《Journal of Functional Biomaterials》：Effect of Sol–Gel-Derived Bioactive Glass-Containing Dentifrices on Dentin Surface Microhardness and Mineral Deposition
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肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma, HCC）是全球癌症相关死亡的主要原因之一，尽管免疫检查点抑制剂（Immune Checkpoint Inhibitors, ICIs）已改善部分患者预后，但总体响应率仍受限于肿瘤微环境（Tumor
肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma, HCC）是全球癌症相关死亡的主要原因之一，尽管免疫检查点抑制剂（Immune Checkpoint Inhibitors, ICIs）已改善部分患者预后，但总体响应率仍受限于肿瘤微环境（Tumor Microenvironment, TME）的高度异质性。研究人员通过整合单细胞RNA测序（Single-cell RNA Sequencing, scRNA-seq）与批量转录组数据，系统刻画了HCC肿瘤微环境中的免疫细胞亚群组成，并鉴定出在肿瘤相关巨噬细胞（Tumor-associated Macrophages, TAMs）上特异性高表达的免疫检查点分子白细胞免疫球蛋白样受体B2（Leukocyte Immunoglobulin-like Receptor B2, LILRB2）。研究发现，LILRB2高表达与HCC患者的不良总生存期（Overall Survival, OS）显著相关，且其表达水平与M2型巨噬细胞极化标志物及T细胞耗竭标志物呈正相关。功能实验表明，阻断LILRB2可逆转巨噬细胞的免疫抑制表型，并恢复CD8+T细胞的抗肿瘤活性。此外，多队列验证显示LILRB2表达可独立预测ICIs治疗响应，低表达患者表现出更高的客观缓解率（Objective Response Rate, ORR）及更长的无进展生存期（Progression-Free Survival, PFS）。该研究揭示了LILRB2作为HCC免疫治疗新靶点的潜在价值，为基于TME分子分型的精准免疫治疗策略提供了理论依据。
研究背景与科学问题
肝细胞癌（HCC）是全球发病率与死亡率均居前列的恶性肿瘤，多数患者确诊时已处于中晚期，系统治疗是主要手段。近年来，以程序性死亡受体1（PD-1）及其配体（PD-L1）抑制剂为代表的免疫检查点阻断疗法显著改善了部分HCC患者的生存结局，但仍有超过半数的患者对ICIs原发耐药或治疗后快速进展。肿瘤微环境（TME）中免疫抑制性细胞亚群的功能状态是决定免疫治疗疗效的关键因素，其中肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）作为TME中丰度最高的髓系免疫细胞，可通过多种机制抑制T细胞抗肿瘤免疫。然而，TAMs表面抑制性受体的表达谱及其在HCC免疫逃逸中的具体作用尚未被系统阐明。因此，精准解析HCC微环境中免疫细胞异质性，并鉴定可干预的免疫抑制靶点，对于优化免疫治疗策略具有重要意义。
研究内容与核心结论
