剂中CBD的稳定性：通过18个月肉眼、DLS、激光衍射、ζ电位、HPLC和黏度/密度监测，ENC-CBD无分层，粒径由约216 nm增至286 nm，多分散指数（PDI）0.19–0.22，CBD 174.6–175.2 mg/mL，包封率>99%，黏度4070–4200 mPa·s、密度1.144 g/mL、ζ电位?18至?20 mV，结论为长期物理化学稳定。
3.2 细胞相容性：通过HaCaT和HDF 24/48 h活力试验，ENC-CBD呈浓度依赖；24 h时1.75和8.74 μg/mL均>70%，43.7 μg/mL低于70%；48 h仅1.75 μg/mL对两细胞兼容，8.74 μg/mL仅HDF兼容；ENC-Ctrl和DMSO无细胞毒，后续选1.75 μg/mL。
3.3 细胞模型抗UVB炎症：50 mJ/cm² UVB后活力仍>70%；UVB升高IL-6/IL-8；HaCaT中ENC-CBD使IL-6、IL-8分别降93%、73%，DMSO-CBD仅IL-8降38%；HDF中ENC-CBD降IL-6 49%，IL-8无显著变化；递送系统本身不影响两因子，结论为ENC-CBD增强CBD抗炎。
3.4 重建人表皮刺激性、生物利用度与炎症标志物：OECD 439显示10 mg/mL CBD无刺激；CLSM双标记显示封装Nile Red可达颗粒层，非封装主要滞留SC；HPLC显示ENC-CBD自2 h起表皮CBD高于O-CBD，6 h约11倍，24 h O-CBD 4.77 μg、ENC-CBD 33.63 μg（434.6 μg/cm²），约7倍（仅双重复，未统计）；200 mJ/cm² UVB后qPCR显示ENC-CBD使IL-6、IL-8、IL-1B、TNF mRNA分别降63%、50%、57%、55%，IL-1B/TNF恢复至非照射水平；O-CBD仅IL-6/IL-8显著降46%/38%；ENC-Ctrl亦降IL-6、IL-8、IL-1B，IL-8降70%较ENC-CBD更显著。结论为ENC-CBD增强表皮递送和抗炎，载体自身有一定抗炎。

讨论总结：原文讨论认为18个月稳定主要来自聚肌氨酸嵌段的空间稳定；高载量优于脂质体、纳米囊等；可避免化学促渗剂相关刺激；细胞毒可归因CBD，ENC-Ctrl安全并可能增强细胞摄取；2D抗炎增强原文认为可能与细胞膜相互作用和胞内递送改善有关；CLSM提示乳剂过SC后油相释放至深层而多肽多留于上层；与LNP及Franz扩散池研究比较显示表皮蓄积优势；ENC-Ctrl的抗炎与界面多肽、聚谷氨酸有关；仍需志愿者试验验证。

结论翻译：总之，研究人员成功开发多肽基O/W乳剂作为高载量平台封装175 mg/mL疏水CBD；18个月内粒径、分布、黏度、密度和CBD稳定性优良；选择细胞相容浓度后，UVB 2D模型中ENC-CBD较DMSO溶解游离CBD更有效降低关键促炎细胞因子，表明平台促进细胞內化；ENC-CBD无皮肤刺激，在重建人表皮中安全；CLSM证实递送系统使分散相通过SC达深层，非封装油主要留于第一层；增强表皮递送使生物可利用CBD更高，并在重建人表皮中更强减弱UVB炎症和细胞因子基因表达；递送平台自身也具抗炎特性，推测与共聚多肽中聚谷氨酸有关；结果支持ENC-CBD作为稳定有效CBD制剂及共聚多肽稳定乳剂作为高效且略具生物活性的局部递送系统。