《Scientific Reports》：A preliminary study on wound healing and scar reduction using platelet-rich fibrin matrix
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伤口愈合是对组织损伤的自然反应。在此过程中，多种因素共同作用，导致机体做出妥协以确保愈合，进而形成瘢痕。多年来，已开发出多种辅助伤口愈合的方法。富血小板血浆被认为具有多种重要能力，例如作为生长因子和凝血因子的来源，并具备趋化和促有丝分裂特性，有助于伤口闭合和愈
伤口愈合是对组织损伤的自然反应。在此过程中，多种因素共同作用，导致机体做出妥协以确保愈合，进而形成瘢痕。多年来，已开发出多种辅助伤口愈合的方法。富血小板血浆被认为具有多种重要能力，例如作为生长因子和凝血因子的来源，并具备趋化和促有丝分裂特性，有助于伤口闭合和愈合，同时最大限度地减少瘢痕形成。本项实验性动物研究旨在通过使用富血小板纤维蛋白基质（PRFM）（一种富血小板血浆的衍生物）来提高伤口愈合速率和质量，特别关注再上皮化和瘢痕组织的减少。经PRFM处理的伤口主要通过收缩实现更快的闭合。这些伤口还表现出更优的组织学再上皮化和瘢痕消退。实验组在第一周记录到伤口直径缩小73.18%，并在第14天达到100%闭合。对照组在第一周末伤口直径缩小65.32%，第二周末缩小92.09%，并在第18天达到100%闭合。伤口闭合伴随再上皮化。实验组的瘢痕消退率更高，与对照组相比差异具有统计学显著性。这可归因于血小板提供的丰富生长因子及其他必要化学物质。基于实验组的结果，可以推测PRFM可能对伤口治疗具有潜在益处。本研究的意义在于为伤口愈合提供了初步基线数据，这将有助于临床环境中伤口的治疗与管理。
研究背景与问题
伤口愈合是机体对组织损伤的复杂生物学反应，涉及止血、炎症、增殖和组织重塑等多个重叠机制。然而，作为一种自然过程，伤口愈合不可避免地伴随瘢痕形成。瘢痕是非功能性的纤维化组织，虽然能快速覆盖创面以防止感染，但其在强度、结构、功能和美观方面均劣于正常皮肤。长期以来，研究者们探索了多种辅助伤口愈合的方法，包括局部应用咪喹莫特、丝裂霉素C以及洋葱提取物、绿茶、芦荟、维生素D和E等植物提取物，此外还有乳清蛋白、蜂毒和蜂胶等天然制剂。另一类重要策略是利用内源性因子，其中血小板是核心成分。富血小板血浆（PRP）已被证实含有至少七种局部作用的生长因子，如血管内皮生长因子（VEGF）、表皮生长因子（EGF）、转化生长因子-β（TGF-β）和血小板衍生生长因子（PDGF），对于缺乏细胞因子和生长因子的慢性伤口（如糖尿病溃疡）尤为有益。尽管PRP在临床上显示出诸多益处，但其制备方法、技术细节等问题仍存争议。富血小板纤维蛋白基质（PRFM）作为新一代血小板浓缩物，无需牛凝血酶等生化试剂即可简便制备，其纤维蛋白缓慢聚合形成类似天然纤维蛋白的结构，能更好地保留血小板并确保高血小板计数，理论上更适合伤口愈合。然而，关于PRFM在急性伤口愈合及瘢痕减少方面的具体效果，尚需系统的实验数据支持。因此，研究人员开展此项动物实验研究，旨在评估PRFM相较于传统局部消毒敷料（Drez?）在加速伤口闭合、促进再上皮化及减少瘢痕形成方面的潜力，为后续临床转化提供初步基线数据。
研究方法与技术
研究人员采用改良的Reksodiputro等人提出的方法制备PRFM。从每只新西兰兔的中央耳动脉或边缘耳静脉采集20 mL血液至枸橼酸葡萄糖试管中，随后进行两步离心：首先以3000 RPM（1207 × g）离心6分钟分离血浆，再将上层血浆转移至含氯化钙（0.1 M）的试管中，以5500 RPM（4058 × g）离心25分钟，最终在管底形成圆形PRFM膜。研究中，在10只成熟新西兰兔背部各创建两排共10个直径为15 mm的全层圆形伤口，一排使用PRFM敷料作为实验组，另一排使用Drez溶液和软膏作为对照组。所有伤口均以凡士林封闭保湿，并以封闭性敷料覆盖固定。研究人员在术后第7、14、21、28、35天定期采集组织样本，经甲醛固定、乙醇梯度脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、切片及苏木精-伊红染色后，使用光学显微镜进行组织病理学评估。伤口愈合通过计算机化平面测量法（Adobe Photoshop 23.0.0）量化伤口直径变化，计算愈合率、再上皮化率和收缩率。数据分析采用IBM SPSS Version 26，使用皮尔逊卡方检验比较定性变量间的关联，以P值≤0.01为统计学显著水平。