研究人员利用单细胞RNA测序（scRNA-seq）技术对HCC肿瘤组织及癌旁组织的免疫细胞进行了无偏聚类分析，绘制了包含T细胞、自然杀伤（NK）细胞、巨噬细胞、树突状细胞（DC）等主要免疫亚群的转录组图谱。通过差异表达基因分析，研究人员发现白细胞免疫球蛋白样受体B2（LILRB2）在TAMs的一个特定亚群中显著高表达，且该亚群富集M2型极化相关基因（如CD163、MRC1）及免疫抑制细胞因子（如IL10、TGFB1）。进一步结合公共转录组队列（包括TCGA-LIHC及GEO数据集）分析，LILRB2高表达与HCC患者总生存期（OS）缩短显著相关，且在多因素Cox回归模型中独立于肿瘤分期及甲胎蛋白（AFP）水平。相关性分析显示，LILRB2表达水平与CD8+T细胞耗竭标志物（PDCD1、HAVCR2、LAG3）及调节性T细胞（Treg）标志物（FOXP3）呈正相关，提示其可能参与构建免疫抑制微环境。功能实验中，研究人员在体外共培养体系中阻断巨噬细胞表面的LILRB2，观察到巨噬细胞M1型促炎因子（TNF、IL1B）分泌增加，M2型标志物表达下调，同时共培养的CD8+T细胞增殖能力及干扰素γ（IFNG）分泌显著恢复。在免疫治疗预测方面，基于多个接受抗PD-1治疗的HCC患者队列，LILRB2低表达组患者的客观缓解率（ORR）及无进展生存期（PFS）均显著优于高表达组，且LILRB2与已知的T细胞炎症基因表达特征（GEP）联合可提高预测效能。
主要技术方法
研究人员主要采用了以下关键技术：①单细胞RNA测序（scRNA-seq）结合无监督聚类算法解析TME免疫细胞异质性；②批量转录组数据分析（TCGA-LIHC及GEO公共队列）用于生存预后关联及基因共表达网络构建；③多色流式细胞术及免疫荧光染色验证LILRB2在组织中的蛋白表达定位；④体外巨噬细胞-T细胞共培养功能实验用于评估LILRB2阻断对免疫抑制表型的逆转作用；⑤基于多中心免疫治疗队列的响应预测模型构建与验证。样本来源包括研究者所在机构的手术切除HCC组织及配对癌旁组织，以及公开的多中心临床队列数据。
研究结果分述
1. HCC免疫微环境单细胞图谱揭示TAMs异质性
通过scRNA-seq对HCC组织免疫细胞进行分析，研究人员鉴定出多个巨噬细胞亚群，其中LILRB2+TAMs亚群特异性高表达S100A家族及APOE等脂质相关基因，并呈现显著的免疫抑制转录特征。该亚群在肿瘤组织中比例显著高于癌旁组织，且与肿瘤分级正相关。
2. LILRB2高表达与HCC不良预后独立相关
在TCGA-LIHC及多个独立验证队列中，LILRB2 mRNA及蛋白水平在肿瘤组织中均高于正常肝组织。Kaplan-Meier生存分析显示LILRB2高表达组患者OS及无复发生存期（RFS）显著缩短，多因素回归确认其独立预后价值。
3. LILRB2表达与免疫抑制微环境标志物显著共表达
转录组相关性分析表明，LILRB2与M2型巨噬细胞标志物（CD163、MSR1）、T细胞耗竭标志物（PDCD1、CTLA4）及免疫抑制细胞因子（IL10、TGFB1）表达呈显著正相关，提示其参与形成免疫抑制网络。
4. 阻断LILRB2逆转巨噬细胞免疫抑制功能
体外功能实验证实，抗LILRB2抗体处理可下调巨噬细胞M2型标志物并上调M1型促炎因子，同时恢复共培养CD8+T细胞的增殖及IFNG分泌，表明LILRB2是维持TAMs免疫抑制功能的关键分子。
5. LILRB2预测免疫治疗响应
在多个接受抗PD-1治疗的HCC患者队列中，LILRB2低表达组ORR及PFS显著优于高表达组。联合T细胞炎症GEP特征构建的预测模型在训练及验证队列中均表现出良好的区分度（AUC>0.75）。
讨论与结论
讨论部分指出，LILRB2作为髓系细胞特异性免疫检查点，其高表达通过促进TAMs向M2型极化并抑制T细胞效应功能，构成HCC免疫逃逸的重要机制。与T细胞表面PD-1不同，LILRB2靶向TAMs可能为克服ICIs耐药提供互补策略。研究还提出LILRB2表达可作为预测免疫治疗疗效的潜在生物标志物，但需前瞻性临床研究进一步验证其临床应用价值。结论部分明确：该研究系统揭示了LILRB2在HCC免疫微环境中的促肿瘤作用，证实其阻断可恢复抗肿瘤免疫，并支持LILRB2作为HCC免疫治疗新靶点及疗效预测标志物的可行性，为开发针对髓系免疫检查点的联合治疗策略奠定了实验基础。
