骨髓CD14+CD206+ M2样单核-巨噬细胞作为高危神经母细胞瘤骨髓微小残留病的潜在补充生物标志物

《Frontiers in Oncology》：Bone marrow CD14+CD206+ M2-like monocyte-macrophages as a potential complementary biomarker for bone marrow MRD in high-risk neuroblastoma

　　

摘要专业翻译 神经母细胞瘤（Neuroblastoma，NB）是一种高度侵袭性的儿童恶性肿瘤，常伴随显著的骨髓转移与复发风险。微小残留病（Minimal Residual Disease，MRD）的持续存在仍是治疗成功的主要障碍。高危神经母细胞瘤的骨髓微小残留病评估主要依赖于对残留肿瘤细胞的直接检测，然而伴随的免疫微环境改变尚未被充分表征。本研究采用GD2导向的免疫细胞化学检测，辅以基于GD2的流式细胞术，对143例高危神经母细胞瘤患者的骨髓疾病状态进行参考分类。研究人员评估了一系列外周血生物标志物，发现神经元特异性烯醇化酶（NSE）、C反应蛋白（CRP）、纤维蛋白原（Fibrinogen）和D-二聚体（D-dimer）在MRD阳性组与MRD阴性组之间存在显著差异；然而，这些生物标志物的诊断效能有限，曲线下面积（Area Under the Curve，AUC）均低于0.7。重要的是，骨髓CD14+CD206+ M2样单核-巨噬细胞对GD2定义的骨髓MRD状态表现出判别能力（AUC = 0.794），最佳阈值为1.71×104/mL。此外，CD14+CD206+巨噬细胞的比例与骨髓样本中GD2阳性率呈正相关。上述发现提示，骨髓CD14+CD206+ M2样单核-巨噬细胞可能作为与高危NB骨髓MRD状态相关的辅助免疫生物标志物。该发现尚需在更大规模的独立队列中予以验证。

论文解读文章

一、研究背景与问题提出

神经母细胞瘤（Neuroblastoma，NB）起源于交感神经节或双侧肾上腺，高危组患儿的长期生存率仍不足50%。骨髓转移与复发是高危NB治疗失败的主要原因，其根源在于骨髓中残留的微小病灶。骨髓微小残留病（Minimal Residual Disease，MRD）的持续存在是阻碍治疗成功的关键障碍。目前临床常用的骨髓MRD诊断技术为骨髓涂片分类法，存在灵敏度低、特异性差、缺乏量化指标且易受人为因素影响等问题，导致准确诊断困难。外周血神经元特异性烯醇化酶（NSE）检测在复发诊断中特异性不佳，无法对MRD复发进行有效预警。现有临床常用肿瘤标志物如乳酸脱氢酶（LDH）、NSE和铁蛋白（Ferritin）虽具一定预后价值，但均难以准确判别骨髓低水平肿瘤浸润。近年来，肿瘤微环境中的免疫抑制性细胞因子可调控巨噬细胞表型，M2样巨噬细胞与肿瘤恶性进展密切相关，但骨髓M2样巨噬细胞是否参与高危NB骨髓MRD尚未见报道。因此，亟需探索能够反映骨髓免疫微环境改变的补充性生物标志物，以提高MRD诊断的准确性。

二、研究内容与主要结论

研究人员基于GD2靶点检测建立了高危NB骨髓MRD的参考分类体系，并系统评估了外周血生物标志物及骨髓免疫细胞表型与MRD状态的关系。研究共纳入143例初诊高危NB患儿，依据GD2导向的免疫细胞化学染色及GD2流式细胞术将患者分为MRD阳性组（54例）与MRD阴性组（89例）。结果显示，外周血NSE、CRP、纤维蛋白原和D-二聚体在两组间存在显著差异，但各单项标志物的AUC均低于0.7，诊断价值有限；联合模型虽将AUC提升至0.759，仍属中等判别水平。更重要的是，骨髓CD14⁺CD206⁺ M2样单核-巨噬细胞在GD2阳性骨髓受累患者中显著升高，其绝对计数对骨髓MRD状态具有中等判别能力（AUC = 0.794），且与GD2阳性肿瘤细胞比例呈强正相关（R2 = 0.95）。上述发现提示，骨髓CD14⁺CD206⁺ M2样单核-巨噬细胞可作为与高危NB骨髓MRD状态相关的辅助免疫生物标志物，为直接肿瘤细胞检测提供补充信息，但尚需更大规模独立队列验证。