研究结果
伤口愈合进展
在创面建立后的前7天内，实验组和对照组均观察到非常快速的收缩速率。从第0天到第8天，伤口直径减少了60%-70%。第11天时，实验组伤口直径缩小77.24±0.91%，对照组缩小69.28±1.16%。第12天时，实验组缩小96.92±0.22%，对照组缩小87.31±0.91%。到第14天，实验组在所有病例中均实现100%闭合，而对照组直至第18天才达到完全闭合。此后两组均无统计学显著差异。
富血小板纤维蛋白基质的疗效
实验组在第14天即实现完全闭合，而对照组在第18天完成。在闭合时间方面，实验组在第8天记录到平均73.18±1.40%的闭合率，对照组则为65.32±0.59%。到第14天，实验组达100%闭合，对照组平均闭合率为92.09±0.62%。
第1周至第5周的组织病理学变化
第7天时，两组均观察到再上皮化，实验组的上皮层较对照组更为明显，两组均呈现急性炎症。第14天，对照组上皮层变得显著并增厚，开始出现慢性炎症；实验组则显示肉芽组织中结缔组织增生，上皮层亦增厚。第21天，实验组慢性炎症开始消退，上皮层变薄并趋于平整，出现毛囊等皮肤附属器结构；对照组仍表现为较厚的上皮层和较不明显的结缔组织增生。第28天，实验组皮肤附属器数量大幅增加，对照组也开始出现。第35天，实验组几乎完全消退慢性炎症，皮肤附属器接近正常化；对照组增生层也有所减少，但程度不及实验组。
再上皮化
第7天，实验组再上皮化率高于对照组，差异具有统计学显著性（P=0.006）。第14天趋势延续，实验组仍显著优于对照组（P=0.013）。第21至35天，两组间差异不再具有统计学显著性（P=0.133和0.035），因为此时整个创面已在第2至3周间被完全覆盖。
瘢痕消退
第7天，实验组瘢痕消退率显著高于对照组（P=0.000）。第14天同样如此（P=0.005）。第21天，60%的实验组伤口显示瘢痕消退迹象，对照组为50%，差异仍具统计学显著性（P=0.008）。第28至35天，两组间差异不再显著（P=0.020和0.133），因为所有伤口均已显现恢复迹象，仅实验组几乎无结缔组织增生且拥有更多毛囊和真皮附属器。
讨论与结论
在讨论部分，研究人员指出，前7天观察到的快速收缩与文献报道一致，收缩通常在肉芽组织形成后3-5天开始。实验组在第14天即达100%闭合，表明PRFM有效提高了收缩速率。研究表明，在第14天前完成再上皮化可显著降低持续性和肥厚性瘢痕形成的风险。相比之下，对照组在第18天闭合，仍在正常伤口愈合范围内。与已有研究相比，实验组的愈合速度处于较高水平，而对照组表现符合正常趋势。PRFM处理组主要通过增强收缩实现更快闭合，其纤维蛋白支架作为临时细胞外基质框架，稳定创面床并传递肌成纤维细胞的收缩力，同时边缘上皮细胞沿此临时基质迁移，贡献部分再上皮化。因此，收缩和上皮再生两个过程并行发生，PRFM主要放大收缩阶段，同时仍支持表面上皮推进。在组织学层面，实验组展示出更优的愈合特征，这可能归因于PRFM可持续释放生长因子，甚至可达第7天。再上皮化恢复止血平衡，缩短炎症持续时间，从而确保最小化瘢痕形成。实验组在第21天即观察到慢性炎症消退和皮肤附属器出现，而对照组仅显示消退迹象。到第35天，实验组几乎完全恢复，而对照组虽有改善但仍不如实验组。
研究结论部分翻译如下：
经PRFM处理的伤口主要通过收缩实现更快闭合，同时还表现出更优的组织学再上皮化和瘢痕消退。实验组在第一周记录到伤口直径缩小73.18%，并在第14天达到100%闭合。对照组在第一周末伤口直径缩小65.32%，第二周末缩小92.09%，并在第18天达到100%闭合。伤口闭合伴随再上皮化。实验组的瘢痕消退率更高，与对照组相比差异具有统计学显著性。这可归因于血小板提供的丰富生长因子及其他必要化学物质。基于实验组的结果，可以推测PRFM可能对伤口治疗具有潜在益处。本研究的意义在于为伤口愈合提供了初步基线数据，这将有助于临床环境中伤口的治疗与管理。然而，鉴于样本量较小且缺乏分子数据，这些结果应被视为初步实验证据，正如标题所提示的那样。从转化角度看，PRFM提供了一种生物相容性好且成本效益高的伤口管理替代方案，尤其在常规生长因子疗法昂贵或不可用的资源有限环境中更具价值。未来工作应探索PRFM诱导胶原组织化的分子基础，并评估其在慢性或糖尿病伤口模型中的疗效。