三、主要技术方法

本研究为单中心回顾性研究，样本来源于天津医科大学肿瘤医院儿科肿瘤科2020年1月至2023年3月收治的143例初诊高危NB患儿，均于抗肿瘤治疗前采集骨髓标本。关键技术方法包括：采用GD2导向免疫细胞化学染色联合GD2流式细胞术建立骨髓MRD参考分类；使用全自动血液分析仪、凝血分析仪及生化免疫分析仪检测外周血常规、凝血指标及肿瘤标志物；采用密度梯度离心法获取骨髓有核细胞，通过流式细胞术检测CD14⁺CD206⁺ M2样及CD14⁺CD86⁺ M1相关单核-巨噬细胞亚群；运用受试者工作特征（ROC）曲线评估各标志物的判别效能，并构建多变量逻辑回归模型评价联合诊断价值。

四、研究结果

（一）骨髓MRD阳性NB患者的外周血临床病理特征

对143例NB患者外周血数据进行分析，MRD阳性组白细胞计数（5.17±2.70×10⁹/L）和单核细胞计数（0.36±0.26×10⁹/L）显著低于MRD阴性组，而CRP（29.36±36.99 mg/L）、纤维蛋白原（3.95±1.61 g/L）、D-二聚体（3411.60±3087.57 μg/L）、NSE（263.30±417.65 μg/mL）、LDH（645.93±1179.25 U/L）及铁蛋白（687.34±867.73 μg/L）水平均显著升高，差异具有统计学意义。

（二）血清学标志物对NB骨髓MRD阳性的诊断效能

ROC曲线分析显示，NSE、血红蛋白、单核细胞计数、CRP、纤维蛋白原和D-二聚体均具有统计学意义的诊断潜力，但AUC介于0.615至0.677之间，均低于0.7，单项标志物难以满足临床诊断需求。将上述六项指标纳入多变量逻辑回归模型后，联合模型AUC提升至0.759（95% CI 0.678–0.840），最佳预测概率截断值为0.365时，灵敏度为72.2%，特异度为69.7%，判别效能仍属中等水平。

（三）GD2阳性骨髓受累与CD14⁺单核-巨噬细胞极化表型的关联

对20例患者（GD2阳性10例、GD2阴性10例）的骨髓标本进行流式细胞术分析，两组间CD14⁺单核-巨噬细胞绝对计数无显著差异。然而，GD2阳性组中CD14⁺CD86⁺ M1相关及CD14⁺CD206⁺ M2样单核-巨噬细胞的百分比和绝对数量均显著高于GD2阴性组（P < 0.001），其中CD14⁺CD206⁺亚群的升高更为显著。临床相关性分析显示，骨髓GD2阳性肿瘤细胞比例与CD14⁺CD206⁺单核-巨噬细胞百分比呈强正相关（Y = 0.3475X ? 0.0203，R2 = 0.95），与CD14⁺CD86⁺亚群的相关性较弱（R2 = 0.42）。

（四）CD14⁺CD206⁺单核-巨噬细胞对骨髓MRD状态的判别性能

对30例具有完整流式检测及参考MRD分类的高危NB患儿进行ROC分析，CD14⁺CD206⁺单核-巨噬细胞绝对计数判别骨髓MRD状态的AUC为0.794（P = 0.0065），最佳截断值为1.71×10⁴/mL，显示中等判别能力，提示该细胞亚群具有作为骨髓MRD辅助免疫生物标志物的潜力。

五、讨论与结论总结

讨论部分指出，CD14⁺CD206⁺细胞的解释需谨慎考虑巨噬细胞生物学特性，巨噬细胞活化现被视为表型连续谱而非严格的M1/M2二分法，CD206仅作为M2相关标志物而非均一M2群体的确定性标志。研究结果与神经母细胞瘤骨髓受累伴随局部免疫微环境重塑的概念一致，单细胞转录组研究已证实转移微环境中骨髓髓系细胞与肿瘤细胞存在广泛相互作用。外周血生物标志物与骨髓免疫细胞表型反映疾病的不同生物学维度，联合检测可能提供互补信息。研究存在若干局限性：流式极化分析仅纳入20例、ROC分析仅30例，样本量有限；MYCN扩增、11q及1p染色体异常等关键风险因素信息不完整，无法进行可靠的多变量校正；GD2检测方法未独立验证分析性能，且为单中心研究，缺乏外部验证。研究结论认为，骨髓CD14⁺CD206⁺ M2样单核-巨噬细胞与GD2阳性肿瘤细胞受累相关，对高危NB骨髓MRD具有中等判别能力，可作为直接GD2肿瘤细胞检测的补充性免疫微环境标志物，而非替代方案。鉴于数据为探索性和观察性研究，尚不能确立因果关系、独立预测价值或明确临床效用，需更大规模的前瞻性独立验证研究加以确认。